UBE2I在KRAS突变型结肠癌中表达及其对KRAS突变型结肠癌细胞增殖的影响

目的观察小泛素样修饰蛋白-E2连接酶(UBE2I)在KRAS突变型结肠癌组织中的表达及其对KRAS突变型结肠癌细胞系增殖能力的影响。方法分析癌症基因组(TCGA)中86例已知KRAS突变类型的结肠癌样本中UBE2I差异表达水平及临床意义。构建短发夹RNA(shRNA)介导的UBE2I基因沉默KRAS突变型结肠癌细胞株。采用RT-PCR及Western blot检测结肠癌细胞中UBE2I mRNA与蛋白表达,CCK8增殖实验及细胞克隆实验分别检测细胞增殖及克隆能力变化。结果 UBE2I在KRAS突变型癌组织中表达明显上调(P <0.01),且其表达水平与KRAS突变型结肠癌患者临床分期及病理分级密切相关(病理分级P <0.01;临床分期P=0.02)。KRAS突变型结肠癌细胞HCT116、DLD1的UBE2I基因沉默后,克隆形成能力(P <0.01)及72 h后细胞增殖能力(P <0.01)均明显降低。结论 UBE2I在KRAS突变型结肠癌组织及细胞株中表达上调,沉默UBE2I基因可显著抑制肿瘤细胞的增殖及克隆能力。

损毁海马CA3区多巴胺能系统对大鼠条件性恐惧记忆的影响

目的研究大鼠海马CA3区多巴胺（DA）能系统在条件性恐惧记忆形成与保持中的作用。方法条件性恐惧训练前2周向双侧海马CA3区注入6-羟基多巴胺（6-OHDA）进行损毁，训练后用Western blotting检测前额叶皮层、CA1、杏仁体GluR1及NR2B的表达变化。结果（1）与生理盐水组[（66．44±16．58）％，（73．43±23．57）％，（55．27±20．57）％]比较，6-OHDA损毁组恐惧记忆获得的僵住反应[（65．58±5．33）％]差异无统计学意义（P〉0．05），短时恐惧记忆的僵住反应[（39．24±12．83）％]与长时恐惧记忆的僵住反应[（31．15±6．51）％]明显减少妒〈0．05）。（2）与生理盐水组比较，6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层，海马CA1区的GluR1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05），杏仁体BLA区的GluR1蛋白表达升高（P〈0．01）。与生理盐水组比较，6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层的NR2B蛋白表达升高（P〈0．01），海马CA1区的NR2B蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05），杏仁体BLA区的NR2B蛋白表达降低（尸〈0．01）。结论大鼠海马CA3区多巴胺能系统功能下调能损害恐惧记忆的巩固但不影响其获得，还可以调节其他脑区记忆相关蛋白的表达。

粪便中SOX21基因甲基化检测在结直肠癌诊断中应用价值

目的 Y染色体性别决定区域相关高迁移率族盒21基因(sex-determining regio of Y chromosome related high-mobility-group box 21,SOX21)在结直肠癌组织中发生异常甲基化,然而该基因在结肠癌粪便标本中是否发生异常甲基化及其意义尚不清楚。本研究检测组织和粪便标本中SOX21基因启动子区甲基化水平,旨在评估甲基化的SOX21基因作为结直肠癌粪便基因检测标志物价值。方法选取2014-05-20-2015-02-26中山大学附属第六医院胃肠外科收治的105例结直肠癌患者的癌与癌旁正常组织,分别组成结直肠癌组和癌旁正常组。以及2014-04-03-2016-10-10收治的240例患者粪便标本,其中结直肠癌80例为结直肠癌组,腺瘤77例为腺癌组,正常83例为正常组。采用定量甲基化特异性聚合酶链式反应(quantitative methylation specific polymerase chain reaction,qMSP)技术检测SOX21基因甲基化水平,计算敏感性、特异性和ROC曲线下面积,并分析SOX21基因甲基化与结直肠癌患者临床病理特征之间关系。结果组织标本结果显示,肿瘤组织SOX21基因甲基化水平高于其对应癌旁组织,Z=8.679,P<0.001;当甲基化的SOX21特异性为97.1%(102/105)时,结直肠癌检出率为84.8%(89/105);ROC曲线下面积为0.930,95%CI为0.889～0.971;SOX21甲基化与年龄、性别、部位、TNM分期、肿瘤大小和分化程度无关联,均P>0.05。粪便标本结果显示,结直肠癌组和腺瘤组SOX21甲基化水平高于正常组,P<0.05。当甲基化的SOX21特异性为97.6%(81/83)时,对结直肠癌敏感性为80.0%(64/80),对腺瘤敏感性为33.8%(26/77);SOX21检测结直肠癌的ROC曲线下面积为0.926,95%CI为0.885～0.968,检测腺瘤的ROC曲线下面积为0.667,95%CI为0.583～0.751;SOX21基因对肿瘤检出率与肿瘤近、远端发生位置有关联,远端肿瘤检出率高,χ2=17.372,P<0.001,但与年龄、性别、TNM分期、肿瘤大小和分化程度无关联,P>0.05。结论在结直肠癌组织和粪便标本中,SOX21基因启动子区均发生异常高甲基化。甲基化的SOX21基因是结直肠癌粪便基因检测的潜在良好标志物。