基于转录组测序的关岭牛肌肉生长发育关键基因筛选与鉴定

【目的】基于转录组测序挖掘出贵州关岭牛肌肉生长发育关键基因,为后续培育贵州优质肉牛品种提供理论依据。【方法】选取3头健康且体重相近的24月龄成年关岭牛,屠宰后采集其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、大腿肌及肩峰等组织样品,采用TRIzol法提取各组织总RNA,构建cDNA文库后进行转录组测序,通过生物信息学手段筛选出不同样品间的差异表达基因(DEGs),结合GO功能注释分析和KEGG信号通路富集分析挖掘出关岭牛肌肉生长发育相关候选基因,再经实时荧光定量PCR对候选基因进行验证。【结果】测序样品有效序列(Clean reads)比对至参考基因组序列的平均比对率为90.76%,检测到26367个新转录本(有编码潜能的转录本19659个,非编码转录本6708个);在各组织中检测到共表达基因53912个,其中已知基因51688个、预测新基因2224个;GO功能注释分析发现这些共表达基因主要发挥生物调节、代谢过程、生物膜组成、催化活性和转录调节活性等功能。通过DEGseq检测,最终筛选获得16个与肌肉生长发育相关的DEGs(QKI、CHKB、MYBPC1、MBNL1、MYH11、MYLK2、TPM3、NEXN、EZH2、TNNT3、PPARGC1A、SGCA、DMPK、FOXP1、FLNB和TNS2),主要参与内吞作用、心肌收缩、癌症、代谢及MAPK信号通路。实时荧光定量PCR验证结果显示,筛选出的16个DEGs在关岭牛背最长肌或肩峰中高表达,与转录组测序结果一致。【结论】基于转录组测序从关岭牛各组织中筛选出16个与肌肉生长发育相关的DEGs,主要在生物调节、代谢过程、细胞成分、催化和转录调节等方面发挥功能作用,可作为开展关岭牛肌肉生长发育遗传机制研究的候选基因。

MyoD基因在畜禽生产中的研究进展

生肌决定因子(MyoD)在动物肌肉特异性基因转录调控中起总开关作用,能够调节多种类型细胞系转分化为成肌细胞,与畜禽的产肉性能、屠宰性能以及生长性状密切相关,在改善畜禽胴体瘦肉率、肉品质以及生长发育方面具有重要意义。该文综述了猪、牛、羊等家畜MyoD基因组织差异表达、遗传多态性与生产性能关联等方面的最新研究进展,旨在较全面地掌握MyoD基因的结构、功能及其在畜牧领域的开发利用,以期为良种畜禽的选育提供参考依据。

贵州黑山羊不同肌肉组织FASN基因表达与肌内脂肪含量相关性分析

为探究FASN基因在贵州黑山羊不同肌肉组织中调控脂肪沉积的作用,采集12月龄公、母贵州黑山羊胸肌、背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌,运用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测FASN基因表达量,酸水解法测定肌内脂肪(IMF)含量,并通过Pearson分析FASN基因表达量与IMF含量相关性。结果显示,FASN基因在公、母羊不同组织中表达量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌>背最长肌,其中公羊臂股二头肌显著高于背最长肌,母羊臂股二头肌极显著高于背最长肌;相同组织比较,母羊胸肌、肱三头肌、臂股二头肌表达量均高于公羊,背最长肌表达量低于公羊,但均未达到差异显著水平。IMF含量测定发现,公、母羊4个组织中IMF含量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌≥背最长肌,同性别各组织之间比较差异不显著;相同组织比较,母羊4个组织中IMF含量均高于公羊。FASN基因表达量与IMF含量相关性分析表明,公、母羊FASN基因表达量与胸肌IMF含量呈正相关,与背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌IMF含量呈负相关。

