半乳糖上调内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平抑制巨噬细胞活性

目的探究半乳糖对人原代肺动脉内皮细胞上唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin 9,Siglec-9)聚糖配体表达的影响及作用机制。方法采用流式细胞术确定内皮细胞表面Siglec-9聚糖配体的表达并鉴定该聚糖配体末端糖苷键类型;分别用左旋葡萄糖、葡萄糖、N-乙酰基葡萄糖、甘露糖、N-乙酰基甘露糖、半乳糖、唾液酸、蔗糖处理内皮细胞48 h,采用流式细胞术检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体的表达;将内皮细胞分为对照组和半乳糖组(n=3),Western blot、流式细胞术、免疫荧光分析半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达的影响;α2-3,6,8唾液酸酶处理内皮细胞后,Western blot检测半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体恢复时间的影响;半乳糖处理内皮细胞后,Western blot检测分析细胞内唾液酸合成关键酶(GNE、NANS、NANP、CMAS、NPL以及ST3Gals)表达水平,并用RT-qPCR验证相关蛋白的mRNA表达;siRNA敲低NANP、CMAS及ST3Gal-Ⅲ,Western blot检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平变化;巨噬细胞与内皮细胞共培养实验分析Siglec-9聚糖配体的增加对巨噬细胞的凋亡与吞噬能力的影响。结果内皮细胞上表达有Siglec-9聚糖配体且该配体为末端结构为α2-3连接的唾液酸糖蛋白;与对照组比较,半乳糖组内皮细胞上该聚糖配体表达水平显著增加(P<0.01),但半乳糖的添加对该配体的自我恢复时间无影响;与对照组比较,半乳糖处理的内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),且RT-qPCR验证结果与其一致;抑制内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ的表达后,内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平下降(P<0.01)。共培养实验中,与未处理组比较,半乳糖处理的内皮细胞促进巨噬细胞凋亡增加(P<0.01),并导致其吞噬能力减弱(P<0.05)。结论半乳糖通过NANP-CMAS-ST3Gal-Ⅲ通路上调内皮细胞上Siglec-9聚糖配体水平,从而抑制巨噬细胞活性。

缺氧下调血小板表面Siglec-9聚糖配体导致血小板功能异常活化

目的探讨血小板表面Siglec-9聚糖配体表达水平在缺氧条件下的变化及其对血小板活化功能的影响。方法鉴定血小板表面表达的Siglec-9/E聚糖配体,并加入唾液酸酶处理血小板,分为对照组和唾液酸酶组;对24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠和血小板进行缺氧处理,分为对照3 d组、缺氧3 d组、对照7 d组和缺氧7 d组(n=6);将健康志愿者全血分离提取血小板放置于缺氧箱,分为对照组、缺氧48 h组、唾液酸神经节甘脂(Ganglioside GT1b,GT1b)组和奥司他韦组(n=3)。采用流式细胞术检测血小板上Siglec-9/E配体、神经氨酸酶1(Neuraminidase-1)等表达,以及二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶刺激后血小板活化标记物CD62p的表达水平;利用髓系细胞条件性6只6~8周龄雄性Siglec-E基因敲除小鼠(Lyz2-cre:Siglec-E^(flox/flox))血小板验证Siglec-E对血小板活化的抑制作用。结果相对分子质量约为130×10^(3)的Siglec-9/E配体在血小板表面广泛表达且具有唾液酸末端的聚糖结构;与对照7 d组相比,缺氧7 d组小鼠外周血血小板上该配体表达显著降低18.03%(P<0.05),CD62p表达在ADP、胶原和凝血酶刺激下显著增高(P<0.01),缺氧48 h组培养的血小板上该聚糖配体出现了相同改变(P<0.01);与野生型比较,敲基因小鼠血小板在ADP、胶原和凝血酶刺激下CD62p水平显著增高(P<0.01);Siglec-9/E特异性配体GT1b处理能够逆转缺氧导致的血小板异常活化(P<0.05);神经氨酸酶抑制剂能够阻断缺氧导致的Siglec-9配体表达降低(P<0.05)。结论缺氧激活NEU1降低Siglec-9/E聚糖配体表达,减弱了Siglec-9/E途径抑制血小板活化的能力,导致血小板功能异常活化。

自体造血干细胞移植治疗伴TP53突变的SHH亚型儿童髓母细胞瘤2例并文献复习

髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)属于小脑胚胎性肿瘤之一,是儿童发病率最高的一种恶性中枢神经系统肿瘤,约占所有儿童中枢神经系统肿瘤的20%[1]。目前MB的标准治疗是手术后联合全脑全脊髓放疗和辅助全身化疗,标危组MB患者经过规范治疗5年无事件生存(event-free survival,EFS)率为70%~80%,但高危组患者5年EFS率仅为40%~50%,约半数高危患者在5年内复发,且上述患者一旦复发,长期生存率小于20%。因此,探索适合高危MB患者的治疗模式,是提高MB患者总体生存率的重要方向。