小鼠黑色素瘤细胞外泌体促进成纤维细胞表达Rac1蛋白

目的:探讨小鼠黑色素瘤细胞外泌体对成纤维细胞表达Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)蛋白的影响。方法:超高速离心法分离小鼠黑色素瘤B16-F10细胞外泌体,电镜负染色观察外泌体的形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)测定外泌体的粒径分布,Western blot鉴定外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,Tsg101)和酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-related protein 2,Tyrp2)的表达;激光共聚焦显微镜观察在共培养过程中小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)摄取外泌体的过程;免疫细胞化学染色和Western blot实验分析MEF表达Rac1蛋白的情况。结果:B16-F10细胞外泌体在电镜下呈典型茶托状形态,NTA测得其粒径范围在141~255 nm,Western blot测出其标志蛋白Tsg101和Tyrp2。激光共聚焦显微镜观察结果显示,与共培养0 h相比,共培养12 h的MEF内有少量的外泌体,且共培养24和36 h的MEF内聚集了大量的外泌体。Western blot结果表明,与共培养0 h相比,共培养24和36 h的MEF中Rac1蛋白表达水平显著增加(P<0. 01)。免疫细胞化学染色结果表明,与共培养0 h相比,共培养12、24和36 h的MEF中Rac1蛋白阳性表达水平显著增加(P<0. 05或P<0. 01)。结论:小鼠黑色素瘤细胞外泌体可促进成纤维细胞表达Rac1蛋白。

细胞外囊泡RNA的多样性特征

细胞外囊泡是一类可携带蛋白质、核酸、脂质等内含物的新型细胞间通讯介质。可向邻近及远处细胞传递生物信息分子,调控受体细胞正常生理及病理发展过程。在肿瘤发生与发展、疾病的诊断治疗、细胞分子生物学研究等方面发挥着越来越重要的作用。作为基因表达的重要调节剂,RNA是细胞外囊泡中一类丰富的内含物,且细胞外囊泡RNA种类繁多,分布及分类水平不等,对其的研究极具挑战性。该文重点讨论细胞外囊泡RNA的多样性特征,由此回顾细胞外囊泡RNA的研究进展。

不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡miRNA组分的影响

胞外微囊泡(microvesicle,MV)通讯与微囊泡内容物组成相关。不同制备方法所获得的胞外囊泡具有差异性。该文分析了不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡MV大小和miRNA组分的影响。分别以12 000×g、50 000×g、100 000×g超速离心的方法分离纯化小鼠d 3.5囊胚细胞胞外MV;粒度仪检测MV的粒径范围;荧光定量PCR进行MV的miRNA基因表达检测。结果显示,12 000×g离心力所制备的MV平均粒径是(444.5±258.7)nm,含有333个miRNA;50 000×g的MV平均粒径是(237.0±178.0)nm,含有339个miRNA;100 000×g MV平均粒径是(164.8±56.5)nm,含有335个miRNA。微囊泡的尺度和miRNA组分与离心力相关,不同离心力所获得的MV所含的miRNA种类及相同miRNA的丰度有差异。因此,不同离心力影响所制备小鼠囊胚MV大小和miRNA的组分。