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PRV闽A株gE基因抗原编码区片段在昆虫细胞中的表达研究 被引量:3
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作者 敖敬群 王瑾雯 +2 位作者 陈新华 王珣章 龙綮新 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期76-79,共4页
伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E是一种在伪狂犬病的根除计划中具有重要作用的糖蛋白。将伪狂犬病病毒闽A株gE基因抗原编码区片段克隆到杆状病毒Bac_to_Bac系统表达载体pFastBacHTa中,获得的重组表达载体pFastBacHTa_FS转化大肠杆菌DH10BA... 伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E是一种在伪狂犬病的根除计划中具有重要作用的糖蛋白。将伪狂犬病病毒闽A株gE基因抗原编码区片段克隆到杆状病毒Bac_to_Bac系统表达载体pFastBacHTa中,获得的重组表达载体pFastBacHTa_FS转化大肠杆菌DH10BAC感受态细胞后,得到的重组BacmidDNA在脂质体介导下转染粉蚊夜蛾Hi5细胞,通过细胞内同源重组,获得了含目的片段的重组病毒。此重组病毒感染Hi5细胞后72h,细胞总蛋白的SDS_PAGE与Western_Blot结果表明,gE基因抗原编码区片段在Hi5细胞中得到了正确表达,表达产物约35000,占细胞总蛋白的9 31%。溶解性分析显示该片段在Hi5细胞中为不可溶性表达。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因抗原编码区片段 杆状病毒 Bac-to-Bac表达系统 基因表达
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的克隆与序列测定 被引量:3
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作者 敖敬群 娄高明 +4 位作者 杨林 杜伟贤 龙綮新 王珣章 谢明权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期492-495,共4页
用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到 pMD18-T载体后 ,转化大肠杆菌XL 1-blue菌株。重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较 ,确证含有PRV闽A株 gE基因... 用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到 pMD18-T载体后 ,转化大肠杆菌XL 1-blue菌株。重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较 ,确证含有PRV闽A株 gE基因的表位抗原编码区。此区段与PRVRice株相应区段的DNA序列同源性为 97 3% ,氨基酸序列同源性为 94 7%。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因表位抗原编码区 序列测定 PCR扩增 基因克隆
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段在Pichia pastoris中的表达 被引量:1
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作者 敖敬群 王瑾雯 +3 位作者 陈新华 王珣章 龙綮新 娄高明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期629-633,共5页
伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SM... 伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SMD116 8后 ,得到多株酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL .经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定 ,最后得到高效表达 gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL 7.工程菌 72h培养上清的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示 ,gE基因去信号肽片段表达产物大小约为 80ku ,比预期的 6 3 8ku大 .凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明 ,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 13 4 9% ,表达量可达 11 7mg/L .间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 闽A株 GE基因 信号肽 表达
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PRV广东株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定
