淋病奈瑟菌分离株3种药物耐药基因检测

目的:从基因水平了解淋病奈瑟菌对青霉素类、四环素类、喹诺酮类3种抗菌药物的耐药状况。方法:采用聚合酶链反应PCR对常州地区的50株淋病奈瑟菌进行TEM-1基因、tetM基因检测并对gyrA基因的DNA进行测序分析。结果:50株淋病奈瑟菌中32株TEM-1基因阳性,24例tet基因阳性,经PCR扩增和DNA测序,gyrA基因全部存在突变,PPNG-TRNG-QRNG3种分子检测发现青霉素类、四环素类与喹诺酮类二重耐药分别占26%和10%,耐多种药物MDR菌株总数已达74%。结论:淋球菌对青霉素类、四环素类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性已相当高,迫切需要寻找新的敏感抗菌药物。

新生儿肺炎链球菌分离株头孢菌素耐药与pbp2B、murM基因突变研究

目的了解分离自新生儿的肺炎链球菌pbp2B、murM基因突变状况与头孢菌素耐药情况。方法用PCR法检测8株肺炎链球菌pbp2B、murM突变基因。结果8株肺炎链球菌均检出pbp2B突变基因。murM基因获得3种不同的序列,与美国国立生物信息中心(NCBI)已登录的序列均不同。结论pbp2B突变基因并不一定导致头孢菌素耐药,murM基因突变可致青霉素高水平耐药和头孢菌素耐药。

头孢噻肟与阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的联合药敏研究

目的研究头孢噻肟(CTX)与阿奇霉素(AZI)联合用药对临床分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,用微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对32株临床分离的金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(M IC),并计算抑菌指数(FIC)以判断联合效应。结果CTX与AZI联用后金黄色葡萄球菌M IC明显下降,抗菌作用显著增加。对金黄色葡萄球菌主要为相加和协同作用,协同作用为12.50%,相加作用为68.75%,无关作用为18.75%,无拮抗作用。结论CTX与AZI联用对临床分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌效应增强,联合应用是合理的。

新生儿肺炎链球菌苯唑西林耐药与pbp2B基因突变分析

目的了解新生儿肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae,SP)青霉素耐药基因突变及体外苯唑西林耐药状况。方法对分离自新生儿呼吸道的20株肺炎链球菌用纸片扩散法(K-B法)进行青霉素耐药性试验,用套式聚合酶链反应(nPCR)扩增PbP2B基因,对PCR产物进行DNA测序。结果20株肺炎链球菌体外苯唑西林耐药,耐青霉素PbP2B基因突变为点突变,分A、B两类各占95%和5%。结论新生儿肺炎链球菌耐青霉素株pbp2B基因突变类型与DUPLESSIS等报道的不完全相同应引起高度重视。

头孢噻肟与阿奇霉素对大肠埃希菌的联合药敏研究

目的:研究头孢噻肟(CTX,β-内酰胺类抗生素)与阿奇霉素(AZI,大环内酯类抗生素)联合用药,对临床分离的大肠埃希菌的体外抗菌效应。方法:应用微量肉汤稀释法,采用棋盘法设计,测定不同浓度组合的抗菌药物对25株临床分离的大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC),并计算抑菌指数(FIC)判断联合效应。结果:头孢噻肟与阿奇霉素联用对大肠埃希菌表现为协同和相加作用,协同作用为35.7%,相加作用为57.1%,无关作用为7.1%,无拮抗作用。结论:头孢噻肟与阿奇霉素联用对临床分离的大肠埃希菌的体外抗菌效应增强。

