外周血单核细胞表达PEDF在2型糖尿病视网膜病变中的意义

【目的】色素上皮衍生因子(PEDF)通过抗血管增生、抗炎、抗氧化应激等影响糖尿病视网膜病变(DR)发生发展,而单核/巨噬细胞(CD14+)与慢性炎症关系密切。本研究拟通过观察外周血CD14+细胞中PEDF的表达水平,为进一步探讨DR发病机制提供线索。【方法】选取2011年10月至2013年4月在我院内分泌科住院确诊为2型糖尿病患者(DM组)108例,分为无糖尿病视网膜病变组(NDR组)52例和糖尿病视网膜病变组(DR组)56例,同期健康体检者作为对照组(NC组)52例。收集患者外周血白细胞及其分类细胞计数相关指标;密度梯度离心法收集患者PBMC,免疫磁珠分离法提取CD14+细胞;剩余PBMC提取总蛋白,western blot比较总PBMC(t PBMC)与分离掉CD14+细胞的PBMC[PBMC(ex CD14+)]中PEDF蛋白表达水平。【结果】DR组和NDR组单核细胞绝对值较NC组升高(P<0.05),但DR组和NDR组间单核细胞绝对值的差异无统计学意义(P>0.05);DR组淋巴细胞绝对值较NDR组明显减低(P<0.05);与t PBMC相比,PBMC(ex CD14+)中PEDF蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。【结论】DR患者外周血单核细胞数量增加。单核细胞是PBMC中表达PEDF的主要细胞。

舒洛地特对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能紊乱的作用及其机制

【目的】通过观察体外高糖环境下培养的原代人视网膜微血管内皮细胞(HREC)中C1q/TNF相关蛋白3(CTRP3)及炎症因子的表达情况及舒洛地特对其表达的影响,探讨舒洛地特治疗糖尿病视网膜病变的机制。【方法】将体外培养的HREC分为以下4组:对照组(普通内皮细胞培养基,含5.5 mmol/L葡萄糖),甘露醇组(24.5 mmol/L甘露醇+5.5mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),舒洛地特干预组(0.25、0.5、1.0 LRU/m L舒洛地特+30 mmol/L葡萄糖)。采用Western blot法检测各组CTPR3、TNF-α、MCP-1及p-NF-κB p65蛋白的表达。【结果】高糖培养HREC,见CTRP3蛋白表达水平随高糖培养时间的延长而逐步增加并在干预8 h时达到峰值(P<0.01),当高糖培养并加入舒洛地特干预后CTRP3的蛋白表达水平与高糖组相比呈剂量依赖性下降(P<0.05)。此外,高糖培养12h后TNF-α、MCP-1及p-NF-κB p65蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而当高糖培养下加入舒洛地特干预后,TNF-α、MCP-1及p-NF-κB p65蛋白表达水平显著低于高糖组(P<0.05)。对照组与甘露醇组间CTPR3、TNF-α、MCP-1及p-NF-κB p65蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究首次证实了高糖可使HREC中CTRP3蛋白表达上调,舒洛地特可抑制高糖引起的CTRP3蛋白表达增加;舒洛地特可抑制高糖诱导的HREC中转录因子p-NF-κB p65及炎症因子TNF-α、MCP-1的表达水平升高,这可能是其治疗糖尿病视网膜病变的机制之一。

PFKFB3促进糖尿病视网膜微血管损伤

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病的主要微血管并发症,其主要病理改变为视网膜微血管渗漏、血管新生等。6-磷酸果糖激酶-2/2,6双磷酸激酶同工酶3(PFKFB3)作为糖酵解的关键酶,在血管内皮细胞中高表达,当受到低氧、炎症刺激因子、生长因子等因素刺激时其表达上调并对血管内皮细胞的能量代谢发挥重要的调节作用。近期研究发现PFKFB3可通过促进糖酵解、加快细胞周期、抑制细胞凋亡等多种途径促进细胞的增殖,同时通过影响内皮细胞的伪足生成、亚型分化等过程促进细胞的迁移,在以上两个过程的作用下加速血管新生的进程,从而促进DR的发生发展。

内质网应激激活STING信号通路并降低胰岛β细胞活力

目的:鉴定胰岛β细胞中干扰素基因刺激因子(STING)信号通路相关基因的表达及其与内质网应激的相互作用,研究2个通路间的相互作用对胰岛β细胞活力的影响。方法:通过生物信息学分析来源于人的胰岛单细胞RNA测序数据集,得到STING信号通路相关基因在胰岛β细胞中的表达变化;用免疫荧光法检测并比较野生型小鼠和db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞中STING蛋白的表达差异;用STING特异性激动剂5,6-二甲基呫吨酮-4-乙酸(DMXAA)处理3种常用的小鼠胰岛β细胞系(NIT-1、Min6及beta-TC-6),并通过RT-qPCR和Western blot分别检测其STING信号通路相关蛋白的mRNA和蛋白表达水平变化;用毒胡萝卜素(TG)诱导上述β细胞系内质网应激,通过Western blot检测STING信号通路相关蛋白的表达及磷酸化水平,并通过CCK-8法检测胰岛β细胞活力。结果:人胰岛β细胞中存在STING信号通路主要基因mRNA的表达,但在健康人群和糖尿病患者的表达水平无显著差异。免疫荧光结果表明,野生型小鼠和db/db小鼠胰岛β细胞的STING蛋白均在细胞核周边富集,且在db/db小鼠β细胞的表达量更高。在3种小鼠β细胞系中,只有beta-TC-6细胞具有较显著的STING表达,并能被STING通路激动剂DMXAA激活。TG能同时引起beta-TC-6细胞的内质网应激和STING通路激活;与STING激动剂联合处理可协同抑制细胞的活力。结论:人和小鼠胰岛β细胞及小鼠胰岛β细胞系beta-TC-6均表达STING信号通路的主要组分。在beta-TC-6细胞中,内质网应激能激活STING通路;内质网应激与STING通路可协同作用降低β细胞活力。

白细胞介素2、6和17水平与甲状腺相关性眼病患者病情活动度的相关性研究

目的 观察甲状腺相关性眼病（TAO）患者血清白细胞介素（IL）-2、IL-6及IL-17水平与病情活动程度的相关性.方法 选取TAO患者80例,单纯Graves病（GD）患者30例,健康对照者（NC）30名.按临床活动性评分（CAS）将TAO患者分为非活动期（CAS＜3,27例）和活动期（CAS≥3,53例）,其中活动期中重度患者45例给予激素静脉治疗12周.测定各组基线或治疗后IL-2、IL-6及IL-17水平.结果 IL-2水平在TAO组、GD组和NC组依次升高（P＜0.05）;IL-6水平TAO组与GD组相似（P＞0.05）,但均高于NC组（P＜0.01）;IL-17水平在TAO组、GD组和NC组依次降低（P＜0.05）;与非活动期相比,活动期TAO患者IL-17水平升高（P＜0.01）,IL-2和IL-6水平无显著变化（P＞0.05）.TAO患者IL-17水平与CAS、促甲状腺素受体抗体呈正相关（P＜0.01）.使用激素治疗后,TAO患者CAS降低（P＜0.05）,IL-6、IL-17水平下降（P＜0.05）,IL-2水平无显著变化（P＞0.05）.结论 TAO患者血清IL-6、IL-17水平升高,IL-2水平降低;其中IL-17与病情活动度关系密切.