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作者 敖敬群 娄高明 +2 位作者 杨林 龙綮新 王珣章 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期115-117,共3页
根据伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株gE基因的序列设计并合成了 1对引物 ,以我国PRV地方毒株广东株的基因组DNA为模板 ,通过PCR方法获得了一大小约 1 6kb的DNA片段 ,并将其克隆到pMD18_T载体上进行测序 .序列测定结果显示 ,该片段长 16 6 5bp ... 根据伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株gE基因的序列设计并合成了 1对引物 ,以我国PRV地方毒株广东株的基因组DNA为模板 ,通过PCR方法获得了一大小约 1 6kb的DNA片段 ,并将其克隆到pMD18_T载体上进行测序 .序列测定结果显示 ,该片段长 16 6 5bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与PRVRice株gE基因的核苷酸序列同源性为 97 7%,氨基酸序列同源性为 95 9% 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因去信号肽片段 PCR扩增 序列分析 基因克隆 序列测定
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利用真核表达载体构建表达PRV闽A株gE基因表位抗原编码区片段的重组质粒
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作者 敖敬群 娄高明 +2 位作者 杨林 杜伟贤 王章 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期14-16,共3页
根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与两种真核表达载体pPICZaA、pAcGP6 7A的序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这 2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP... 根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与两种真核表达载体pPICZaA、pAcGP6 7A的序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这 2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP6 7A载体 ,转化大肠杆菌TOP 10菌株及XL1_Blue菌株 ,获得了含伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pPICZaA_FS与pAcGP6 7A_FS。序列测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因表位抗原编码区 重组质粒
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人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文) 被引量:4
6
作者 陈新华 敖敬群 +3 位作者 杨林 龙綮新 王珣章 陈曲侯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期423-427,共5页
人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同... 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL 展开更多
关键词 人白细胞介素-12基因 巴斯德毕赤酵母细胞 LiCl二次转化 活性表达
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定 被引量:1
7
作者 娄高明 敖敬群 +2 位作者 杨林 杜伟贤 王珣章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-570,共3页
根据已经发表的伪狂犬病病毒 (PRV) Rice株的 g E基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,通过 PCR方法扩增到了PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,并克隆到 p MD18- T载体中 ,转化大肠杆菌 XL1- blue菌株。重组质粒 p MD18... 根据已经发表的伪狂犬病病毒 (PRV) Rice株的 g E基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,通过 PCR方法扩增到了PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,并克隆到 p MD18- T载体中 ,转化大肠杆菌 XL1- blue菌株。重组质粒 p MD18- T- FL经酶切和 PCR鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,重组质粒 p MD18- T- FL含有PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,长 16 74bp。序列比较分析表明 ,此区段与 PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为 97.5 % ,氨基酸序列同源性为 94.8% 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 GE基因 去信号肽片段 基因克隆 序列测定 PCR
