托伐普坦在大鼠体内的代谢产物鉴定分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UFLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对托伐普坦在大鼠体内的代谢产物进行鉴定,并探讨托伐普坦在大鼠体内的可能代谢途径。方法收集单剂量灌胃60 mg·kg-1托伐普坦固体分散体溶液后大鼠的血浆、尿液和粪便样品,乙腈沉淀蛋白,采用UFLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术进行分析,然后经Xcalibur 2.0版软件对所得数据进行处理。结果根据各化合物的保留时间、精确相对分子质量、特征碎片离子及相关文献报道,在大鼠生物样品中共鉴定出35种代谢物,血浆、尿液和粪便中分别鉴定出23、26和30种,托伐普坦的主要代谢途径为羟基化、羧基化、水解、脱氢、葡萄糖醛酸化和乙酰化等。结论实验结果确证了托伐普坦在大鼠体内的主要代谢物,丰富了托伐普坦的体内代谢产物谱,为托伐普坦的药效物质基础的深入研究提供实验依据。

高效液相色谱法测定美林洛尔与人血浆蛋白的结合率

目的：建立人标准血浆中美林洛尔（MELE）浓度的测定方法，测定美林洛尔在人标准血浆中的蛋白结合率，并计算相关参数。方法：用平衡透析法测定血浆蛋白结合率，用高效液相-荧光检测法测定血浆中药物总浓度及游离药物浓度。结果；美林洛尔与人标准血浆的蛋白结合率随药物浓度发生变化约为7．02％～18．75％。MELE与白蛋白结合的表观最大能力岛为0.016μmol·g^-1,药物-蛋白复合物的解离常数Kdp为1．734μmol·g^-1,结合常数Kp为1．2719×10μmol·g^-1,结合位点n为0.0016。结论：在体外美林洛尔与人标准血浆的蛋白结合率较低，并随着药物浓度的增加结合率下降。

环孢素A固体分散体的制备及体外研究

目的利用固体分散技术改善环孢素A(CsA)的溶解性能,提高其体外溶出速率。方法以Poloxamer188为载体,溶剂熔融法制备不同比例组成的环孢素A固体分散体,考察体外溶出速率及不同转速和不同溶出介质对溶出的影响,并配合X-射线粉末衍射分析药物在载体中的存在状态。对溶出度结果用Weibull分布模型进行拟合,计算体外溶出主要参数td和t50,并进行方差分析。结果CsA在药物-载体比例为1:4或1:6的固体分散体中呈非晶态。固体分散体的溶出速率与相应物理混合物及原料药间存在极显著差异(P<0.01),溶出介质对药物溶出无显著性影响(P>0.05)。结论制成固体分散体能显著提高CsA的溶出速率。

生物药剂学分类系统及其应用(上)

生物药剂学分类系统（biopharmaceutics classification system，BCS）的概念自从1995年被提出后，人们对其有效性和适用性进行了广泛而深入的研究。经过十多年的发展，BCS现已成为世界药品管理中一个越来越重要的工具。美国FDA在2000年8月颁布了基于BCS的口服速释制剂免除生物利用度（bioavailability，BA）及生物等效性（bioequivalence，BE）的工业指导原则。

生物药剂学分类系统及其应用(下)

2．2 在药品开发领域的应用 自20世纪60年代以来，人们越来越认识到口服吸收过程中药物在胃肠道溶出以及在肠壁上通透的重要性。近年来，许多用于建立BCS的研究已为新药开发尤其在药物通透性领域，提供了重要的定量数据。具体地说，BCS还在筛选候选药物进行全面开发、剂型选择、固体制剂溶出度试验体内外相关的可能性及预测并阐述与食物的相互作用等方面具有重要意义。

环孢素固体分散体大鼠体内药动学及相对生物利用度的初步研究

目的:研究环孢素的全血浓度测定方法;以市售新山地明(Neoral)为参比制剂,研究自制环孢素固体分散体(CsA- SD)在大鼠体内的药动学和相对生物利用度。方法:两组SD雄性大鼠分别单剂量给予CsA-SD和Neoral,按设计采集48 h 内动态血标本,采用HPLC法测定血药浓度。应用3P87药动学程序对数据进行拟合计算药动学参数。结果:单次给药后Ne- oral和CsA-SD的主要药动学参数Cmax分别为(4 029.7±405.8)ng·ml-1和(3 958±1 455)ng·ml-1,tmax分别为(1.54±0.57) h和(1.90±0.51)h,AUC0→8分别为(75 072±25 453)ng·h·ml-1和(84 861±26 392)ng·h·ml-1。统计分析结果显示,各主要药动学参数均无显著性差异。以Neoral为参比制剂,单剂量给药时CsA-SD的相对生物利用度为113.04%。结论:环孢素固体分散体在大鼠体内显示与市售新山地明相近的生物利用度。