专项整治后我院住院患者抗菌药物使用量与大肠埃希菌耐药率的变化及其相关性分析

目的:为指导临床抗菌药物合理应用提供参考。方法:从全国抗菌药物临床应用监测网提取我院2012年1月-2016年12月(抗菌药物专项整治后)住院患者的抗菌药物使用相关数据,统计各类抗菌药物及抗大肠埃希菌(E.coli)药物的用药频度(DDDs);统计同期E.coli的检出、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及耐药情况;采用Pearson检验考察抗菌药物DDDs与E.coli耐药率的相关性。结果:2012-2016年,我院住院患者使用DDDs最高的抗菌药物类别为头孢菌素类,其次为头霉素类和大环内酯类。抗菌药物的总DDDs基本呈下降趋势,但2016年略有反弹。2013年以后,大部分类别抗菌药物的DDDs与总DDDs的变化趋势基本一致;而青霉素类与β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂、头霉素类、碳青霉烯类、糖肽类药物的DDDs基本呈上升趋势。2012年,第二代头孢菌素是头孢菌素类药物中DDDs最高的一类;而从2013年起,第一代头孢菌素成为该类药物中DDDs最高的一类。抗E.coli药物包括哌拉西林钠他唑巴坦钠、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、美罗培南、庆大霉素、左氧氟沙星;2012年DDDs最高的是头孢曲松,而2016年则是头孢西丁;氨曲南的使用量减少最明显。2012-2016年,分别检出E.coli 110、132、104、131、243株;细菌产ESBLs率有所下降,分别为56.6%、57.0%、50.6%、48.4%、45.0%。E.coli对氨苄西林、头孢唑林、头孢曲松、复方磺胺甲噁唑的耐药率较高,对哌拉西林钠他唑巴坦钠、头孢西丁、亚胺培南、阿米卡星的耐药率较低;对哌拉西林钠他唑巴坦钠的耐药率与头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢菌素类(第一、三代头孢菌素)、四环素类、喹诺酮类药物的DDDs和总DDDs呈正相关(r为0.880~0.929,P<0.05);对头孢他啶的耐药率与头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢菌素类(第一、二、三代头孢菌素)、四环素类、喹诺酮类药物的DDDs和总DDDs呈正相关(r为0.888~0.991,P<0.05);对头孢吡肟的耐药率与氨基糖苷类药物的DDDs呈正相关(r=0.901,P<0.05);对庆大霉素的耐药率与青霉素类与β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂、头孢吡肟的DDDs呈负相关(r分别为-0.914、-0.921,P<0.05);对亚胺培南的耐药率与头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢菌素类(第一、二、三代头孢菌素)、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类药物的DDDs和总DDDs呈负相关(r为-0.994^-0.878,P<0.05);对所有抗E.coli药物的耐药率均与其各自的DDDs无关(P>0.05)。E.coli产酶率与对庆大霉素的耐药率呈正相关(r=0.955,P<0.05),而均与对其他药物的耐药率或DDDs无关(P>0.05)。结论:经抗菌药物专项整治后,我院住院患者抗菌药物的总使用量基本呈下降趋势,结构亦有较大变化;耐药情况虽较为严峻,但细菌产酶率有所下降。临床仍应结合细菌耐药情况监测数据、药敏试验结果、抗菌药物使用量与耐药率的相关性等因素,慎重选择敏感的抗菌药物,以减少细菌耐药的发生。

肺炎链球菌新生儿分离株转座酶基因遗传标记的研究

目的了解常州地区新生儿呼吸道分离到的肺炎链球菌(Sp)接合型转座子存在状况。方法采用PCR扩增技术对新生儿病房分离到47株Sp菌进行转座酶基因遗传标记——intTn916/Tn1545转座酶基因检测。结果47株Sp菌中39株(83.0%)携带intTn916型或/和Tn1545转座酶基因。结论Tn916型和Tn1545型接合型转座子可携带多种耐药基因,本组Sp菌中intTn916/Tn1545转座酶基因高检出率,揭示了Sp菌获得多重耐药性的遗传学特征。Sp菌通过转座酶基因获得并传播耐药基因,在耐药中起重要作用。

