两种采精方法在塔里木马鹿上的应用效果分析

马鹿的人工采精成功了多年,但采精效果仍然不理想。本文针对新疆塔里木马鹿全麻侧卧式采精方法和半麻站立式采精方法的采精效果进行了比较试验。结果表明,半麻站立式采精方法的采精量及采精成功次数明显优于全麻侧卧式采精方法(P<0.05);而就鲜精及冻精活力、精液密度而言,半麻站立式采精方法略优于全麻侧卧式采精方法,但两者间无显著性差异(P>0.05)。采用半麻站立式采精方法在塔里木马鹿上的应用效果优于全麻侧卧式采精方法,可在各养鹿场、户推广应用。

马鹿胚胎移植技术的试验研究

以新疆塔河马鹿为供体鹿和受体鹿 ,经过同期发情、超数排卵、人工授精、胚胎采集和胚胎移植后 ,供体鹿 3年共超排 2 7头 ,获可用胚 116枚 ,同期发情处理受体母鹿 2 2 8头 ,发情母鹿 171头 ,同期发情率 75 % ,采用人工输精后 ,进行胚胎移植 ,其中人工授精受胎率平均达 5 5 .7% ,移植 6 8头 ,受胎数 36头 ,鲜胚移植受胎率 5 2 .9%。

不同获能方法对冻融塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同获能方法对塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,冻融塔里木马鹿精子随机分为4组,用钙离子载体、肝素、咖啡因和 Percool 离心4种方法进行精子获能的诱导,利用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用 SDS-PAGE 分离精子膜蛋白,进行 Western blotting 免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平.结果显示,冻融精子经4种精子获能方法处理后,肝素诱发的精子获能率显著高于钙离子载体组和 Percool 组（P ＜0．05）.钙离子载体组、肝素组和咖啡因组精子蛋白酪氨酸磷酸化水平高于 Percool 组和对照组.另外,冻融精子随着上游处理及肝素诱导获能的进行,检测到分子量分别为14,25~30,40,47,55 ku 的酪氨酸磷酸化蛋白,这些蛋白的酪氨酸磷酸化水平在获能60~120 min 期间相对较高,而且此时精子获能率及超激活运动精子比例也显著提高（P ＜0．05）.结果提示,肝素可以较好的诱导马鹿精子获能,马鹿精子获能与蛋白酪氨酸磷酸化相关.

不同浓度Ca^(2+)对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同浓度Ca^(2+)对马鹿精子体外获能的影响,本研究以塔里木马鹿冻融精子为试验材料,将精子分别悬浮于含不同浓度Ca^(2+)(0、1.1、2.2、3.5、5.0mmol/L)的台氏液(sp-TALP液)中,在培养0、2、4h时,采用金霉素(CTC)染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,Ca^(2+)浓度为1.1、2.2mmol/L有利于精子活力的维持(P<0.05),精子获能率极显著高于对照组和高浓度组(3.5、5.0mmol/L;P<0.01),精子存活时间最长(P<0.01),但高浓度Ca^(2+)(5.0mmol/L)对精子活力具有显著抑制作用(P<0.05),精子获能率极显著低于低浓度组(P<0.01),精子存活时间最短(P<0.01);另外,随着培养时间的推移精子发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平有所不同,培养2、4h时,1.1mmol/L组精子蛋白磷酸化水平极显著高于其他各组(P<0.01),高浓度Ca^(2+)(3.5、5.0mmol/L)组酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平极显著下降(P<0.01)。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能所需的适宜Ca^(2+)浓度为1.1mmol/L,且获能过程中Ca^(2+)的存在是必要的。

塔里木马鹿不同个体冻融精子酪氨酸磷酸化蛋白的差异表达初报

蛋白的酪氨酸磷酸化对精子运动力的维持,精子获能,超激活运动以及顶体反应等生理过程十分重要。为探讨塔里木马鹿不同生理状态下,不同个体精液精子蛋白酪氨酸磷酸化的关系,以塔里木马鹿冷冻保存的精子为试验材料,采用非离子型去污剂(NP-40)裂解法提取精子膜蛋白,用SDS-PAGE凝胶电泳和Western免疫印迹技术检测精子膜蛋白及发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达情况。结果表明:精液异常(黄棕色,黏稠)个体的冻融精子活力,精子蛋白酪氨酸磷酸化水平明显下降(P<0.01);含卵黄稀释液作为冷冻保存稀释时,其冻融精子蛋白的磷酸化水平显著高于无卵黄稀释液的其它个体(P<0.05);另外,相同生理状态下冷冻保存的不同个体的冻融精子酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平也有显著差异(P<0.05),但除了精液异常个体外所有公鹿冻融精子的40 ku和47 ku蛋白的磷酸化表现出较强的表达(P<0.05)。以上结果提示,塔里木马鹿冻融精子蛋白酪氨酸磷酸化水平与精液的生理状态有关,并且不同个体之间也存在一定的差异。

Ca^(2+)、HCO_3^-和BSA对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

以塔里木马鹿冻融精子为材料,将精子分别悬浮于缺或含Ca^(2+)、HCO_3^-和牛血清白蛋白(BSA)的spTALP液中,在培养0、2、4h时,采用金霉素(CTC)染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能体系中同时或单独缺少BSA、HCO_3^-和Ca^(2+)时,精子活力及获能率明显下降(P<0.05),精子蛋白酪氨酸磷酸化水平也相对较低(P<0.05);相反获能体系中这三种成分同时存在时,精子活力及获能率明显提高(P<0.05),精子蛋白酪氨酸磷酸化水平也相对较高(P<0.05);另外,培养体系中缺Ca^(2+)和BSA但存在HCO_3^-时的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平,与缺HCO_3^-和BSA但存在Ca^(2+)时的基本相似;同时缺少HCO_3^-和Ca^(2+)时,精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著降低(P<0.05)。提示HCO_3^-和Ca^(2+)在塔里木马鹿精子获能及其蛋白酪氨酸磷酸化过程中具有重要调控作用,而BSA协助增强精子获能及其蛋白酪氨酸磷酸化过程。