番茄环纹斑点病毒N和NSm基因的VIGS载体构建

【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体,以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料,为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物,利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上,含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用Bam HI和Hind III限制性内切酶进行双酶切,并将酶切产物进行纯化回收,纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接,获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体,将其转入根癌农杆菌GV3101中,并注射到本氏烟和栽培烟K326中,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒N和NSm基因的沉默效率,间接酶联免疫吸附试验(ID-ELISA)检测N和NSm蛋白的含量。【结果】RT-qPCR分析表明,本生烟和栽培烟K326中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90%。ID-ELISA结果显示,2个蛋白含量在不同时间内均显著下降,其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSV N和NSm基因沉默载体构建成功,并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体,为研究TZSV致病机理提供了材料,为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。

马克思主义哲学的本质及具体化研究

在马克思主义理论体系内涵中,哲学范畴的研究是对于马克思主义本质进行全面细致了解的有效途径。从马克思主义哲学本质来分析,可知其哲学范畴的概念内涵在于实践。对马克思主义哲学本质进行简要阐述,并对马克思主义哲学本质——实践逻辑进行具体的阐述与分析,最后探索马克思主义哲学本质的具体化研究,即实践过程中的具体化和理论维度上的具体化。

中国梦的实现离不开城市属人性的回归——保障居民城市权利势在必行

在我国快速城镇化进程的现实语境中,很多地方政府以GDP指标为出发点。枉顾人民群众空间权益,在城镇化建设过程中出现一系列问题。本文通过马克思空间生产理论对现实问题进行解构,得出了维护人民群众空间正义的必要性和正当性。人民群众的城市权利得以保障才是空间正义追寻的目标,而这一切都离不开城市建设“属人性”本质的回归。唯有具备这样内核的中国特色社会主义城镇化建设才能成为人民群众的梦想实践载体,成为中华民族伟大复兴“中国梦”实现路径。