刺桐碱促伤口愈合的网络药理学分析及实验验证

本研究运用网络药理学和体内外实验模型探讨天然化合物刺桐碱(hypaphorine,HYP)促伤口愈合的作用机制。通过SwissTargetPrediction数据库挖掘HYP的作用靶点;通过GeneCards数据库获取创伤愈合靶点;将药物靶点与疾病靶点通过维恩在线筛选出交集靶点;通过String数据库和Cytoscape 3.7.1构建蛋白互作网络(protein-protein interaction network,PPI);再借助Metascape和微生信-在线生物信息平台对核心靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析;最后通过建立细胞炎症模型及糖尿病大鼠背部创伤模型进行体内外实验验证。结果得到HYP的作用靶点100个,伤口愈合靶点6612个,共有靶点60个,核心靶点5个。KEGG富集通路主要包括与癌症的发病途径、PPAR信号通路、化学致癌作用-活性氧等信号通路。体外细胞实验显示,HYP可以通过抑制白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达抑制RAW 264.7细胞炎症过程以及通过上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-Akt)的表达促进成纤维细胞迁移。动物实验显示,HYP可以显著促进糖尿病大鼠慢性创面愈合,HE和Masson染色结果表明HYP促进了糖尿病大鼠创伤部位再上皮化。免疫组织化学和Western blot结果表明,HYP在慢性创面处抑制了炎症因子的释放,加速了慢性创面从炎症期到组织再生期的过渡。综上所述,本研究探究出HYP可能是通过调控PPARγ通路,抑制NLRP3、IL-1β、TNF-α、iNOS的表达以及促进成纤维细胞增殖,从而发挥促进慢性创伤愈合的作用。

五味甘露自发热凝胶贴的制备及抗炎活性研究

目的:对水凝胶基质配方进行优化,并进行热源复合,制备五味甘露自发热凝胶贴并评价其抗炎作用。方法:通过Box-Behnken设计响应面法优化五味甘露凝胶贴的基质处方,并以流变学指标和感官指标作为评价标准,以甘羟基铝、吐温80、羧甲基纤维素钠的用量为考察因素,对五味甘露凝胶贴的基质处方进行优化。采用小鼠耳廓肿胀炎症模型评价五味甘露自发热凝胶贴的抗炎效果。结果:筛选的五味甘露自发热凝胶贴的基质处方为:7.5%聚丙烯酸钠NP800,0.26%甘羟基铝,0.05%二乙胺四乙酸钠,4.6%滑石粉,0.38%二氧化钛,37.52%甘油,1.69%羧甲基纤维素钠,2.35%吐温80,0.28%酒石酸,42.87%水,五味甘露干粉含量为2.5%。五味甘露自发热凝胶贴治疗小鼠耳廓肿胀具有显著的疗效。结论:优化后制备的五味甘露自发热凝胶贴可以解决软膏剂水凝胶贴黏附力差、药物渗透性弱、使用不便等问题。同时对小鼠耳廓肿胀炎症模型的治疗作用优于不复合热源的五味甘露凝胶贴。

五味甘露水提工艺的优化及其抗炎机制的研究

目的 优化五味甘露的水提工艺及探究其抗炎机制。方法 在单因素的基础上,对料液比、提取时间和水提次数进行考察,采用正交试验-细胞药效学综合评分法对工艺进行评价。采用动物实验评价五味甘露水提物的药效。结果 五味甘露的最优水提工艺为:浸泡时间8 h,料液比1:12,提取时间60 min,提取温度60℃,水提3次。五味甘露可显著抑制炎症因子肿瘤坏死因子α和炎症小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 mRNA水平的表达,对大鼠足跖肿胀也具有显著的抑制效果。结论 优化的藏药五味甘露水提工艺稳定、可行,可为其在临床应用治疗关节炎提供依据。

