牦牛源多杀性巴氏杆菌rpoE基因缺失株的构建及生物学特性分析

为研究牦牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)rpoE基因在Tibet-Pm1菌株中的部分生物学特性,试验利用同源重组技术筛选出rpoE基因缺失株Tibet-Pm1-ΔrpoE,分析缺失株和原菌株Tibet-Pm1在外界环境生长、环境胁迫存活率、生物被膜形成、细胞黏附性和致病性上的差异。结果表明:利用同源重组技术成功构建出rpoE基因缺失株Tibet-Pm1-ΔrpoE。缺失株的平均OD值为0.135,显著低于Tibet-Pm1菌株的平均OD值0.337(P<0.05)。在20℃条件下,Tibet-Pm1-ΔrpoE菌株生长较缓慢,两种菌株的生长存在明显差异;不同温度下3 h内两种菌株生长的差异性较小。在紫外线照射条件下,Tibet-Pm1-ΔrpoE菌株的存活率由21.3%降到16.7%;在50℃高温条件下,Tibet-Pm1-ΔrpoE菌株的存活率由0.75%降到0.59%。在细胞黏附试验中,Tibet-Pm1-ΔrpoE菌株在MDBK中的黏附性由6.67×10^(5)cfu降到1.20×10^(5)cfu,两种菌株在PK15细胞中的黏附性差异不明显。在11 h内攻毒的家兔全部死亡,但以Tibet-Pm1-ΔrpoE菌株攻毒的家兔平均生存时间长,剖检死亡家兔可见部分器官出现充血或出血现象,盲肠充气。说明rpoE基因是Tibet-Pm1菌株的潜在毒力因子,缺失rpoE基因可抑制Tibet-Pm1菌株生物被膜的形成,影响其抵御外界环境的能力,黏附性下降,致病性降低。

西藏牦牛源沙门菌的分离鉴定及耐药分析

采集西藏拉萨、林芝、那曲3个地区共91份腹泻牦牛粪便,通过细菌的培养特性、生化鉴定、药敏试验以及分子生物学方法对样品进行沙门菌的分离鉴定,检测沙门菌特异性基因,并对分离菌株进行血清型分型、遗传进化分析、耐药表型及耐药基因型研究。结果表明:91份样品中共分离出11株沙门菌,分离率为12.08%,其中都柏林沙门菌和丙型副伤寒沙门菌为优势血清型;分离菌株的测序结果表明其与英国人源(CP054827.1)、美国牛源(CP025241.1)等多种动物源沙门菌invA基因的核苷酸序列同源性高达100%。药物敏感性试验结果表明,11株分离菌株对6类广谱抗生素药物均表现出不同程度耐药,对β-内酰胺类抗生素的耐药率达81.82%,对喹诺酮类药物则较为敏感,其耐药率仅为18.10%;分离菌株均存在多重耐药现象,对耐药基因检测发现,tetA基因的检出率最高为90.91%,其次是floR和blaTEM耐药基因的检出率为81.82%,而喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB未检出。本研究通过对西藏牦牛源沙门菌的优势血清型、流行情况、遗传进化趋势及耐药情况进行分析,对牦牛源沙门菌的防治、后续研究及临床用药等方面具有重要的指导意义。