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大黄鱼(Larimichthys crocea)IL-10基因的克隆与表达分析 被引量:7
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作者 郑维兵 慕鹏飞 +4 位作者 丁连帅 杨思司 敖敬群 艾春香 陈新华 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期50-60,共11页
白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)是一种抗炎细胞因子,可以抑制机体免疫反应。本研究经过分析大黄鱼基因组数据库发现了IL-10同源基因,并对其cDNA编码区序列和基因组DNA序列进行了克隆分析。大黄鱼IL-10(LycIL-10)基因由5个外显子和... 白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)是一种抗炎细胞因子,可以抑制机体免疫反应。本研究经过分析大黄鱼基因组数据库发现了IL-10同源基因,并对其cDNA编码区序列和基因组DNA序列进行了克隆分析。大黄鱼IL-10(LycIL-10)基因由5个外显子和4个内含子构成,其序列全长1 869bp,其开放阅读框(ORF)长555bp,编码184个氨基酸,其N端的22个氨基酸残基为预测的信号肽,成熟肽由162个氨基酸残基组成,包含了脊椎动物IL-10标志性保守序列。LycIL-10的氨基酸序列同其他已知物种的IL-10氨基酸序列的一致性为26.49%~77.01%。Real-time PCR分析发现LycIL-10在检测的组织中为组成型表达,在脾脏和肌肉中转录水平相对较高。三联灭活细菌疫苗和聚肌苷酸胞苷酸(poly(I∶C))刺激后,大黄鱼头肾和脾脏中LycIL-10mRNA的转录水平会显著升高,表明LycIL-10可能参与抑制大黄鱼由细菌和病毒引起的炎症反应。 展开更多
关键词 大黄鱼 白细胞介素10 分子克隆 实时定量PCR 表达分析
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一株深海中等嗜热嗜酸菌的分离及鉴定 被引量:3
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作者 漆辉洲 陈红 +2 位作者 敖敬群 周洪波 陈新华 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页
从太平洋热液区样品中分离纯化到一株中等嗜热嗜酸菌,命名为TPY。文中对该菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列以及亚铁和单质硫氧化活性进行了研究。TPY菌株为短杆状,革兰氏阳性菌,大小为(0.3~0.5)μm×(1~3)μm;... 从太平洋热液区样品中分离纯化到一株中等嗜热嗜酸菌,命名为TPY。文中对该菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列以及亚铁和单质硫氧化活性进行了研究。TPY菌株为短杆状,革兰氏阳性菌,大小为(0.3~0.5)μm×(1~3)μm;最适生长温度为50℃,最适生长pH值为1.8;该菌既能利用亚铁盐、单质硫自养生长,也能利用酵母粉、葡萄糖、蛋白胨和甘油等有机物异养生长;TPY菌与Sulfobacillus acidophilus(AB089842)的16S rDNA序列高度相似,其同源性为99%。这些结果表明,TPY菌是一株来自深海的嗜酸硫化芽孢杆菌(Sulfobacillus acidophilus),该菌的成功分离将有助于对太平洋热液区微生物种群结构的全面了解。同时,TPY菌对亚铁和单质硫的良好氧化能力显示出其在生物浸矿中的应用潜力。 展开更多
关键词 太平洋热液区 嗜酸硫化芽孢杆菌 16S RDNA 生物浸矿
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流行性造血器官坏死病毒(EHNV)PCR快速检测试剂盒的研制 被引量:3
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作者 黄辉三 李明玉 +2 位作者 母尹楠 敖敬群 陈新华 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期128-131,共4页
以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的... 以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的检测灵敏度相当于31个病毒粒子,模板制备时间约30 min,约4 h即可得到准确的结果;且无非特异性扩增带,适用于由EHNV病毒感染的鱼类苗种和水产品的检疫及水质环境的监测. 展开更多
关键词 生物技术 虹彩病毒 流行性造血器官坏死病毒(EHNV) PCR检测 试剂盒
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大黄鱼白细胞介素17受体E-like的分子特征及进化分析 被引量:3
11