限制活动加剧2型糖尿病小鼠肠道菌群和糖脂代谢紊乱

【背景】久坐行为在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者群体中广泛存在,对于患者的血糖控制具有严重的不良影响,但是其具体机制还缺乏较为完善的阐述。【目的】通过限制小鼠活动模拟久坐行为,从而阐明久坐导致2型糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱加剧的具体机制,为相应的健康教育和干预提供一定的理论基础。【方法】利用C57BL/6J雄性小鼠构建糖尿病模型,小鼠随机分为3组:正常组(CON)、2型糖尿病模型组(MOD)和2型糖尿病限制活动组(SED),通过限制小鼠活动的方法使其进行8周的久坐行为;采用试剂盒和形态学观察法测定小鼠糖脂代谢紊乱情况;HE和PAS染色观察小鼠回肠组织受损情况;采用RT-qPCR法测定小鼠粪便微生物的变化;采用TBA试剂盒测定小鼠血清和肝脏中总胆汁酸含量;分别通过荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting测定小鼠回肠和肝脏组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)和G蛋白偶联胆汁酸受体5(G protein coupled bile acid receptor 5,TGR5)的mRNA和蛋白表达水平。【结果】与正常组相比,模型组小鼠血糖升高、血脂增加、胰岛素抵抗和口服葡萄糖耐量紊乱,而且肠道病理学变化明显,限制活动使T2DM小鼠糖脂代谢紊乱增加(P<0.05);T2DM小鼠肠道菌群失调,在门和属水平上的有益菌减少、有害菌增加,限制活动加剧了这一情况;与正常组相比,T2DM小鼠血清和肝脏组织中总胆汁酸含量增加,限制活动组总胆汁酸进一步增加(P<0.05);模型组小鼠胆汁酸受体FXR和TGR5表达较正常组显著降低(P<0.01),限制活动后进一步抑制了这些受体的表达。同时,Spearman相关性分析也显示小鼠糖脂代谢水平与肠道菌群及肠道菌群代谢物胆汁酸存在显著相关性。【结论】限制活动致使T2DM小鼠糖脂代谢紊乱加剧,其机制可能与肠道菌群和胆汁酸代谢失调,以及胆汁酸受体的进一步下调有关。

瓜氨酸对糖尿病肾病小鼠肾损伤和骨骼肌萎缩的影响

目的 探讨瓜氨酸(L-citrulline,L-Cit)改善糖尿病肾病小鼠肾损伤和骨骼肌萎缩的作用以及分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠采用高脂饲料喂养+腹腔注射STZ法构建糖尿病肾病模型,小鼠随机分为3组:对照组(NC),模型组(DN)和瓜氨酸补充组(DN+L-Cit),每组10只,瓜氨酸补充组每天给予瓜氨酸灌胃50mg/(kg·d),持续4w。14w后进行网格实验和疲劳转棒实验测定小鼠握力和体能;取血浆测定氨基酸谱;取血清和肾脏组织测定小鼠血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白肌酐比(urinary microalbumin to creatinine ratio, ACR)、肾脏指数等肾功能指标;取腓肠肌组织测定腓肠肌湿重、腓肠肌结构等肌肉功能相关指标,qPCR检测肌肉萎缩相关基因MYOG、MURF-1和BAX等的表达。结果 与NC组相比,DN组氨基酸谱发生显著改变,血浆、肾脏和腓肠肌中精氨酸含量显著降低(P<0.05),肾脏发生纤维化病变,血肌酐、ACR显著增高(P<0.05),肾脏促纤维化因子TGFβ1、肾脏精氨酸酶2表达显著升高(P<0.05),握力和体能显著降低(P<0.05),腓肠肌湿重降低(P<0.05),腓肠肌肌肉萎缩相关基因MYOG、MURF-1和BAX的表达显著改变(P<0.05),腓肠肌nNOS表达、NO含量、PGC-1α表达显著改变(P<0.05),肾脏和腓肠肌TNFα和IL-1β表达显著升高(P<0.05);与DN相比,DN+L-Cit组血浆、肾脏和腓肠肌精氨酸含量显著升高(P<0.05),肾功能显著恢复,握力和体能显著升高(P<0.05),肌萎缩得到了改善,肌肉功能显著增强,血浆、肾脏和腓肠肌TNFα和IL-1β的表达显著降低(P<0.05)。结论 瓜氨酸可能通过调节机体精氨酸含量,改善糖尿病肾病小鼠肾损伤和骨骼肌萎缩病变。

中药通过调节肠道微生物-肠免疫轴治疗溃疡性结肠炎研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种高复发率的炎症性肠病。研究表明微生物生态失调和肠道免疫异常是在UC中引发一系列炎症反应的关键因素。调节肠道微生物-肠道免疫环路被认为是缓解UC的关键策略之一。已有研究表明中药复方、中药单体、中药提取物及其衍生物通过调节肠道微生物菌群参与肠道免疫的调控,达到对UC的保护作用。临床试验表明部分中药在治疗UC方面已取得显著的效果。通过从微生物菌群参与肠道免疫调节和肠道稳态的机制方面,探讨目前利用中药治疗UC的研究进展,并进一步对现有的中药治疗UC的临床试验进行总结,为促进中药资源的开发利用和UC的新药研发提供科学参考。