AOM/DSS小鼠结肠DNA甲基化/去甲基化酶的动态变化及救必应加败酱草的干预

目的:检测氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠小鼠结肠炎癌病理进程中DNA甲基化转移酶和DNA去甲基化转移酶的动态变化,探讨结肠炎相关结肠癌(CAC)的发病机理及中药干预机制。方法:采用腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)+三个循环自由饮用葡聚糖硫酸钠(DSS水)建立结肠炎相关结肠癌小鼠模型,实时定量PCR(real time PCR)检测结肠炎相关结肠癌模型小鼠不同病理阶段结肠组织DNMT3a、TET3、TDGmRNA表达;采用Western blot法检测上述组织对应蛋白表达水平。结果:5周时(病理:炎症),模型组甲基化酶DNMT3A表达降低而去甲基化酶TET3、TDG表达升高;8周时(病理:中重度异型增生和腺癌形成),模型组甲基化酶DNMT3A表达升高而去甲基化酶TET3表达降低,去甲基化酶TDG表达仍升高。经救必应+败酱草(15g/kg)或柳氮磺吡啶(0.75g/kg)治疗后,5周时DNMT3a表达升高而TET3、TDG表达降低,8周时DNMT3A表达降低而TET3表达升高,TDG表达降低。结论:DNA甲基化/DNA去甲基化平衡的改变可能与结肠炎相关结肠癌模型小鼠由炎症向癌变转化的过程有关;救必应+败酱草、柳氮磺吡啶均可在一定程度上逆转这种DNA甲基化/DNA去甲基化平衡的改变,从而可能干预结肠炎-癌病理进程。

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠肠道NLRP3炎性体的调控研究

目的:观察三硝基苯磺酸(TNBS)溃疡性结肠炎大鼠病理形态、结肠黏膜NLRP3炎性体蛋白表达、mRNA及其相关因子IL-18、IL-33的表达,从而揭示其可能的作用机制。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)复制溃疡性结肠炎模型,60只大鼠随机分为6组,即正常组,模型组,柳氮磺砒啶(SASP)阳性对照组,溃结灵高、中、低剂量组。连续治疗10天后,采集粘膜样本。观察大鼠病理形态学变化,采用蛋白质印迹法和荧光定量PCR检测大鼠结肠组织NLRP3、ASC、caspase-1蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测大鼠结肠粘膜中IL-18、IL-33的含量。结果:模型组大鼠出现不同程度的体重减轻、结肠缩短和结肠质量增加,病理结果显示固有层崩解,出血、溃疡形成,毛细血管扩张、充血,肌层及外膜内大量急慢性炎症细胞浸润。溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6g/kg)剂量组和柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)上述情况较模型组明显减轻。与正常组比较,模型组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白和mRNA表达显著增高;与模型组比较溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6 g/kg)剂量组、柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达均显著减少,溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)剂量组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白表达均显著减少,溃结灵低(4.6 g/kg)剂量组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白表达有下降趋势但无统计学意义;与正常组比较,模型组IL-18、IL-33的表达水平明显升高,溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6 g/kg)剂量组和柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)IL-18、IL-33的含量明显低于模型组。结论:溃结灵治疗UC的作用机制可能与抑制NLRP3炎性体各组分蛋白和mRNA表达的表达,并下调结肠黏膜IL18、IL33的含量,使得炎症缓解从而发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。