肺炎克雷伯菌新生儿医院感染分离株耐药性及β-内酰胺酶CTX-M基因检测

目的了解新生儿医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株的耐药性及β-内酰胺酶CTX-M耐药基因的存在状况。方法对表型确认证实产ESBLs肺炎克雷伯菌进行药敏试验并用PCR扩增检测CTXM基因。结果14株产ESBLs肺炎克雷伯菌药敏结果一致,耐三代头孢和耐酶抑制剂,均检出CTX-M基因。结论随着CTX-M酶分布日渐广泛,有必要对其进行深入研究,了解不同的产CTX-M酶菌株耐药水平之差异。

新生儿医院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌感染分离株耐药性及基因类型检测

目的了解新生儿医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株的耐药状况及β-内酰胺酶编码基因TEM、SHV、OXA、PER、GES、VEB、CTX型存在状况。方法将我院2004年7月新生儿病房感染的14株肺炎克雷伯菌用全自动微生物鉴定和药敏分析配套卡进行抗生素敏感性检测和ESBLs检测,并采用聚合酶链反应及序列分析方法分析菌株内的超广谱β-内酰胺酶基因型。结果14株产ESBLs的肺炎克雷伯菌药敏结果一致,氨苄西林、头孢曲松、头孢唑林、头孢他啶均耐药对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/三唑巴坦也耐药,对亚胺培南敏感。均检出blaCTX-M和blaTEM基因,未检出blaSHV、blaOXA、blaPER、blaGES和blaVEB基因。对blaTEM和blaCTX-M基因扩增产物测序,经BLAST程序分析基因为TEM-1和CTX-M-3型。结论本院感染流行的ESBLs肺炎克雷伯菌耐第三代头孢菌素和耐酶抑制剂,基因类型为TEM-1和CTX-M-3。新生儿属于ESBLs的高危人群,新生儿病房产超广谱β-内酰胺酶菌感染应引起各方关注。

新生儿血培养的病原菌及耐药性分析

目的分析常州市妇幼保健院新生儿血培养标本各种病原菌分布情况及主要病原菌的耐药特点。方法采用双相血培养瓶进行血培养,分离所得菌株用VITEK 32全自动微生物分析仪进行菌种鉴定和药物敏感性试验。结果血培养结果以革兰阳性菌为主,占70.6%,其中以表皮葡萄球菌为主;革兰阴性杆菌占28.4%。革兰阳性球菌对万古霉素均敏感;革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗菌药物高度敏感。结论应该重视新生儿血流感染病原菌耐药性检测,根据血培养药物敏感性试验结果选用敏感抗菌药物,可减少细菌耐药性的产生,提高临床治疗效果。

新生儿肺炎链球菌分离株对红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解新生儿肺炎链球菌(SPN)临床分离株对红霉素耐药状况和红霉素耐药基因. 方法对2003年12月～2004年5月从常州市妇幼保健院新生儿病房呼吸道感染患者中分离到的20株SPN,用K-B法进行了红霉素药物敏感试验,用PCR检测了与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因(erm)、主动外排转运基因(mefA). 结果 20株SPN红霉素药敏试验17株耐药(85%),3株敏感;erm基因PCR检出20株阳性(100%)、mefA 基因PCR检出17株阳性(85.0%). 结论本地区SPN中因存在红霉素核糖体甲基化酶基因,红霉素主动外排转运体而致红霉素耐药;本研究20株肺炎链球菌erm 或(和)mefA基因阳性率高达100%,红霉素药敏试验与耐药基因检测均提示红霉素已不是治疗新生儿SPN感染的有效药物.

