药用植物酒精浸提组方AEAMP9对肺癌A549细胞的抑制作用及机制

研究以体外培养的A549肺癌细胞为靶标,通过对124种可能与抗癌活性相关的植物源中药材酒精提取物的抗肿瘤作用规模化筛选,获得各中药材抗A549细胞活性的排序,研发了一种安全有效和新的抗肿瘤药用植物组方AEAMP9(获国家知识产权局发明专利授权)并探索其可能的分子作用机制。AEAMP9由白花蛇舌草、黄柏、甘草、侧柏、野菊花和羌活等6种常用中药材的酒精提取物配伍制备而成。研究发现,AEAMP9可以有效抑制A549的细胞活力、克隆形成与细胞迁移,并促进细胞凋亡。AEAMP9显著降低ABCG2、FoxM1、Vimentin、MMP14基因的表达和Bcl-2/Bax比值,促进凋亡相关基因p53、caspase 3、caspase 8、caspase 9的表达。网络药理学和细胞RNA转录组测序结果揭示:TNF、IL-17等与肿瘤、炎症、凋亡相关的重要信号通路受到调控,EGR1、IL-6、ALK、VEGF可能是AEAMP9-肺腺癌作用网络的关键调控靶点,AEAMP9中的活性成分槲皮素、山柰酚、木犀草素可能在其抗肿瘤活性中发挥重要的作用。AEAMP9对昆明小鼠无明显的急性毒性作用,其对A549细胞移植瘤小鼠模型肿瘤生长具有显著的抑制作用。

湖北后河国家级自然保护区短萼黄连的分子鉴定与分析

使用DNA条形码分子鉴定技术,对湖北后河国家级自然保护区野生黄连物种进行分子鉴定,为保护区黄连的种质资源保护及潜在开发利用提供前期工作基础。共收集湖北后河、四川峨眉等不同产地的黄连植株及其近缘物种12份,对其进行DNA提取,PCR扩增和测序;对实验样本和GenBank下载的序列进行多序列比对、BLAST分析和NJ系统发育树构建。共获得黄连及其近缘物种ITS2序列82条、psbA-TrnH序列24条。不同种属黄连分别聚类。其中,黄连、短萼黄连种内平均K2P遗传距离分别为0.017和0.008,黄连属间为0.051。结合形态学鉴定和中药材DNA条形码技术,不同种属的黄连可以很好地区分。成功鉴定湖北后河国家级自然保护区野生黄连物种为短萼黄连(Coptischinensis var.brevisepala),其ITS2、psbA-TrnH序列长度分别为200 bp和258 bp。

结合肽P201与5-氟尿嘧啶联合用药对肝癌HepG2细胞的协同杀伤作用及抗耐药分子机制

目的:采用多种方法探究FoxM1/mdr1信号调控的结合肽P201与5-氟尿嘧啶(5FU)联合用药对肝癌细胞HepG2的协同杀伤作用及抗耐药分子机制。方法:CCK-8法测定联合用药对HepG2细胞的抑制杀伤作用;吖啶橙/溴化乙锭(AO-EB)荧光双染、AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell细胞迁移实验检测HepG2细胞迁移能力;最后通过qRT-PCR和Western印迹检测HepG2细胞中FoxM1、mdr1和ABCG2等耐药相关基因在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果:联合用药[P201(45.0μg/mL)+5FU(100.0μg/mL)]作用48h抑制率达83.8%,作用24h的抑制率为77.8%,显著高于单独用药(P<0.001);流式细胞术检测联合用药细胞凋亡率达43.4%,而单独用药分别为19.4%、25.1%;联合用药在mRNA水平可显著下调HepG2细胞中的FoxM1、mdr1耐药基因,与蛋白水平结果一致;联合用药可显著抑制HepG2细胞的迁移。结论:联合用药对HepG2细胞有强的抑制杀伤作用,在促进细胞凋亡的同时可显著抑制HepG2细胞迁移,且通过下调FoxM1、mdr1和ABCG2等耐药基因和蛋白的表达,增加HepG2细胞对5FU的敏感性。提示P201可提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,减少抗癌药物的副作用。

