人FoxA1 shRNA载体构建与检测

目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。

肝X受体-β在胃癌组织中的表达及其激动剂GW 3965对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:探讨肝X受体-β(liver X receptor-β,LXR-β)在胃癌组织中的表达及其激动剂GW3965对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法:应用免疫组织化学法检测114例胃癌及其对应的114例癌旁组织中增殖相关基因LXR-β和转录活化因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的表达;培养胃癌细胞SGC-7901,待GW3965激活LXR-β后,应用q RTPCR和Western印迹检测LXR-β下游基因三磷酸腺苷结合盒A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)和ATF4的表达,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞增殖情况;GW3965激活LXR-β后,利用ATF4短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)靶向沉默ATF4,检测细胞增殖情况。结果:LXR-β和ATF4在胃癌组织中的表达均显著低于其相应的癌旁组织(均P<0.05);GW3965激活LXR-β后,SGC7901细胞增殖明显受抑制,ABCA1和ATF4的表达明显上调(均P<0.05);sh RNA能显著抑制ATF4的表达,并阻断LXR-β激活后抑制细胞增殖的作用。结论:LXR-β在胃癌组织中呈低表达,活化的LXR-β可能通过ATF4抑制胃癌细胞的增殖。

人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测

目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。

LncRNA TP53TG1通过miR-96/TPM1轴调控胃癌细胞对5-FU的耐药性研究

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)肿瘤蛋白P53靶基因1(TP53TG1)/微小RNA-96(miR-96)/原肌球蛋白1(TPM1)对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性的影响及其可能机制。方法体外培养SGC7901、SGC7901/5-FU细胞,将SGC7901/5-FU细胞分为对照组、TP53TG1 NC组(转染TP53TG1 NC)、TP53TG1 mimic组(转染TP53TG1 mimic)、miR-96 NC组(转染TP53TG1 mimic、miR-96 NC)和miR-96 mimic组(转染TP53TG1 mimic、miR-96 mimic)。UALCAN数据库分析胃腺癌组织、正常胃组织中TP53TG1表达差异;qRT-PCR法检测LncRNA TP53TG1、miR-96、TPM1 mRNA表达;CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、凋亡及TPM1、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶实验检测miR-96、TPM1的靶向关系。结果胃腺癌组织中TP53TG1水平显著低于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05)。与SGC7901细胞相比,SGC7901/5-FU细胞中LncRNA TP53TG1表达显著降低,miR-96表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与TP53TG1 NC组相比,TP53TG1 mimic组SGC7901/5-FU细胞中LncRNA TP53TG1、TPM1 mRNA、TPM1蛋白、Bax蛋白水平及细胞凋亡率显著升高,miR-96、Bcl-2蛋白水平及细胞吸光度(A)值显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与miR-96 NC组相比,miR-96 mimic组SGC7901/5-FU细胞中LncRNA TP53TG1、TPM1 mRNA、TPM1蛋白、Bax蛋白水平及细胞凋亡率显著降低,miR-96、Bcl-2蛋白水平及细胞A值显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-96与TPM1在SGC7901/5-FU细胞中存在靶向关系。结论LncRNA TP53TG1可通过miR-96/TPM1轴降低胃癌细胞对5-FU的耐药性。

胃癌细胞奥沙利铂耐药与上皮-间质转化关系研究

目的:探讨胃癌细胞奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法:采用逐步递增L-OHP浓度持续体外诱导人胃癌SGC-7901细胞,建立L-OHP耐药细胞系SGC-7901/L-OHP;通过形态学、群体倍增时间、药物敏感性检测确定SGC-7901/L-OHP成功建立;比较SGC-7901/L-OHP细胞与亲代细胞EMT相关标记物N-cadherin和E-cadherin表达差异。结果:经6个月诱导,L-OHP耐药细胞系SGC-7901/L-OHP成功建立,表现为该细胞的形态由上皮表型转变为间质样细胞表型;群体倍增时间较亲代细胞明显延长(P<0.05);L-OHP的IC50为亲代细胞的9.7倍。与亲代细胞SGC-790比较,SGC-7901/L-OHP细胞中N-cadherin m RNA和蛋白表达明显上调,E-cadherin m RNA和蛋白表达明显下调(均P<0.05)。结论:EMT可能是人胃癌细胞对L-OHP产生耐药的重要机制。

