分子生物学实验教学改革探索

针对分子生物学的实验教学中遇到的问题,分别对实验活动开展、学生实验技能培养方式提出了设想,初步探讨师范院校分子生物学实验教学改革的新思路。

restin及其位点缺失体的表达载体构建、表达及分析

目的构建人restin及其核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)、酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinaseⅡ,CKⅡ)作用位点缺失体基因rt1、rt2的真核表达载体并检测其在非洲绿猴肾细胞COS-7中的表达。方法应用RT-PCR方法从体外培养的人胚肾细胞HEK293的mRNA中扩增出restin及其缺失体基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)3×flag,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染COS-7细胞,Western blot检测restin、rt1、rt2的表达及其亚细胞定位情况,从而确定功能位点缺失是否影响了Restin的核定位。结果测序证实PCR扩增得到的restin、rt1、rt2基因编码区序列正确;脂质体法转染COS-7细胞后检测到预期目的蛋白的表达。截取NLS/CKII位点阻滞了Restin的细胞核定位。结论成功构建了restin及其缺失体基因的真核表达载体并使其在COS-7细胞中表达并检测到功能结构域的缺失引起蛋白Restin的核定位变化。