作者 丁扬 敖敬群 +1 位作者 艾春香 陈新华 《应用海洋学学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期107-115,共9页
白细胞介素17受体(Interleukin 17 receptor,IL-17R)家族与IL-17细胞因子家族介导的各类反应有着密切联系.IL-17RE-like(IL-17REL)是一类最新发现的IL-17受体,其结构与IL-17RE相似,但尚未发现其配体.本研究克隆得到大黄鱼(Larimichthys ... 白细胞介素17受体(Interleukin 17 receptor,IL-17R)家族与IL-17细胞因子家族介导的各类反应有着密切联系.IL-17RE-like(IL-17REL)是一类最新发现的IL-17受体,其结构与IL-17RE相似,但尚未发现其配体.本研究克隆得到大黄鱼(Larimichthys crocea)IL-17REL(Lyc IL-17REL)的全长c DNA,其开放阅读框全长1 659个核苷酸,推断可编码一个由552个氨基酸组成的蛋白,含有信号肽、胞外段、跨膜区和胞内段.与其他物种的IL-17REL相似,Lyc IL-17REL蛋白的胞外段具有一个保守的FN I-like结构域,而胞内段缺少IL-17受体家族保守的SEFIR(SEF and IL-17R)结构域.多序列比对分析表明Lyc IL-17REL与日本河豚(Takifugu rubripes)IL-17REL的氨基酸序列同源性最高,序列一致性可达57.0%.系统进化分析表明,脊椎动物的IL-17受体家族可分为2类,IL-17RA/RB/RD为一类,IL-17RC/RE/REL为一类.其中鱼类及高等脊椎动物的IL-17REL与IL-17RE亲缘关系最近,并且推测二者可能是由同一基因从硬骨鱼类之前的物种中分化而来.组织分布表明Lyc IL-17REL在所有被检测的组织中为组成型表达,在黏膜相关组织如小肠和鳃中的表达量最高.大黄鱼受嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)诱导刺激后,Lyc IL-17REL在其头肾及鳃中的基因转录水平均显著上调.这表明Lyc IL-17REL可能在细菌感染引起的免疫反应中起着重要作用. 展开更多
关键词 海洋生物学 大黄鱼 IL-17RE-like 分子及表达特征 进化
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大黄鱼抗菌肽hepcidin在巴斯德毕赤酵母中的表达及其产物的抑菌活性 被引量:4
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作者 汪玉华 敖敬群 陈新华 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第3期383-389,共7页
Hepcidin是一类具有独特性质的小分子抗菌肽,克隆得到大黄鱼(Pseudosciana crocea)的hep-cidin基因(Lyc-Hepc),cDNA序列全长585个核苷酸,编码一个由85个氨基酸组成的蛋白,包含24个氨基酸的信号肽、35个氨基酸的前导肽和26个氨基酸的成熟... Hepcidin是一类具有独特性质的小分子抗菌肽,克隆得到大黄鱼(Pseudosciana crocea)的hep-cidin基因(Lyc-Hepc),cDNA序列全长585个核苷酸,编码一个由85个氨基酸组成的蛋白,包含24个氨基酸的信号肽、35个氨基酸的前导肽和26个氨基酸的成熟肽,成熟肽具有8个保守的半胱氨酸.将Lyc-Hepc 183bp的编码前导肽和成熟肽的前体肽(25aa-85aa)基因片段克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,然后电击转化巴斯德毕赤酵母SMD1168,经高浓度Zeocin筛选获得多个单克隆.挑取4个克隆进行培养,提取酵母基因组进行PCR检测,结果表明目的基因片段已成功整合到酵母菌SMD1168基因组中,获得酵母工程菌株SMD1168/pPICZα-Lyc-Hepc.SDS-PAGE和WesternBlot分析表明酵母工程菌株在0.5%甲醇诱导培养72h后,Lyc-Hepc在培养上清中得到了分泌型表达.体外抑菌实验表明重组Lyc-Hepc蛋白能够抑制2株水产养殖病害菌嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的生长.研究结果表明大黄鱼hepcidin可能在抗细菌免疫中发挥了作用. 展开更多
关键词 海洋生物学 大黄鱼 HEPCIDIN 酵母表达 抑菌活性
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一株抗植物致病真菌的深海霉菌的鉴定和活性成分理化性质分析 被引量:3
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作者 陈丽维 敖敬群 陈新华 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第3期390-395,共6页
从印度洋深海底泥中分离到一株真菌S2915,经ITS基因序列分析及显微形态观察,鉴定S2915为支顶孢属Acremonium sp.真菌.其发酵液对5株植物致病真菌有明显的抑制作用.经硫酸铵沉淀后的抗菌活性分析,可以初步判断该抗菌活性成分为蛋白类物质... 从印度洋深海底泥中分离到一株真菌S2915,经ITS基因序列分析及显微形态观察,鉴定S2915为支顶孢属Acremonium sp.真菌.其发酵液对5株植物致病真菌有明显的抑制作用.经硫酸铵沉淀后的抗菌活性分析,可以初步判断该抗菌活性成分为蛋白类物质,且最佳硫酸铵饱和浓度为70%(m/m).初步分析了该抗菌粗蛋白的理化性质,结果表明,该活性物质具有很好的耐热性,经60、80、100℃甚至121℃处理后,活性均无明显差异;耐强酸强碱,在pH值为2~12范围内活性不受影响;紫外照射0~12h及用蛋白酶K、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后,活性均没有减弱;但对多种有机溶剂比较敏感,经三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚和丙酮处理后,抗菌活性受到不同程度的抑制,其抑制率分别为35%、25.7%、22.9%、12.9%.证明该抗菌活性物质高效、稳定,可用于抗真菌农药的开发应用. 展开更多
