基于阴道菌群构成变化的宫颈上皮内瘤变恶性转归风险预测模型的构建及其临床价值

目的:探讨宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)恶性转归的危险因素,构建风险预警模型并探讨其临床应用价值。方法:选取2017年01月至2019年10月在本院收治的112例CIN患者为研究对象,分为CIN恶性转归组(n=56)和CIN组(n=56)。通过Illumina MiSeq平台分析阴道菌群分布特征;采用多因素Logistic回归分析CIN恶性转归的危险因素,构建风险预警模型并转化为风险评分系统;采用Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估模型的拟合程度和风险预测效能;采用10-折交叉法对模型进行内部和外部验证。结果:CIN恶性转归组加德纳菌属、普雷沃菌属、嗜胨菌属、解脲脲原体及纤毛菌属的菌群丰度显著高于CIN组,其特征菌群为解脲脲原体和普雷沃菌属;两组研究对象高危HPV持续感染、病变面积/宫颈面积比值、腺体受累情况、解脲脲原体以及普雷沃菌群分布情况进行比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=22.501、9.190、17.308、4.356、4.323,均P<0.05);高危HPV持续感染、病变面积/宫颈面积比值≥2/3、腺体受累、解脲脲原体以及普雷沃菌属感染是CIN恶性转归的风险因素(均P<0.05);模型组ROC曲线下面积为0.809[95%CI(0.724~0.877),P<0.001],验证组ROC曲线下面积为0.820[95%CI(0.736~0.886),P<0.001];Hosmer-Lemeshow拟合优度检验数据显示模型组拟合度较好(χ^(2)=4.3283,P=0.2281),验证组拟合度较好(χ^(2)=6.3307,P=0.1758)。结论:基于阴道菌群构成变化构建的CIN恶性转归风险预警模型具有较好的预测效果,可为宫颈癌的预防及干预提供针对性的指导价值。

健康成人血清脂溶性维生素水平的性别和年龄变化规律

目的探讨健康成人血清脂溶性维生素A、25-羟维生素D[25(OH)D]、维生素E和维生素K水平的性别和年龄变化规律。方法回顾性分析2020年7月至2023年2月于南京医科大学附属妇产医院进行体检的2030例健康成人血清维生素A、25(OH)D、维生素E和维生素K水平,按照年龄划分为≤29岁组842例(男性409例,女性433例)、30~39岁组868例(男性419例,女性449例)和40~60岁组320例(男性120例,女性200例),各组再按照性别分为男性组及女性组。采用Mann-Whitney U检验比较同一年龄组不同性别健康成人的血清各脂溶性维生素水平;采用Kruskal-Wallis H检验比较同一性别不同年龄组健康成年血清各脂溶性维生素水平;采用Spearman法分析血清各脂溶性维生素的水平与年龄的相关性。结果成年女性血清维生素A、25(OH)D和维生素K的水平均低于同年龄组男性,差异均有统计学意义(P<0.05),而同一年龄组女性和男性血清维生素E水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);成年男性及女性血清中维生素A、25(OH)D、维生素E和维生素K的水平均随着年龄增长而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman法分析结果显示,血清维生素A、25(OH)D、维生素E和维生素K水平与年龄均呈显著正相关(P<0.05)。结论健康成人血清中脂溶性维生素水平具有显著的年龄和性别差异,在评估其营养状态时需结合年龄和性别因素进行综合分析。

检测牛IL-4双抗体夹心ELISA方法的建立

为利用牛白细胞介素-4(BoIL-4)的特异性单克隆抗体(MAb)建立检测BoIL-4的双抗体夹心ELISA方法,以多种ELISA方法对7株抗BoIL-4的单抗进一步筛选,得到反应最佳的2株单抗8B7和4A10,以A9表达的重组BoIL-4为阻断剂的阻断ELISA试验中,表明这2株单抗也可识别所构建的细胞系A9表达的重组BoIL-4。以单抗8B7作为包被抗体,以标记了HRP的单抗4A10作为检测抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可检测大肠埃希菌、毕赤酵母和Flp-In-293细胞系3种表达系统表达的重组BoIL-4,最低检测限分别为0.25、8和2 ng·mL^(-1),且对A9细胞系上清中表达的BoIL-4检测效果和特异性良好。该研究建立的BoIL-4双抗体夹心ELISA方法为深入研究BoIL-4、开发BoIL-4 ELISA检测试剂盒奠定了基础。

Real-Time PCR探针法定量检测沙门菌方法的建立及应用

目的建立快速、特异性好、灵敏度高的Real-Time PCR方法定量检测沙门菌。方法根据编码沙门菌肠毒素基因stn的核苷酸序列,设计荧光探针和一对引物,通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立定量检测沙门菌的方法。结果建立的Real-Ti me PCR方法有很好的特异性与敏感性,所检测沙门菌结果均为阳性,而非沙门菌均为阴性;标准曲线相关系数为R2=0.993,其敏感性为5CFU。运用该方法对108份鸡粪便、50份鸡肉以及58份水样进行检测,阳性率分别为3.7%(6/108)、4%(2/50)和3.4%(2/58),与传统细菌分离检测结果相符。结论结果表明该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点,此研究为环境及疾病诊断中沙门菌快速检测提供了新方法。

结核分枝杆菌CFP32蛋白的原核表达及其细胞免疫学检测价值评价

目的克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白,并对其进行细胞免疫学特性评价。方法 PCR扩增cfp32基因片段,与pET-30a(+)构建重组表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,对融合蛋白进行纯化,ELISPOT试验测定其细胞免疫应答,通过牛结核外周血IFN-γ释放试验,评价其作为刺激原的能力。结果构建了正确基因序列的重组质粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表达,融合蛋白大小为32ku,纯度达91.8%。ELISPOT显示CFP32蛋白刺激机体分泌IFN-γ和IL-4的细胞数相当,呈现Th1/Th2的平衡。在牛结核外周血IFN-γ释放试验中,其阳性符合率和阴性符合率分别为40%和73.3%,与牛型PPD刺激结果的相关系数为0.684。结论成功构建CFP32蛋白重组表达菌,该蛋白引起的免疫应答趋向于Th1/Th2的平衡,并且有作为刺激原用于牛结核病检测的潜力。

南京地区妊娠期糖尿病发病率分析

目的:调查南京市育龄期妇女妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)发病率,以期获得南京地区GDM的流行现况。方法:收集2016年4月~2016年8月进行产检的5712例孕24~28w周孕妇的口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)结果,GDM诊断参照2014年国际糖尿病与妊娠研究组制定的GDM诊断标准判定。随后按孕妇年龄分为20~24岁(A组),25~29岁(B组),30~34岁(C组)和≥35岁(D组) 4组,分别计算各组空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、OGTT 1小时糖(OGTT-1h)、OGTT 2小时糖(OGTT-2h)水平及GDM发病率。结果:随着年龄增长,孕妇FPG、OGTT-1h及OGTT-2h水平不断增高,差异具有明显的统计学意义(FPG:H=37.30,P<0.0001;OGTT-1h:H=202.9,P<0.0001;OGTT-2h:H=185.9,P<0.0001);本次调查显示GDM患病总人数为1203人,总发病率为21.06%,A、B、C、D组GDM检出率为别为14.72%、17.72%、25.21%和32.12%,不同年龄组GDM发病率具有明显的统计学差异(x^2=89.10,P<0.0001)。结论:南京地区GDM发病率处于较高水平,尤其是30岁以上孕妇的GDM发病明显增加。