具有高效降解地塞米松能力的伯克霍尔德菌CQ001株的分离及功能基因组学分析

目的研究细菌对地塞米松类甾体激素的降解作用及其分子机制,为构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌奠定基础。方法采用富集培养法从医院废水中分离降解地塞米松的细菌,采用固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法检测细菌对地塞米松的降解效能,通过16S r DNA序列测定进行鉴定。用Illumina Hiseq4000结合第三代测序技术对降解菌的全基因组测序,并进行序列组装、注释和分析,对降解地塞米松相关基因进行RT-q PCR验证。结果分离到1株对地塞米松有较高降解作用的细菌,经鉴定属于伯克霍尔德菌属(Burkholderia),命名为Burkholderia sp.CQ001。该菌对地塞米松磷酸钠及地塞米松的降解率分别为84.8%和77.11%。全基因组测序表明Burkholderia sp.CQ001包含2条染色体和4个巨型质粒,与代谢相关基因大部分集中在2号染色体上,共3 260 157 bp。生物信息学分析表明,该菌含有甾体代谢通路中许多重要酶类的编码基因,其中与地塞米松降解相关的有ABC转运子,3-甾酮-9α-脱氢酶等,这些基因在以地塞米松磷酸钠为碳源的培养条件下表达量不同程度地高于以蔗糖为碳源的培养条件。结论 Burkholderia sp.CQ001是一株具有强大的代谢功能和代谢途径丰富的细菌,具有降解地塞米松类甾体激素的性能,该菌株为后续研究甾体激素的降解机制和构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌提供了菌种。

法文版《围城》修辞鉴赏

《围城》是钱钟书先生的代表作,并被译为多国文字在世界范围内出版发行。钱钟书以其渊博的学识、精妙的手法、丰富的想象力造就了《围城》独特的语言艺术。小说中集比喻、讽刺、幽默等多种修辞手法于一体,是中国乃至世界文坛的一块瑰宝。本文以法文版《围城》的第一章为例,从修辞和法汉对照的角度,鉴赏其语言艺术。

饮水中地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响

目的探讨水环境地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响。方法将20只Balb/c小鼠随机分为对照组和实验组,每组5只。实验低剂量组灌喂含0.035 ng地塞米松磷酸钠的饮用水,中剂量组为0.225 ng、高剂量组为2.25 ng,对照组灌喂不含地塞米松磷酸钠的饮用水。每日观察小鼠行为、皮毛、大便等的变化。灌喂第36 d处死小鼠,取回盲部组织提取细菌基因组DNA,扩增16S r DNA V6可变区,扩增产物变性凝胶梯度电泳(DGGE)后分析。切取DGGE图谱上的优势条带,扩增、纯化后克隆测序,其序列BLAST比对分析。结果各实验组小鼠均出现性情暴躁、斗殴打架、咬断尾部等现象。DGGE图谱聚类分析表明各组小鼠回盲部均具有较稳定的菌群;主成分分析表明各组的优势菌群存在一定差异;菌群多样性分析表明,与对照组相比,低剂量组菌群的种类和数量明显增加(P<0.05);中、高剂量组种类和数量显著增加(P<0.01)。16S r DNA V6区序列分析显示实验组和对照组具有共有菌属15种、差异菌属2种,优势菌种类和比例发生了改变。对照组有乳杆菌属的细菌定植,而中、高剂量实验组乳杆菌属的细菌消失,却出现志贺菌属的细菌。结论饮水地塞米松污染可影响小鼠神经系统,使小鼠肠道内细菌的种类、数量及优势菌所占的比例发生改变,菌群多样性增加;抑制肠道益生菌的定植,利于肠道致病菌的入侵。

用新的促生长剂给欧洲饲料工业增添风味:此种热衷是否有点过头?

由于预期所有的抗生素促生长剂在欧盟范围内都将被禁止使用,因此,开发未来的饲料添加剂产品正在被列入议事日程,而且这种情况似乎已经主宰了多数的技术性专题讨论会,今年早些时候在西班牙伦斯举行的地中海地区饲料制造会议,情况也不例外。对于饲料生产者和动物养殖者来说,重要的问题无疑是:能用什么来代替饲料中的抗生素促生长剂?

不同氮磷比对米氏凯伦藻和中肋骨条藻种群竞争的影响

采用单养和混养方法研究不同氮磷比培养条件下（1∶1、10∶1、25∶1、50∶1、75∶1、100∶1、150∶1）对米氏凯伦藻（Karenia mikimotoi）和中肋骨条藻（Skeletonema costatum）生长和种间竞争参数的影响。结果表明：单养时,米氏凯伦藻和中肋骨条藻的最适氮磷比都为50∶1（N：150μmol/L、P：3μmol/L）,米氏凯伦藻和中肋骨条藻分别在氮磷比值为25～75、25～150之间能保持较好的生长。混合培养条件下,两种微藻的环境负载能力（K）、生长率（r）都低于单独培养。中肋骨条藻在各个氮磷比条件下的竞争中完全处于优势,中肋骨条藻对米氏凯伦藻的抑制参数β均高于米氏凯伦藻对中肋骨条藻的抑制参数α,并且β：α随着氮磷比的升高而升高。

地塞米松降解新基因的探讨

目的：探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法：根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001（B.CQ001）全基因组测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因。提取B.CQ001总RNA逆转录为c DNA,以c DNA为模板,利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术（RT-q PCR）验证筛选出的新基因,测序鉴定后连接原核表达载体p ET-28a-c（＋）,构建重组质粒p ET-28a-Ivd。将p ET-28a-Ivd转化感受态B.CQ001,高效液相色谱（HPLC）验证表达菌降解能力的提升。结果：从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因,分别为ORF05499、ORF05827、ORF06535,其表达产物分别为过氧化物还原酶、甾酮异构酶、异戊酰辅酶A脱氢酶;RT-q PCR分析显示,3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调,基因ORF06535表达上调明显;在B.CQ001中过表达基因ORF06535,HPLC检测显示,表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%,相比原菌B.CQ001有明显提升。结论：在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535,并完成基因克隆和功能验证,为制备地塞米松及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息。