贵州4个地方鸡种蛋品质比较分析

为探析赤水乌骨鸡、兴义矮脚鸡、黔东南小香鸡和瑶山鸡4个贵州地方鸡种蛋品质差异,进一步挖掘贵州地方鸡产蛋性能,试验随机选取在相同饲养管理条件下的4个鸡种产蛋初期和产蛋高峰期鸡蛋各60个进行蛋品质测定及性状指标相关性分析。结果表明:品种内比较,4个鸡种产蛋高峰期的蛋黄指数、蛋白高度、哈氏单位、蛋壳厚度和蛋壳强度显著(P<0.05)或极显著高于初产期(P<0.01);品种间比较,产蛋初期瑶山鸡哈氏单位、蛋壳颜色显著高于同时期的黔东南小香鸡(P<0.05),蛋形指数显著高于赤水乌骨鸡(P<0.05),但其蛋黄颜色显著低于其余3个鸡种(P<0.05)。产蛋高峰期赤水乌骨鸡蛋黄指数、颜色与其余3个鸡种呈显著性差异(P<0.05)。相关性分析显示有8对指标之间存在显著或极显著相关,其中蛋重与蛋白高度、哈氏单位呈显著和极显著正相关(P<0.01),与蛋黄颜色、蛋壳强度极显著负相关(P<0.01);蛋壳厚度与蛋壳强度呈极显著正相关。研究结果表明不同品种鸡的蛋品质有着不同的遗传潜能及潜在研究价值,为贵州省地方鸡种种质资源保护和开发利用提供理论数据支撑。

种公猪精液品质候选基因的研究进展

在现代养猪业中,精液品质是检验种公猪生产性能的一项重要指标,包括精子的密度、活力、形态和DNA片段等参数,受雄性动物体内环境、外环境等多种因素影响,不同地方猪群体间存在一定差异。目前,通过常规方法来评定种公猪精液质量存在误差大、周期长以及效率低等问题,严重制约了养猪业的发展。因此,为进一步解析地方猪精子发生机制,改善其精液品质,可从分子遗传学角度进行深入探究。故该文综述了AKAP3、HSF1、WIP1、SPATA6和MTHFR基因在地方猪精液品质中的研究进展,以期为后续优质公猪的选育提供参考资料。

务川黑牛产业发展现状及保种建议

务川黑牛是分布于贵州省务川县的特色地方品种,该品种历史悠久,具有营养价值高,适应性强,耐寒耐湿等优点,在实际生产中,务川黑牛被广泛用于役用和肉用。近年来,随着农村务农人数减少以及农业机械化率的提高,务川黑牛的存栏数量从1996年的4.5万头下降至2023年的1000头左右。因此,为更好地保护务川黑牛品种,维护贵州地方牛品种的多样性、系统性和完整性,该文从务川黑牛产业发展现状、研究现状和存在的问题出发,深入分析该品种在养殖和保种过程中遇到的挑战,并提出保种建议,为保护务川黑牛品种资源和推进产业发展提供理论支撑。

贵州省牛羊产业屠宰加工环节的现状、问题及对策

本文从产业生产、市场需求、屠宰加工等3方面综合阐述了贵州省牛羊产业屠宰加工环节现状,旨在为贵州省牛羊屠宰加工业的发展提供技术支撑。调查研究表明,贵州省牛羊产业屠宰加工环节中存在市场需求大、养殖规模小,家庭作坊多、认证企业少,标准化建设滞后、自动化水平较低,产品多样化不足、同质化严重,品牌辐射局限、盈利空间较小等问题,由此提出在养殖规模化上求突破,保障原料供给;在产业集聚化上求突破,盘活加工资源;在生产标准化上求突破,提升产品质量;在价值最大化上求突破,增加产业附加值;在营销品牌化上求突破,推动牛羊出山等对策建议。