淋病奈瑟球菌药敏检测及耐药分子机制研究

目的 :从表型和基因型水平了解常州地区淋病奈瑟球菌 (Ng)流行株对青霉素、四环素和环丙沙星耐多药 (MDR)状况 ,并为筛选其治疗药物提供依据。方法 :以纸片扩散法进行青霉素、四环素、环丙沙星和大观霉素 4种药物的敏感性检测 ;以套式 聚合酶链反应 (nested PCR)及PCR技术进行TEM 1基因、TetM基因检测和gyrA基因、penA基因PCR加DNA测序分析。结果 :①常州地区Ng对青霉素、四环素、环丙沙星表型耐药分别为 6 5 .5 %、5 3.0 %和 73.3% ;基因耐药分别为 78.2 %、5 3.3%和 1 0 0 %。而对大观霉素较为敏感 (97.6 % )。② 5 0株Ng均存在 gyrA基因双位点突变。③ 2株药敏检测结果为青霉素耐药 ,但 β内酰胺酶、TEM 1基因均为阴性的Ng都存在penA基因突变。④基因研究发现 :常州地区青霉素、四环素、环丙沙星三重耐药占 38% ,青霉素与环丙沙星 ,四环素类与环丙沙星二重耐药分别占 2 6 %和 1 0 % ,即MDR菌株总数已达 74 %。结论 :在常州地区青霉素、四环素、环丙沙星对淋病的治疗作用已较差 。

阿奇霉素与头孢噻肟对肺炎克雷白杆菌联合药敏研究

目的:研究阿奇霉素与头孢噻肟对30株临床分离肺炎克雷白杆菌的联合抗菌效应。方法:采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定。测定不同浓度组合的两种抗菌药物对30株肺炎克雷白杆菌的最低抑菌浓度,计算FIC指数,并观察两药不同加药顺序对效应的影响。结果:阿奇霉素与头孢噻肟联合应用后对肺炎克雷白杆菌的浓度-累积抑菌百分率均比单独应用有较大提高。FIC指数结果表明,阿奇霉素与头孢噻肟联合应用后对肺炎克雷白杆菌20%为协同作用,63%为相加作用,10%为无关作用,7%为拮抗作用。先后联用与同时应用抗菌效应无显著性差异(P>0.05)。结论:一般情况下,对临床分离肺炎克雷白杆菌,阿奇霉素与头孢噻肟联合应用是合理的。

50株淋病奈瑟菌喹诺酮耐药决定区的DNA测序研究

目的 从基因水平了解淋病奈瑟菌 (NeisseviaGonorrhoeae ,NG )对喹诺酮类药物的耐药状况。方法 对收集自常州地区的 5 0株NG喹诺酮作用靶位酶 (DNA回旋酶 )GyrA基因进行PCR检测 ;并对喹诺酮耐药决定区 (quinoloneresis tance—determingregion ,QRDR )进行测序研究。结果 5 0株NG菌经GyrA基因扩增均出现 372bp清晰明亮的荧光带 ,其产物经双脱氧末端终止法测序经与 (gi:5 2 940 7)序列比对 ,5 0株NG菌均存在第 91位和第 95位密码子的突变 ,第 91位密码子均由TTC→TCC ;第 95位密码子由GAC→GGC、GCC和AAC三种形式。结论 本文基因研究显示喹诺酮类抗生素对我国淋病的治疗已失去作用 。

淋病奈瑟菌青霉素、四环素耐药的分子检测

淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae,NG)的青霉素、四环素耐药表型研究(即药敏分析)国内已有较多文献报导.但不同的药敏检测方法其检出率的差异颇大.NG对青霉素、四环素耐药多数分别为获得TEM基因和Tet M基因的质粒所致.为精确了解常州地区NG对青霉素、四环素的耐药状况,我们应用以TEM基因为靶基因的套式聚合酶链反应(nested Polymerase Chain Reaction,nPCR)和以Tet M基因为靶基因的PCR技术对分离自常州地区的50株NG进行了分析检测,现将结果报告如下.

新生儿科细菌耐药性调查及抗菌药物使用分析

本研究对我院新生儿科2009年1～12月的细菌耐药性和抗菌药物使用情况进行统计分析,现报告如下。资料与方法菌株来源：我院2009年1～12月新生儿科送细菌室的阳性临床标本中分离并进行药敏试验的病原菌株。