“天然植物抗菌液”(PAMs)潜在抗SARS-CoV-2活性成分及机制

为探寻云南普洱丹州制药股份有限公司出品的“天然植物抗菌液”(PAMs)潜在抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的可能活性成分及作用机制,应用TCMSP、BATMAN和YaTCM数据库查找PAMs中植物药材来源的化学成分和作用靶点;通过GeneCards数据库获取冠状病毒靶点;Cytoscape作图构建“药材-成分-靶点-疾病”网络和潜在的靶点PPI网络;GO和KEGG富集分析预测PAMs的作用机制,并将PAMs主要活性成分与新型冠状病毒的关键蛋白进行分子模拟与对接。最后,以M13噬菌体为病毒模型,测定PAMs对噬菌体病毒的抑制作用。共得到166种PAMs中的药材活性成分、1007个药物靶点,调控新型冠状病毒的潜在作用靶点73个。构建的药材-成分-靶点-疾病网络中,靶点度数大于10的有PTGS2、PTGS1、PPARG、DPP4、CALM1、CASP3、RELA、BAX等。GO富集分析共得到2109个条目,主要包括细胞因子、蛋白磷酸化、免疫调节等;KEGG共富集到144条信号通路,排名前5的依次为人巨细胞病毒感染、TNF、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染、甲型流感以及乙型肝炎信号通路。分子对接结果显示,木犀草素、槲皮素、黄芩素与SARS-CoV-2的3CL水解酶(Mpro)、S刺突糖蛋白均呈现出强的结合能力;黄芩素、杨梅素、槲皮素与血管受体紧张素转化酶(ACE2)的结合能力强。PAMs对M13噬菌体的抑制测定显示,20%的PAMs对其抑制作用达到99%以上。PAMs可能通过多成分、多靶点、多通路作用于SARS-CoV-2,并且红花、紫草的主要活性成分槲皮素、黄芩素以及木犀草素与Mpro、ACE2以及S刺突糖蛋白均有较低的结合自由能,揭示其可能直接对COVID-19产生辅助治疗作用。

抗金黄色葡萄球菌中药材的筛选及其复方MW1810抗菌机制的初探

目的筛选抗金黄色葡萄球菌的中药材,并研究复方MW1810对金黄色葡萄球菌的抑制作用及机制。方法采用倍比稀释法确定111种中药材和MW1810的最低抑菌浓度(MIC);通过测定药物处理后菌液的相对电导率、碱性磷酸酶(AKP)的变化和扫描电子显微镜(SEM)的观察结果确定MW1810的抑菌作用;qRT-PCR分析特异基因的差异性表达探究药物作用的分子机制;动物实验探究MW1810对金黄色葡萄球菌感染的治疗作用。结果厚朴、黄芩和五倍子等单味药对金黄色葡萄球菌具有很强的抑制作用,组方MW1810对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床菌株的MIC值均为4.0 mg·mL^(-1)。MW1810处理金黄色葡萄球菌后,菌液的相对电导率和AKP活性均显著提高,表明菌壁膜破裂;经SEM进一步确证。qRT-PCR分析显示:MW1810可显著下调金黄色葡萄球菌的毒力基因(hla、agr、RNAⅢ)和ATP-binding cassette转运蛋白基因(SAR0144、SAR1073、SAR1928、SAR0306)的表达。MW1810对金黄色葡萄球菌感染的小鼠皮肤脓肿模型显示出显著的创口愈合作用,并降低了血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达。结论复方MW1810对金黄色葡萄球菌和MR SA具有较强的抗菌作用,其作用机制可能与菌体膜的破裂、毒力基因与转运蛋白的表达调控以及TNF-α、IL-6表达的下调有关。

紫芸解毒止痛酊中红花的质量控制及其促骨髓间充质干细胞增殖的作用

目的对紫芸解毒止痛酊(ZYD)中的关键药材红花进行DNA条形码和HPLC化学质量控制,并探究羟基红花黄色素A(HSYA)在促骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞增殖中的作用。方法采用ITS2 DNA条形码技术鉴定中药材红花并分析其与近缘物种的序列差异;HPLC法测定5个批次的ZYD中HSYA的含量;CCK-8法测定BMSCs的细胞相对增殖率。结果 ZYD中红花的ITS2序列与NCBI数据库结果一致,系统进化树构建后发现其与近缘物种各自聚类成分支;5个批次的HSYA含量分别为23. 72±0. 44、24. 49±0. 15、25. 23±0. 51、23. 52±0. 21、23. 44±0. 42μg·m L^-1(n=6),RSD分别为1. 87%、0. 65%、2. 06%、0. 89%、1. 82%;与对照组比较,CCK-8法检测到ZYD、HSYA、红花提取液(HH)组分处理BMSCs 48 h后细胞的相对增殖率均大于100%,有显著促进细胞增殖的作用。结论 ITS2 DNA条形码和HSYA可作为ZYD中关键药材红花质量控制的重要指标,ZYD、HH的促BMSCs细胞增殖作用与HSYA的成分功效有关。