赤水乌骨鸡PPP3CA基因多态性与生长性状关联分析

【目的】探究PPP3CA基因对赤水乌骨鸡生长性状的影响,为赤水乌骨鸡的遗传改良和分子育种提供依据。【方法】以赤水乌骨鸡为研究对象,采用PCR扩增和直接测序技术对其PPP3CA基因全部外显子进行多态位点筛选,运用RNAfold WebServer和Structural Bioinformatics Group在线软件预测PPP3CA蛋白质二级结构和三级结构,计算基因频率、基因型频率、纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量,并对Hardy-Weinberg平衡状态进行分析;采用SPSS对不同多态位点所对应的基因型与体尺指标进行相关性分析。【结果】在外显子7处发现C29T、T50C和T63G位点共3个错义突变位点,外显子16处发现1个错义突变位点G720A;χ2检验表明上述几个基因座均偏离Hardy-Weinberg平衡状态;C29T位点的CC型显著提高个体的体重、骨盆宽和胸围;T50C位点的CC型显著提高个体的体重、胫长和龙骨长;T63G位点的TT型显著提高个体的胫长和龙骨长;G720A位点的AA型极显著提高个体的胫长和龙骨长,CC型显著提高个体的体斜长。C29T位点的CC型、T50C位点的CC型、T63G位点的TT型和G720A位点的AA型均为优势基因型,但C29T和T50C位点的碱基突变为不利突变,而T63G和G720A位点的碱基突变为有利突变,且G720A位点更有利于赤水乌骨鸡生长,可作为赤水乌骨鸡分子标记辅助选育参考位点。【结论】本研究首次探讨PPP3CA基因与鸡生长性状的相关性,并在家鸡的PPP3CA基因外显子中发现4个多态位点,表明PPP3CA基因对赤水乌骨鸡生长性状具有一定影响,可作为赤水乌骨鸡分子标记辅助选育参考位点。研究结果可为今后赤水乌骨鸡的遗传改良育种提供参考依据,并为进一步研究鸡PPP3CA基因奠定了基础。

三穗鸭的养殖现状及相关研究进展

水禽的肉及副产品是人类主要蛋白质来源之一。三穗鸭具有产蛋量高、肉用性能好等优点,但其分子遗传机制未被解开。目前,对三穗鸭的研究主要包括遗传育种、肉质、疫病防控、生产性能、饲料添加剂等方面,并取得了一定研究成果。文章对三穗鸭的养殖现状、遗传育种、生长性能、疫病防控等方面的研究进展进行综述,以期为三穗鸭产业的发展提供参考。

SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析

旨在验证SMAD1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究SMAD1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qRT-PCR法检测SMAD1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑及卵巢组织的表达水平,PCR扩增黔北麻羊SMAD1基因CDS区,构建pEGFP-N3-SAMD1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-SAMD1重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达SMAD1试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇和孕酮的浓度,利用CCK-8法和Annexin V-FITC法检测超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测超表达SMAD1基因对SAMD1、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明,SMAD1基因在黔北麻羊各组织中均有表达。组间比较可知,卵巢和下丘脑组织单羔组极显著高表达于多羔组(P<0.01),输卵管组织中单羔组显著高表达于多羔组(P<0.05),其他组织未达到差异显著性(P>0.05)。本研究成功克隆了SMAD1基因CDS序列,未发现突变位点,并将pEGFP-N3-SAMD1重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞,转染试验组培养基中E2含量在12、48 h显著高于对照组(P<0.05),P4含量在12 h显著高于对照组(P<0.05);超表达SMAD1基因对细胞增殖在24 h达到显著促进作用(P<0.05),48、72 h达到极显著促进作用(P<0.01),并且发现超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的凋亡具有抑制作用,与SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖具有促进的结果是相符的。SMAD1基因超表达后繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达极显著降低(P<0.01)。综上表明,SMAD1基因超表达可提高E2、P4的生成,有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,也极显著抑制繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵。因此,SMAD1基因能够抑制这些基因的表达,致使黔北麻羊单羔组受胎率低,进而降低产羔数,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为SMAD1基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。

TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究

旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平;构建目的基因真核表达载体。培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞,并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞,检测培养基中雌二醇(E2)、孕酮(P4)的浓度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。随后,利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响。RT-qPCR结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达,且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组;免疫荧光法证实,所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞;TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后,在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时,能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达(P<0.01)。细胞增殖与凋亡结果显示,TGFβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡,抑制其增殖。酶联免疫吸附试验结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌,但对P4的分泌无显著影响。本研究成功构建了TGFβ2、PPP3CA基因真核表达载体,荧光定量结果表明,超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达,提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响。为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据。

INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊不同组织的表达研究

为探究抑制素(Inhibin,INH)α亚基(INHA)和βA亚基(INHBA)基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平及初步探明其对山羊产羔性状的影响,本实验以单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑和卵巢组织并提取总RNA,通过qRT-PCR技术对INHA、INHBA基因mRNA在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平进行检测。结果表明:INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量高于其他组织(P<0.01),在多羔组黔北麻羊卵巢中的表达量高于单羔组(P<0.01),INHA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>垂体>子宫>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>垂体>下丘脑>输卵管>子宫;INHBA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>子宫>垂体>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>子宫>输卵管>垂体>下丘脑。结果提示,INHA、INHBA基因主要调控单、多羔黔北麻羊母羊的卵巢组织,本研究为进一步探讨INHA、INHBA基因对山羊繁殖性能的影响机制及基因功能奠定基础。

黔北麻羊TGFβ2基因克隆、表达及生物信息学分析

为探究转化生长因子β2基因(Transforming Growth Factor beta 2,TGFβ2)在黔北麻羊性腺轴组织的表达水平和蛋白结构功能。本研究以健康成年黔北麻羊母羊为对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个组织并提取总RNA,逆转录合成cDNA第一链,使用RT-qPCR技术检测TGFβ2基因在黔北麻羊性腺组织中的差异表达;进一步使用RT-PCR法克隆黔北麻羊TGFβ2基因CDS区,并构建pMD-19T-TGFβ2亚克隆载体。克隆测序结果显示:通过RT-PCR法成功获得的黔北麻羊TGFβ2基因CDS区,包含1 329 bp,与NCBI上山羊TGFβ2基因序列相似度达到99.85%,共编码442个氨基酸;TGFβ2蛋白存在信号肽位点,且主要定位于细胞质的相对不稳定分泌蛋白;分子式为C2245H3535N615O662S25;遗传进化树分析得出,与9个物种相比较,黔北麻羊TGFβ2基因与绵羊和牛的遗传距离最近,与马和狗的遗传距离最远。RT-qPCR结果显示,TGFβ2基因在子宫组织中表达最高,极显著高于输卵管和下丘脑组织,显著高于垂体及卵巢组织。本实验完成了黔北麻羊TGFβ2基因T-克隆和蛋白结构的功能预测,揭示了TGFβ2基因在黔北麻羊性腺轴组织中的表达差异性,这为进一步探索TGFβ2基因对黔北麻羊繁殖性能的分子机制提供了基础数据。

努比亚山羊同期发情与定时输精方法探究

为探究4种同期发情处理方法在努比亚山羊中的应用效果以及不同处理方法在处理结束后的发情集中时间分布,本实验以冬、春两季234只努比亚山羊为研究对象,采用前列腺素(PG)+PG、海绵栓+PG、海绵栓+孕马血清促性腺激素(PMSG)、海绵栓+PMSG+PG 4种处理方法对其进行同期发情处理,从同期发情率、21 d返情率、24 h同期率、成本等方面对同期发情效果进行综合分析。结果表明:冬季的4个处理中,PG+PG处理同期发情率(89.58%)、21天返情率(18.60%)均略高于其他3种(P>0.05),成本仅为10元/只;4种处理方法发情时间主要集中在处理结束后25～48 h;海绵栓+PG法的同期发情率在春季高于冬季(92.61%>83.33%),21 d返情率则为春季低于冬季(12.77%<13.33%),24 h内同期率更高(72.22%>62.75%),发情时间主要集中在48～72 h。综上所述,PG+PG法更适用于生产实践,海绵栓+PG法可作为其辅助方法参考,最佳定时输精时间在处理完成后25～48 h(冬季)。

