艰难梭菌快速分子诊断方法的建立

目的建立用于快速检测艰难梭菌感染的聚合酶链式反应(PCR)和环介导等温扩增(LAMP)方法。方法收集有艰难杆菌感染症状患者的粪便样品,经CCFA选择性培养基筛选和VITEK MS飞行时间质谱仪分析获得艰难梭菌菌株;利用BLAST分析得到艰难梭菌特异性基因,以此为模板建立、优化并验证艰难梭菌PCR检测和LAMP检测方法。结果筛选得到3株产毒艰难梭菌,经数据分析获得艰难梭菌的两个特异性基因FliM和假定蛋白基因(hypothetical protein)。分别建立Flim基因的PCR检测方法和检测假定蛋白基因的LAMP方法,检测下限均达到了100个质粒/μl,且无非特异性扩增。结论 PCR法和LAMP法成本低,快速灵敏、特异性好,可用于艰难梭菌感染的快速检测。