胃癌术后早期肠内营养的应用

目的:观察早期肠内营养(EEN)支持治疗对胃癌患者术后康复的影响和作用,分析早期肠内营养支持的疗效及可行性。方法:将2008年11月—2011年6月收治的240例胃癌患者随机分为EEN组和肠外营养(PN)PN组,各120例。两组营养支持采用等热量、等氮量,分别于营养支持前后观测营养状况指标、临床指标和血生化指标的变化。结果:两组患者的手术方式、手术前后的体质量、血清前白蛋白、血清白蛋白等营养状况指标、肝、肾功能、血糖、电解质等血生化指标均无统计学差异(P>0.05);与PN组比较,EEN组静脉炎的发生率低(0 vs.3.4%)、平均住院费用低[(23 231±256)元vs.(30 752±783)元]、肛门排气时间及住院时间较短[(33.4±11.0)h vs.(56.2±15.1)h、(10.3±2.6)d vs.(12.1±3.1)d](P<0.05)。结论:与PN相比,EEN在改善胃癌患者术后营养方面具有同等效果,且具有胃肠功能恢复快、住院时间短、住院费用更低的优点,是一种安全、有效、更为合理的营养治疗方法。

抑癌基因AKAP12与结直肠癌的研究进展

结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,严重危害到了人类的生命健康。相关研究表明,结直肠癌的发生、发展是一个多因素、多基因、多步骤共同作用的过程,其分子特征明显,主要包括癌基因的激活、抑癌基因的失活及基因组不稳定现象等。虽然癌基因的活化是促使结直肠癌发生的关键因素之一,但抑癌基因的失活在结直肠癌的发生、发展过程中可能起到更常见、更重要的作用[1]。

肝X受体激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂耐药的逆转作用及机制

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂(OXA)耐药的逆转作用及机制。方法:用OXA药物浓度持续递增法诱导人结肠癌HCT116细胞构建OXA耐药的人结肠癌HCT116/L-OHP细胞,比较HCT116/L-OHP细胞与其亲本HCT116细胞的生长情况,以及对不同浓度OXA作用的反应情况;检测HCT116/L-OHP细胞经GW3965处理48 h后OXA耐药性及自噬相关蛋白ATG-5、Beclin-1、p62、LC3的表达的变化。结果:成功构建人结肠癌耐OXA细胞HCT116/L-OHP,表现为HCT116/L-OHP细胞与亲本HCT116细胞比较,增殖能力有所减弱,但对OXA的耐药性明显增强(IC_(50):244.99μmol/L vs.10.05μmol/L,P<0.05),其耐药指数(RI)为24.45。不同浓度(10、20、30μmol/L)GW3965作用后,HCT116/L-OHP细胞对OXA的IC_(50)、RI均明显降低(均P<0.05),且呈浓度依赖性(IC_(50):199.49、114.71、87.32μmol/L;RI:19.89、11.40、8.69),3个浓度的逆转倍数分别为1.23、2.15、2.82;ATG-5、Beclin-1蛋白的表达明显降低,而p62、LC3-II蛋白的表达明显升高(均P<0.05),且均呈浓度依赖性。结论:LXR激动剂GW3965可逆转人结肠癌细胞对OXA的耐药,其机制可能与调节自噬相关蛋白表达水平有关。

手鳞状细胞癌小肠转移合并梗阻一例

患者男性,71岁,因＂反复腹胀腹痛4个月＂在当地医院以＂不完全性肠梗阻＂治疗,症状反复,2012年7月行胶囊内镜检查.因胶囊内镜一直未排出,症状加重于2012年8月29日转入我院.患者10年前因＂右手皮肤鳞癌＂行右手小指广泛切除,术后行氟尿嘧啶＋甲氨蝶呤化疗1次.3年前再次因＂皮肤鳞癌＂行右手掌侧皮肤广泛切除,右前臂带蒂皮瓣移植术（图1）.体检：上腹部及脐周轻压痛.人院后腹部X线片显示肠梗阻并脊柱侧弯.胸部CT、胃镜、PET-CT、肿瘤标志物检查均未见异常.诊断为肠梗阻,肿瘤可能性大.患者在全身麻醉下行剖腹探查,距回盲部约150 cm处一2 cm×2 cm灰白色质硬肿块致肠腔狭窄,梗阻近端肠管明显扩张,内可扪及胶囊内镜.