转录组测序筛选山羊妊娠早期胚胎附植相关基因

旨在通过胚胎附植前、后的山羊子宫角组织高通量测序筛选妊娠早期胚胎附植的关键基因。本研究选取2~4岁体重相近((44.76±3.49)kg)的经产努比亚母山羊16只,在同期发情-人工输精配种后的第15(D15)和第30天(D30)分别随机选取3只羊颈动脉放血处死。采集子宫角组织利用Illumina HiSeq进行高通量转录组测序(RNA-Seq),筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并对DEGs进行功能注释,基因功能查询进一步筛选与胚胎附植直接相关的调控基因,荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的基因进行表达量验证分析。D15和D30子宫角组织转录本比较分析发现了2000个DEGs,其中上调基因620个,下调基因1380个。GO功能聚类分析共分为3大类52组,其中细胞组分17组,生物过程23组,分子功能12组,获得细胞连接与增殖,生物粘附与调节,分子活性与转导等重要生物途径。以D15表达量高低为排序标准,从表达量最高的10个基因中筛选出了与胚胎附植有关的基因MGP和TAGLN;从上调和下调幅度最大的前10个差异表达基因中,获得参与妊娠相关糖蛋白合成与分泌的基因PAG-3、PAG-8、PAG-12,参与生长因子结合与生长激素释放激素受体活性相关基因GHRHR和胰岛素样生长因子结合蛋白基因IGFBP1。qRT-PCR结果显示,随机选取的6个基因在D15和D30子宫角中表达变化趋势与RNA-Seq结果一致。获得的基因MGP、TAGLN、PAG-3、PAG-8、PAG-12、GHRHR、IGFBP1在努比亚山羊胚胎附植中具有重要作用。

黔北麻羊TIMP1基因编码区的克隆、表达及生物信息学分析

为探究黔北麻羊基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因的表达水平和蛋白结构功能。本研究选取3岁两胎次的单、多羔健康黔北麻羊母羊各3只,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个组织并提取组织中的总RNA反转录为第一链cDNA,克隆了黔北麻羊TIMP1基因CDS区全长序列,对TIMP1蛋白的理化性质、蛋白质结构等进行预测分析,并进行同源性分析和系统进化树构建;同时采用qRT-PCR检测TIMP1基因mRNA在不同产羔性状的黔北麻羊性腺轴组织中的表达水平。结果发现:T-克隆的黔北麻羊TIMP1基因CDS区为624 bp,编码207个氨基酸,与NCBI上山羊mRNA序列相同;蛋白预测分析结果显示:黔北麻羊TIMP1蛋白的分子式为C1020H1581N283O291S19,相对分子质量为23.07364 ku,等电点为8.62,不稳定系数为64.5;遗传进化树分析得出,与其他9个物种相比较,黔北麻羊TIMP1基因与绵羊和牛的遗传距离最近;qRT-PCR结果显示,垂体、卵巢和输卵管在多羔组中的表达高于单羔组(P<0.01)。本研究揭示了TIMP1基因在单、多羔黔北麻羊5个组织中的表达差异性,对TIMP1基因的T-克隆和蛋白的结构功能预测也丰富了相关研究数据,为进一步探索黔北麻羊产羔性状的分子机制提供参考。

黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RARRES1)基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示,RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组(P<0.01)。生物信息学分析表明,黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸,RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白,蛋白质二级结构分析显示,其主要是由α-螺旋与无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构分析一致;同源性以及系统进化树结果显示,黔北麻羊RARRES1基因序列与绵羊、牛的同源性高、遗传距离近,与鸡的同源性最低、遗传距离最远。经双酶切、测序验证后,表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功。将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后,与空白对照相比,重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RARRES1与BMPR-IB的表达量(P<0.01)。在各干扰载体中,重组质粒pGPH1/GFP/Neo-RARRES1-4的抑制效率最好,能够显著与极显著下调RARRES1与BMPR-IB mRNA在卵泡颗粒细胞中的表达量(P<0.05,P<0.01)。本研究克隆了黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析。将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化。结果表明,RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用,为进一步探究RARRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据。