关键词 海洋生物学 支顶孢属 植物致病真菌 硫酸铵沉淀 抗菌活性
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大黄鱼(Larimichthys crocea)CRFB13基因的克隆与表达分析 被引量:1
14
作者 杨思司 母尹楠 +2 位作者 丁连帅 陈新华 敖敬群 《应用海洋学学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期60-67,共8页
IFN-γ是哺乳动物的一个关键免疫调节因子,通过特异性地结合IFN-γ受体1(IFNGR1)和IFN-γ受体2(IFNGR2)组成的异源四聚受体复合物,来发挥其生物学功能.目前,在鱼类中已经克隆出IFNGR1基因的2个亚型:细胞因子受体家族B 13(CRFB13)和细胞... IFN-γ是哺乳动物的一个关键免疫调节因子,通过特异性地结合IFN-γ受体1(IFNGR1)和IFN-γ受体2(IFNGR2)组成的异源四聚受体复合物,来发挥其生物学功能.目前,在鱼类中已经克隆出IFNGR1基因的2个亚型:细胞因子受体家族B 13(CRFB13)和细胞因子受体家族B17(CRFB17).本研究从大黄鱼(Larimichthys crocea)中克隆得到了一个CRFB13基因(Lyc CRFB13),其开放阅读框全长1 158个核苷酸,编码由385个氨基酸组成的1个蛋白.Lyc CRFB13蛋白具有典型的II型细胞因子受体特征,包括1个信号肽、1个胞外的FN III-like结构域,1个单次跨膜结构域,以及胞内的JAK1和STAT1结合位点.氨基酸序列分析表明鱼类的CRFB13都具有JAK1和STAT1结合位点.系统进化分析表明鱼类的2种IFNGR1,CRFB13和CRFB17形成2个独立的分支,Lyc CRFB13和鱼类的CRFB13聚在一起,与雀鲷(Stegastes partitus)CRFB13的亲缘关系最近.组织分布显示Lyc CRFB13为组成型表达,在大黄鱼鳃中的表达量最高,而在小肠中的表达量最低.Poly(I:C)刺激后,大黄鱼鳃和头肾中CRFB13的mRNA转录水平都显著升高.此外,poly(I:C)和LPS还能够诱导大黄鱼头肾白细胞中Lyc CRFB13的表达,这些结果表明Lyc CRFB13可能在大黄鱼抗病毒、抗细菌免疫反应中发挥重要作用. 展开更多
关键词 海洋生物学 大黄鱼 IFN-γ受体 CRFB13 基因克隆 表达分析
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大黄鱼过氧化物酶Ⅳ在人胚肾细胞中的表达与抗氧化活性测定
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作者 王贤慧 母尹楠 +2 位作者 聂品 陈新华 敖敬群 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期492-498,共7页
为了研究大黄鱼(Pseudosciana crocea)peroxiredoxin Ⅳ(Lyc-Prx Ⅳ)在细胞内的抗氧化功能,构建了表达大黄鱼Prx Ⅳ的重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ,瞬时转染人胚肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting方法检测转染后的细胞样品中Lyc-Prx ... 为了研究大黄鱼(Pseudosciana crocea)peroxiredoxin Ⅳ(Lyc-Prx Ⅳ)在细胞内的抗氧化功能,构建了表达大黄鱼Prx Ⅳ的重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ,瞬时转染人胚肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting方法检测转染后的细胞样品中Lyc-Prx Ⅳ的表达情况,并通过测定细胞内过氧化氢浓度来评价Lyc-Prx IV的体内抗氧化作用.结果显示,Lyc-Prx Ⅳ可在转染重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ的HEK-293T细胞中表达,且细胞中A560处的吸光值在转染后6、12、24 h后分别为0.154、0.116以及0.162,而瞬时转染空载体p CMV后细胞样品在A560处的吸光值在转染后一直稳定在0.260左右,说明细胞中过氧化氢的浓度在转染后6、12、24 h时明显低于瞬时转染空载体p CMV细胞中的过氧化氢浓度(p<0.01).表明Lyc-Prx Ⅳ在生物体内可以分解过氧化氢,参与生物体内氧化还原状况的调控. 展开更多
关键词 海洋生物学 大黄鱼 过氧化物酶IV 细胞表达 过氧化氢
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大黄鱼IL-7Rα基因的克隆与表达分析
