Hath1在非黏液性结肠腺癌发病中的抑癌基因作用

目的:探讨Hath1基因在结肠腺癌发病中的潜在作用。方法:从48例非黏液性结肠腺癌患者的标本中取材,石蜡切片染色后观察正常结肠黏膜、癌旁黏膜和结肠腺癌组织中杯状细胞数量的变化;用定量实时逆转录PCR、免疫组织化学和Western blotting分别检测这3种组织中Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达。将Hath1基因转化至HT29人结肠癌细胞中,然后随机挑选3个转化了Hath1基因的克隆,用定量实时逆转录PCR检测Hath1和Muc2的mRNA表达,用Western blotting检测Hath1、Muc2、cyclin D1和p27蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验和裸鼠移植实验,观察将Hath1基因转化到HT29细胞后,HT29细胞增殖能力的变化。结果:在非黏液性结肠腺癌组织中未发现杯状细胞,并且Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达均显著下调(P<0.05);在HT29细胞中,Hath1基因下调cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),上调p27(P<0.05)和Muc2(P<0.01)蛋白的表达;过表达Hath1基因的HT29细胞在体外的克隆形成显著受到抑制(P<0.01),移植至裸鼠时移植肿瘤的体积显著缩小(P<0.01)。结论:Hath1基因表达的下调可能与非黏液性结肠腺癌的发生有关,Hath1基因在非黏液性结肠腺癌的发生中可能起着抑癌基因的作用。

cFLIP反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞SW620的增殖

目的研究cFLIP反义寡核苷酸(cFLIP-asODN)对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖的影响。方法利用脂质体将cFLIP-asODN转染入SW620细胞,并设空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组作为对照。荧光倒置显微镜检测复合物对细胞的转染效率;荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中cFLIP mRNA和蛋白的表达水平的变化;MTT法分析复合物对SW620细胞增殖的影响;流式细胞术分析转染后细胞凋亡情况。结果与空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组相比,脂质体递送cFLIP-asODN进入细胞后,SW620细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05);转染cFLIP-asODN后,SW620细胞中的cFLIP mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05);且细胞凋亡率(29.5±2.4)%也明显高于空载体+cFLIP-asODN转染组(5.8±0.7)%、脂质体+无意义ODN转染组(5.5±0.8)%和空白对照组(5.2±0.5)%(P<0.05)。结论通过在体外转染cFLIP-asODN可有效抑制结肠癌细胞株SW620的增殖。

新型基因载体—聚酰胺-胺树状大分子聚合物

利用重组DNA技术进行疾病预防和治疗是近几年来的研究热点,如何提高重组DNA的转染效率一直是研究的难题之一,新型阳离子多聚物——聚酰胺-胺型树状大分子(Starburst PAMAM dendrimers,PAMAM-D)的出现为解决现存的难题带来希望。PAMAM-D最早由美国人Tomalia于1985年合成,目前已广泛应用于各个领域:药物载体、废水处理、催化剂、光电传感、基因载体等。由于PAMAM-D具有对称的刚性球体结构,表面带有大量正电荷,容易与带负电荷的核酸形成复合物,故作为基因载体具有许多优于其他现有转染试剂的优良特性。本文主要介绍了PAMAM-D的结构、性质、应用以及作为基因载体的优越性,并对今后的研究方向进行了概述。