黔北麻羊StAR基因的克隆、生物信息学分析及在单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达

本文旨在克隆获得黔北麻羊StAR基因编码序列并进行生物信息学分析,探究其mRNA在单、多羔黔北麻羊母羊不同组织中的表达水平,初步了解StAR基因对山羊产羔性状的影响机制。实验采用逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及生物信息学在线软件对实验样本和数据进行分析。结果显示:黔北麻羊StAR基因序列全长858 bp,共编码285个氨基酸,存在多个氨基酸的磷酸化位点。高级结构分析显示黔北麻羊StAR蛋白质二级结构主要由无规则卷曲与α-螺旋构成,三级结构预测结果与二级结构分析结果一致,同源性与系统进化树显示黔北麻羊StAR基因编码序列与绵羊的同源性最高,与鸡的同源性最低。qRT-PCR结果显示StAR基因mRNA在单、多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量最高,在子宫组织中的表达量最低,两者之间差异极显著,且StAR基因在多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于单羔黔北麻羊。本研究为进一步研究黔北麻羊StAR基因的功能及其对产羔性状的调节机制提供了基础数据。

黔北麻羊PPP3CA基因克隆、生物信息学分析及不同组织表达研究

为克隆获得黔北麻羊PPP3CA基因的编码序列进行生物信息学分析并探究PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本实验应用RT-PCR克隆PPP3CA基因的CDS区序列,构建pMD19-T-PPP3CA亚克隆载体,用实时荧光定量PCR法检测黔北麻羊PPP3CA基因在心、肝、脾、肺、肾、背最长肌6个组织中的表达水平。结果显示:黔北麻羊PPP3CA基因CDS区序列全长为1 566 bp,编码521个氨基酸,理论等电点为5.58;黔北麻羊PPP3CA蛋白属亲水性、非跨膜蛋白,二级结构分析显示其主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构结果相符。黔北麻羊PPP3CA基因核苷酸序列与绵羊同源性最高;PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中均有表达,在背最长肌组织中表达量极显著高于其他组织,背最长肌组织表达量极显著高于其他组织。本实验揭示了PPP3CA基因在黔北麻羊的表达差异并初步分析了其生物学功能,为进一步探究PPP3CA基因对山羊的生长发育奠定基础。

CD81、CCL26基因在黔北麻羊不同性腺组织中的表达研究

CD81和CCL26基因是影响哺乳动物性腺细胞融合的重要因子,但其在黔北麻羊性腺组织中的表达情况尚不清楚。为研究CD81和CCL26基因在黔北麻羊不同组织中的表达量,本实验以单、多羔黔北麻羊为研究对象,提取下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢组织的RNA,并将5种性腺组织RNA逆转录合成第一链cDNA,随后采用q-PCR技术检测CD81、CCL26基因的mRNA在单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达水平。结果表明:黔北麻羊性腺组织中CD81、CCL26基因的mRNA均有表达,2种基因均在单、多羔卵巢中的表达量最高;CD81基因在单羔组子宫中的表达量最低;CD81基因在多羔组、CCL26基因在单多羔组下丘脑中的表达量均最低;组间差异表达量分析可知,CD81基因在多羔组子宫的表达量显著高于单羔组;CCL26基因在单羔组卵巢和输卵管的表达量显著高于多羔组,在单羔组子宫的表达量极显著高于多羔组。本实验结果提示,CD81和CCL26基因可能与山羊繁殖能力相关,也为初步揭示山羊繁殖的分子调控机制提供了参考依据。