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作者 刘迎娣 赵群芬 +2 位作者 杨俊鹏 陈新华 敖敬群 《应用海洋学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期279-285,共7页
白细胞介素7受体α链(IL-7Rα,CD127)是一个重要的多效性细胞因子受体.本研究克隆得到大黄鱼(Larimichthys crocea)的IL-7Rα(LycIL-7Rα),其开放阅读框全长1 242 bp,编码413个氨基酸.通过氨基酸序列分析和多序列比对发现,LycIL-7Rα多... 白细胞介素7受体α链(IL-7Rα,CD127)是一个重要的多效性细胞因子受体.本研究克隆得到大黄鱼(Larimichthys crocea)的IL-7Rα(LycIL-7Rα),其开放阅读框全长1 242 bp,编码413个氨基酸.通过氨基酸序列分析和多序列比对发现,LycIL-7Rα多肽具有I型细胞因子受体的典型特征,包括4个保守的半胱氨酸、1个信号肽、1个单次跨膜结构域、1个胞外的fibronectin type III(FN IIIlike)结构域、1个Trp-Ser-X-Trp-Ser(WSXWS)基序以及胞内Box1结构域.系统进化分析表明,LycIL-7Rα与其他鱼类的IL-7Rα聚在一起,与鲈鱼(Lates calcarifer)IL-7Rα的亲缘关系最近.Realtime PCR结果表明,LycIL-7Rα在健康大黄鱼中为组成型表达,在脾脏中的表达量最高,在心脏中的表达量最低.大黄鱼经聚肌苷酸胞苷酸[Poly(I:C)]或溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)刺激后,其脾脏中LycIL-7Rα的mRNA转录水平均显著上调.这些结果表明LycIL-7Rα可能在大黄鱼免疫反应中发挥重要作用. 展开更多
关键词 海洋生物学 大黄鱼 白细胞介素7受体α链 分子克隆 实时定量PCR 表达分析
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Phenotypic and genetic characterization of a novel strain of Acidithiobacillus ferrooxidans(AF2) 被引量:1
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作者 刘倩 周洪波 +2 位作者 杨波 敖敬群 陈新华 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS 2011年第2期386-391,共6页
A comparative study on the phenotypic and genetic characteristics among Acidithiobacillus ferrooxidans (AF2),a typic strain ATCC23270 and a previously isolated strain AF3 was performed. AF2 can use ferrous ion (Fe2+) ... A comparative study on the phenotypic and genetic characteristics among Acidithiobacillus ferrooxidans (AF2),a typic strain ATCC23270 and a previously isolated strain AF3 was performed. AF2 can use ferrous ion (Fe2+) or elemental sulfur (S0) as sole energy source,but oxidizes S0 more effectively than Fe2+,which is different from ATCC23270 and AF3. The G+C content of AF2 is 51.8% (molar fraction),however,ATCC23270 and AF3 strains have G+C content of 63.7% and 64.8% (molar fraction),respectively. The DNA-DNA hybridization results show that AF2 has 41.53% and 52.38% genome similarity to ATCC 23270 and AF3,respectively,but AF3 has a high genome similarity of 89.86% to ATCC 23270 strain. Rusticyanin (rus) and subunit III of aa3-type cytochrome oxidase (coxC) genes are not detected in AF2,but Fe2+ oxidase (iro) gene can be detected. To understand the genomic organization of iro gene,a cosmid library of AF2 genome was constructed and iro gene-containing clone was screened. The sequencing result shows that although the nucleotide sequence of iro gene in AF2 is completely identical to that of ATCC 23270 strain,its genomic organization is different from that of ATCC 23270. In AF2,iro is located at downstream of purA gene,while it is located at downstream of petC-2 gene in ATCC 23270 strain. These results indicate that AF2 is a novel strain of A. ferrooxidans,and that phenotypic differences among the strains of A. ferrooxidans are closely correlated with their genetic polymorphisms. 展开更多
