bglS基因的亚克隆及功能分析

带有枯草杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因(bglS)7.1kb的EcoRI片段,经亚克隆,将1.5kb的EcoR I-Pst I酶切片段插入pUC19的polylinker上,转化E.coli JM101后合成出β-1,3-1,4葡聚糖酶,它能专一性地降解大麦β-1,3-1,4葡聚糖和地衣多糖,酶的大部分(>50%)留在胞内,其中25%分泌到胞外。根据酶特性分析,大肠杆菌中合成的β-1,3-1,4葡聚糖酶完全与出发菌株枯草杆菌相同。

酵母与大肠杆菌穿梭定点突变载体系统的构建及应用

利用可以在大肠杆菌中形成单链又可以在大肠杆菌和酵母中穿梭的质粒BFDl9作为寡聚核苷酸介导的定点突变载体,分别在大肠杆菌和酵母中获得了预定的TRP1基因突变体,再利用这个带TRP1突变的质粒BFD25和BFD19,建立了一个在酵母系统中进行定点突变时可以富集突变体的筛选方法。借助这种方法我们在酵母系统中完成了人表皮生长因子基因表达单元的寡聚核苷酸介导的缺失突变,此突变载体系统在酵母与大肠杆菌中都适用,而且可以直接在酵母细胞中进行突变表型的研究。

水稻核DNA来源的带有自主复制功能的高度重复序列的分离及鉴定

以酵母整合型质粒YIP5-Km为载体,从HindⅢ消化的水稻(珍山97不育系)DNA中分离到一些在酵母细胞中能自主复制的DNA片段(Autonomously Replication Sequence,简称ARS).其中ARS2为4.0 kb,ARS7为14.2 kb. 用Southern杂交证明它们来源于水稻的核DNA,而且它们在水稻核DNA中是高度重复序列.文中还对ARS2和ARS7进行了亚克隆分析,结果表明ARS2的三个亚克隆片段ARS2-1,ARS2-2,ARS2-3都是高度重复序列,而且ARS2-2,ARS2-3还具有ARS功能;ARS7的三个亚克隆片段中只有ARS7-1是高度重复序列但无ARS功能,ARS7-3有ARS功能但不是高度重复序列.

水稻DNA的自主复制序列的分离及鉴定

以酵母整合型质粒YIP5为载体,用“鸟枪法”从水稻IR26的总DNA中分离到7个能在啤洒酵母细胞中进行自主复制的DNA片段(Autonomously Replicating Sequence,简称ARS).这些重组质粒都能以高频率转化Ura^-的酵母品系8534-8c.除一例外,带有这些质粒的酵母细胞都不稳定,并生长缓慢,表现出典型的ARS质粒性.将最小的单一插入片段——ARS8从胶上回收,纯化后用^(32)p标记作为探针,与水稻总DNA的酶切片段进行杂交得到单一的杂交带,证明了本实验分离到的ARS8的来源.

具有自主复制功能的水稻高度重复序列ARS2的结构和功能分析

对一个水稻珍汕97A不育系核DNA来源的具有自主复制功能的高度重复顺序片段ARS2（全长4270bp）进行了亚克隆构建和测序，获得了它的全顺序．该片段富含AT（69％），有2个ARS核心顺序（A／TTTTAPuTTTA／T），7个类核心顺序，其上下游20～50bp内有TNTPuAA的ARS特征顺序；并分析得出它的2个ARS功能关键区域（分别长400bp和360bp）．同时，还首次发现了具有较高多态性的水稻微卫星DNA（AT）n．