知母黄柏药对对肥胖症大鼠模型降脂作用的实验研究

目的探讨不同剂量的知母黄柏药对(ZB)对高脂饲料诱导肥胖症大鼠的降脂作用及其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠62只,随机分为正常组12只,造模组52只。正常组给予普通饲料喂养,造模组以高脂饲料喂养24周;造模第21周,将造模组大鼠随机分为模型组,知母黄柏药对高、中、低剂量组(3.00,1.00,0.33g·kg^(-1)·d^(-1)),盐酸吡格列酮阳性药组(5.25mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组各10只。正常组与模型组灌服等体积蒸馏水,其他实验组相应处理,持续22天,于24周末处理大鼠,取血清及肝组织,测量血清甘油三酯(TG),胆固醇(CHO)及总胆汁酸(TBA)水平变化,观察肝组织病理变化(HE染色)。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TG、CHO含量均显著升高(P<0.01),血清TBA含量也显著升高(P<0.05);与模型组比较,知母黄柏高剂量组及知母黄柏中剂量组TG、TBA水平均显著降低(P<0.01),盐酸吡格列酮组TG水平显著降低(P<0.05),知母黄柏低剂量组和盐酸吡格列酮组TBA水平显著降低(P<0.01),组织病理显示,知母黄柏药对使各剂量组大鼠肝细胞脂肪变性、气球样变及炎症的程度明显减轻。结论知母黄柏药对不同剂量对肥胖症均具有良好的预防和治疗的作用,其机制可能与改善脂质代谢,调节胆汁酸代谢等有关。

基于网络药理学的知母黄柏药对防治糖尿病的作用机制研究

目的探讨知母黄柏药对治疗糖尿病的作用机制。方法通过使用中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选知母和黄柏的活性化学成分,通过TTD和OMIM搜索糖尿病靶点。采用Cytoscape3.7.1软件构建知母黄柏药对-活性化学成分-靶点网络图,将有交集靶标上传到STRING数据库,构建蛋白互作网络图(PPI),并通过DAVID数据库对靶点进行KEGG PATHWAY通路富集分析和Gene Ontology生物学过程富集分析。结果知母黄柏药对-活性化学成分-靶点网络图得到45个活性化学成分作用于89个靶点,主要作用靶点为PTGS2、TNF、PI3K、TLR4,而靶点主要关联糖尿病胰岛素抵抗、胰岛素信号通路、胰高血糖素信号通路、炎症通路和Ⅰ、Ⅱ型糖尿病通路,这些信号通路揭示了知母黄柏药对治疗糖尿病的潜在作用机制。结论从多成分、多靶点、多途径揭示了知母黄柏药对治疗糖尿病的潜在作用机制,为进一步深入研究知母黄柏药对治疗糖尿病作用机制提供了重要的科学和理论依据。

基于转录组学和蛋白质组学分析小檗碱抗糖尿病慢性炎症机制

目的:通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,应用转录组学和蛋白质组学技术探究小檗碱抗糖尿病慢性炎症机制。方法:RAW264.7细胞通过LPS(0.1μg·mL^(-1))诱导,给予小檗碱(1μg·mL^(-1)),分别提取蛋白和RNA,进行蛋白质组学和转录组学分析,分别找出差异表达蛋白和差异表达基因,并进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并运用STRING进行绘制相互作用图(PPI),对共同差异表达蛋白和基因进行实时荧光定量PCR进行验证。结果:通过模型组与小檗碱组相比较,转录组学共有1801个差异表达基因,找出11种差异表达基因Pdia4,Itgam,Hsp90b1,Prdx5,Pdia6,Myc,Fosl1,Il10,Ccl2,Lpin2,Pik3r2与炎症相关;蛋白质组学共得到83个差异表达蛋白,找出10个差异表达蛋白Hsp90b1,Pdia6,Prdx5,Pdia4,Itgam,Stat1,Pgm2,Ptgs1,Nos2,Actb与炎症相关;共同差异表达蛋白和基因共有5个。结论:小檗碱可能是通过减少炎症因子释放,同时减少Hsp90b1,Pdia6,Prdx5,Pdia4,Itgam,PTGS1,NOS2和IL^(-1)0及增加Pik3r2和LPIN 2基因的生成来达到抗炎作用,进一步缓解异常代谢和胰岛素抵抗以及减轻内质网氧化损伤来治疗糖尿病。

黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-ay小鼠肝组织炎症作用与TRAF6、IL1α、NF-κB2、RSK1、RSK2蛋白表达下调相关

目的采用蛋白质组学方法探讨黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-Ay小鼠肝组织的炎症作用机制。方法从2型糖尿病模型组和黄芩黄连药对组KK-Ay小鼠肝组织中提取全蛋白,使用nano-LC-LTQ/Orbitrap MS检测差异蛋白,使用Proteome Discoverer软件鉴定蛋白,Sieve软件对肝组织蛋白进行数据分析处理,并通过DAVID数据库KEGG pathway、String等生物信息学方法筛选相关差异蛋白。结果经蛋白质组学研究共发现,模型组与黄芩黄连药对组间存在与肝组织炎症相关的差异蛋白,包括TRAF6(肿瘤坏死因子受体相关因子6)、IL-1α(白细胞介素1α)、NF-κB2(核因子-κB2)、RPS6KA1(核糖体蛋白S6激酶α1)等。经DAVID和KEGG通路分析,这些差异蛋白主要参与炎症相关信号通路。结论黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-ay小鼠肝组织炎症作用与TRAF6、IL-1α、NF-κB2、RSK1、RSK2蛋白表达下调相关。该研究为黄芩黄连药对临床用于防治代谢性疾病提供了实验依据。

葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎作用相关的差异蛋白筛选

目的采用nano-LC-LTQ/Orbitrap-MS蛋白质组学技术筛选鉴定炎症模型RAW264.7细胞模型组与葛根芩连汤含药血清组差异表达蛋白,推测葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用机制。方法取对数生长期且状态良好的细胞进行实验,细胞分为模型组和中药组,以0.1μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞24h建立炎症模型,中药组给予10%葛根芩连汤含药血清+10%空白血清,模型组给予20%空白血清共同干预24h后收集细胞蛋白。BCA法测定蛋白浓度,再对蛋白进行变性、还原、烷基化、酶解及脱盐处理,利用nano-LC-LTQ/Orbitrap-MS分析检测,利用Xcalibur软件和Proteomediscoverer1.4进行数据处理,运用SIEVEv 2.1(×64)进行无标定量分析寻找相关差异蛋白,筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析和绘制网络互作图。结果葛根芩连汤含药血清组与模型组差异表达蛋白共1424个,经生物信息学分析筛选出4个与NASH相关的差异表达蛋白,其中2个上调蛋白(脂素3、低密度脂蛋白受体),2个下调蛋白(一氧化氮合酶3、丝裂原激活蛋白激酶14)。GO分析显示差异表达蛋白主要涉及氧化应激调控,代谢通路调节等生物过程。网络互作图显示MAKP14在NASH疾病中具有重要作用。结论通过有效的比较分析,得到了一些与NASH密切相关的差异表达蛋白,为研究葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎的分子机制提供了新靶点。