关键词 氧化亚铁硫杆菌 表型差异 遗传特性 新菌株 细胞色素氧化酶 ATCC DNA杂交 基因组
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鱼类模式识别受体的研究进展 被引量:5
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作者 敖敬群 陈新华 《生命科学》 CSCD 2012年第9期1049-1054,共6页
天然免疫(innate immunity)是基于对病原微生物成分的非克隆性识别而启动的快速防御反应。天然免疫系统可通过胚系编码的模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRR)识别恒定不变的病原基元,即病原相关分子模式(pathogen-associat... 天然免疫(innate immunity)是基于对病原微生物成分的非克隆性识别而启动的快速防御反应。天然免疫系统可通过胚系编码的模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRR)识别恒定不变的病原基元,即病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),启动信号级联转导,最终PRRs信号激活宿主免疫和前炎性基因的表达,引发针对所识别病原的免疫反应。目前PRRs主要分为5类,即C-型Lectins、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、视黄酸诱导基因I样受体(retinoic acid inducible gene I-like receptors,RLRs)、包含核苷酸结合区和亮氨酸富集区蛋白(the nucleotide-binding domain,leucine-rich repeatcontaining proteins,NLRs,也称NOD样受体)和最近发现的AIM样受体(absent in melanoma(AIM)-like receptors,ALRs)。近年来,随着5种鱼类基因组序列草图的完成,大量鱼类PRRs基因被发现,一些PRRs的配体特异性及其相关信号途径正在逐渐明晰。为此,将对鱼类Toll样受体(TLRs)、视黄酸诱导基因I样受体(RLRs)和NOD样受体(NLRs)的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 硬骨鱼类 天然免疫 模式识别受体 病原相关分子模式
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大黄鱼头肾细胞系瞬时转染方法的选择及优化
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作者 王贤慧 慕鹏飞 敖敬群 《生物技术》 CAS 2023年第3期287-292,321,共7页
[目的]为了选择适合大黄鱼头肾细胞(LYCK)的转染试剂并优化转染条件,用于开展后期大黄鱼细胞生物学研究。[方法]分别将LipofectamineTM2000、FuGENE HD、X-tremeGENE 9及X-tremeGENE HP与带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因的质粒pEG... [目的]为了选择适合大黄鱼头肾细胞(LYCK)的转染试剂并优化转染条件,用于开展后期大黄鱼细胞生物学研究。[方法]分别将LipofectamineTM2000、FuGENE HD、X-tremeGENE 9及X-tremeGENE HP与带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因的质粒pEGFP-N1转染LYCK细胞。[结果]48 h后通过倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况,发现4种转染试剂中X-tremeGENE HP的转染效果(转染效率~1%,细胞生存率>80%)优于其他三种(转染效率<1%,细胞生存率<50%)。在此基础上进一步优化转染条件发现:当DNA质量(μg)和X-tremeGENE HP体积(μL)的比例为1∶7时,转染效率~10%且细胞生存率>60%。转染试剂联用的方法证实,X-tremeGENE HP和LipofectamineTM2000联用转染效率(转染效率~3%)高于其他混合转染组(转染效率<1%)。[结论]综合考虑转染效果、细胞毒性及经济效益,选用X-tremeGENE HP作为转染介质,DNA质量与X-tremeGENE HP体积比例为1∶7时,能够在LYCK细胞中实现最佳转染效果,这一结果为在利用LYCK细胞开展大黄鱼相关免疫基因研究提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 大黄鱼头肾细胞 细胞转染 绿色荧光蛋白 瞬时转染
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