TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达及其活化机制的初步探讨

背景与目的已有的研究表明:Toll样受体5(toll-like receptor 5,TLR5)在肿瘤起始和发展中发挥重要作用。我们前期研究发现,TLR5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中高表达,但其在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达,及其在NSCLC细胞中活化的机制。方法用免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的表达。分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L的鞭毛蛋白刺激,用NF-κB荧光素酶报告基因质粒瞬时转染后,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A-1细胞株为实验对象,选择0.1μg/m L的鞭毛蛋白,分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、10μg/m L的TLR5抗体抑制通路活化,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性,验证TLR5活化通路。构建TLR5-sh RNA,转染SPC-A-1细胞48 h后,以0.1μg/m L浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1细胞及转染的SPC-A-1细胞,在刺激0 min、10 min、30 min、60 min,用Western blot方法比较TLR5信号通路因子p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK、IKBα、ERK1/2的变化。结果 TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A-1中呈高表达,且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A-1细胞NF-κB荧光素酶的活性最高,呈浓度依赖性,0.1μg/m L鞭毛蛋白即可明显增强NF-κB荧光素酶的活性(P<0.05);而SPC-A-1细胞内NF-κB荧光素酶的活性可被TLR5抗体抑制,与TLR5抗体浓度负相关(P<0.05)。与0 min相比较,SPC-A-1细胞内p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在鞭毛蛋白刺激10 min即明显增高,30 min达到高峰,60 min开始下降(P<0.05),且与10 min和60 min组相比,p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在30 min增高(P<0.05);而IKBα、ERK1/2的水平无明显变化(P>0.05)。以适合浓度鞭毛蛋白刺激转染的SPC-A-1细胞,p-IKBα、p-JNK蛋白均未检出,IKBα、ERK1/2蛋白的水平无明显变化(P>0.05),p-ERK1/2蛋白水平随着时间延长明显增高(P<0.05)。结论外源性配体鞭毛蛋白可激活NSCLC细胞株TLR5蛋白,启动下游信号通路,可能与NSCLC的发生发展有关。

CUL4A作用机制及其与肿瘤关系的研究进展

CUL4A作为E3连接酶核心结构的主要骨架,可与DDB1结合,使多种底物泛素化并介导其降解,从而影响细胞内蛋白水平。已有研究证实CUL4A在多种肿瘤中高表达,表明泛素化修饰与肿瘤的发生发展密切相关。本文概述CUL4A的相关作用机制及其在恶性肿瘤发生发展中的作用,并讨论其作为肿瘤防治新靶点的研究进展。

基于5G+AI的远程动态实时心电监护技术在老年慢性疾病中的应用研究

目的分析基于5G+AI的远程动态实时心电监护技术在老年慢性疾病患者中的应用价值。方法描述性研究。选取2019年1月至2020年12月于湖南省人民医院佩戴远程动态实时监护的年龄≥65岁的老年慢性疾病患者,观察佩戴期间危急值和心电信号采集传输预警的频次、正确率,并分析危急值心电事件的临床影响因素。结果共监测6662例老年患者,预警2024例(30.4%),拨出电话2223个,预警2291次事件。其中,危急值心电事件共预警827例,预警事件1044次,预警不准确4次,危急值预警准确率99.6%;心电信号采集传输预警告知1247次,电极脱落预警616次(实时处置成功351次)。阵发性或持续性心房颤动、心房扑动会增加老年患者危急值心电事件的发生风险(OR=2.236,95%CI:1.892~2.643,P<0.001),慢性心功能不全也增加老年患者危急值心电事件的发生风险(OR=1.871,95%CI:1.591~2.202,P<0.001)。结论远程动态实时心电监护技术在老年慢性疾病患者中的有效应用,可提高其佩戴动态心电监护的依从性、提升监护的敏感性与时效性。阵发性或持续性心房颤动、心房扑动和慢性心功能不全是老年患者出现危急值心电事件的影响因素。

鞭毛蛋白活化TLR5信号途径对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响

目的 探讨外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5后,对于SPC-A-1细胞生物学行为的影响.方法 选用SPC-A-1细胞作为研究对象,鞭毛蛋白作用浓度为0.1μg/ml.构建TLR5-shRNA,并转染SPC-A-1细胞.实验分为四组：对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组.用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）在0、24、48、72 h检测细胞增殖情况,在48 h分别用TUNEL法检测细胞凋亡,Transwell细胞侵袭实验研究细胞侵袭能力的影响,平板划线培养实验研究细胞迁移能力的影响,细胞集落形成实验研究细胞克隆形成能力.结果 （1）于0、24、48、72 h在570 nm波长处检测各组细胞的光密度值,结果显示,在同一时间点,Flagellin组与其它三组相比,细胞增殖明显受到抑制（P＜0.01）,TLR5-shRNA＋ Flagellin组与对照组和TLR5-shRNA组相比,细胞增殖无明显影响（P＞0.05）.（2）对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组的细胞凋亡率分别为（14.75 ±0.072）％、（15.09 ±0.053）％、（21.63 ±0.047）％、（14.98 ±0.036）％.与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组相比,Flagellin组细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）.（3）对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组穿膜细胞数分别为39.55±2.31、42.78±3.52、18.75±3.77和38.43±2.98.与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组相比,Flagellin组的细胞其侵袭能力明显受到抑制（P＜0.01）,而对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组两两比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.（4）与对照组、TLR5-shRNA组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组相比,Flagellin刺激48 h后,Flagellin组细胞的迁移能力显著下降（P＜0.05）,而与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA＋ Flagellin组细胞的迁移能力无明显改变（P＞0.05）.（5）对照组、TLR5-shRNA组、Flagellin组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组细胞集落形成率分别为（40.37±3.88）％、（39.88±2.49）％、（13.29±3.76）％、（38.81±4.11）％.与对照组、TLR5-shR-NA组和TLR5-shRNA＋ Flagellin组相比,Flagellin组细胞集落形成率显著减少（P＜0.01）,与对照组、TLR5-shRNA组相比,TLR5-shRNA＋ Flagellin组细胞集落率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 外源性配体鞭毛蛋白活化TLR5信号通路后,可以抑制SPC-A-1细胞的增殖、转移、侵袭,促进其凋亡,可以作为潜在的治疗靶点.