邻苯二甲酸单丁酯通过Caspase-3/GSDME通路诱导睾丸间质细胞焦亡

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)诱导睾丸间质细胞(TM-3细胞)焦亡及其可能的发生机制。方法用浓度为0、2.5、5、10 mmol·L^(-1) MBP(对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组)染毒对数生长期细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态学变化;微量酶标法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的释放率;荧光显微镜检测PI阳性细胞比例;Western blot检测焦亡相关蛋白Caspase-3、GSDME的相对表达水平。将对数生长期的TM-3细胞暴露于浓度梯度(0、2.5、5、10、20μmol·L^(-1))的Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO中24 h,CCK-8法检测细胞活力,确定Ac-DEVD-CHO染毒剂量。Ac-DEVD-CHO作用于细胞验证MBP诱导TM-3细胞焦亡的机制。结果与对照组相比,各染毒组细胞LDH的释放率、PI阳性细胞比例以及Caspase-3和GSDME蛋白的相对表达水平均升高(P均<0.05)。当Ac-DEVD-CHO浓度为5.0μmol·L^(-1)时,细胞存活率为99.17%(P>0.05),并且中剂量+抑制剂组的细胞存活率较中剂量组升高(P<0.01)。确定抑制剂的干预浓度为5.0μmol·L^(-1)。并且中剂量+抑制剂组的LDH的释放率、PI阳性细胞比例以及Caspase-3和GSDME蛋白的相对表达水平较中剂量组下降(P均<0.05)。结论MBP可以通过Caspase-3/GSDME通路诱导睾丸间质细胞焦亡。