健康受试者口服复方缬沙坦后血浆中氢氯噻嗪和缬沙坦浓度测定

目的建立高效液相色谱法测定健康受试者口服复方缬沙坦后血浆中氢氯噻嗪、缬沙坦的浓度。方法以奥硝唑为氢氯噻嗪内标、坎地沙坦为缬沙坦内标。氢氯噻嗪色谱条件，Eurospher-100 C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（30：70，V/V）；流速：1mL·min^-1；柱温：室温；检测波长：272nm；选样量：50μL。缬沙坦色谱条件：Eurospher-100 C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-0．02mol·L^-1磷酸二氢钾（70：30，V/V）磷酸调pH值2．40；流速：1mL·min^-1；柱温：室温；检测波长：激发波长265nm，发射波长395nm；进样量：20μL。结果氢氯噻嗪在5—1000ng·mL^-1范围内、缬沙坦在0.025—10．000μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0．9995，r=0．9995），定量下限分别为2．5，10ng·mL^-1，氢氯噻嗪日内精密度RSD为1．42％-5、22％，日间精密度为2．62％-9、04％；缬沙坦日内精密度RSD为0．52％～3．30％，日间精密度为2．00％～9．01％。结论该法简便灵敏准确、重现性好，可用于血浆中氢氯噻嗪、缬沙坦的测定。

氟尿嘧啶白蛋白磁性亚微球特性研究

目的制备以牛血清白蛋白为载体的氟尿嘧啶白蛋白磁亚微球（FU-AMOM）并研究其有关特性。方法采用乳化-超声-固化法制备FU-AMOM并考察其外观、粒径及其分布;测定FU-AMOM的载药量及包封率;评价其释药特征并对释药曲线进行方程拟合;考察荷瘤小鼠体内靶向性。结果制得FU-AMOM平均粒径为（321±50）nm,分布范围为100～600nm;平均载药量为（9.69±0.19）%;平均包封率为（70.36±0.53）%;体外动态透析法释药模型符合Higuchi方程,具有明显的缓释作用;荷瘤小鼠试验结果表明,FU-AMOM于磁场作用下在肿瘤组织聚集,具有靶向性。结论FU-AMOM磁亚微球具有较好的缓释和靶向作用,有希望作为新型药物载体用于靶向给药系统。

普朗尼克抑制P-糖蛋白药泵的作用

采用Caco-2细胞和动物模型,以维拉帕米为阳性对照,考察普朗尼克对塞利洛尔在Caco-2单层膜与肠道黏膜吸收的影响。用高效液相色谱法检测药物浓度,计算表观透过系数、吸收速率常数与有效透过系数等参数,评价普朗尼克对P-糖蛋白药泵的抑制作用。结果显示,塞利洛尔Caco-2细胞膜转运基底端(BL)到顶端(AP)的透过系数Papp大于AP到BL的Papp,分别为(2.10±0.13)×10-6和(0.333±0.018)×10-6cm.s-1,且双向转运受到抑制剂维拉帕米和普朗尼克的影响。大鼠在体肠灌流实验中塞利洛尔在十二指肠段、空肠、回肠与结肠段的吸收速率常数ka分别为(0.09±0.03),(0.14±0.04),(0.11±0.03)与(0.05±0.02)h-1;合用维拉帕米后各肠段吸收速率常数ka分别为(0.14±0.03),(0.24±0.02),(0.25±0.03)和(0.23±0.02)h-1;合用普朗尼克后各肠段吸收速率常数ka分别为(0.13±0.02),(0.22±0.02),(0.22±0.03)和(0.20±0.03)h-1。可见,普朗尼克通过抑制P-gp外排作用,促进塞利洛尔Caco-2细胞膜和大鼠肠道黏膜的吸收。

聚氧乙烯醚类表面活性剂对大鼠体内细胞色素P450 3A活性的影响

为研究药用辅料对大鼠体内细胞色素P450 3A(CYP3A)药酶活性的影响,大鼠分别灌胃生理盐水、酮康唑(75 mg.kg-1.d-1),曲拉通X-100(30 mg.kg-1.d-1)、聚氧乙烯蓖麻油(EL35,150 mg.kg-1.d-1)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40,150 mg.kg-1.d-1)5 d后,12 h禁食再经十二指肠给予上述试药,20 min后给予咪哒唑仑作为探针。分别测定咪哒唑仑及其代谢物1′-羟基咪哒唑仑在大鼠体内的血药浓度并计算其药代动力学参数,比较曲拉通X-100、EL35和RH40处理组与生理盐水组的药代动力学差异。结果显示,阳性对照药酮康唑对CYP3A有明显的抑制作用;而曲拉通X-100、EL35和RH40使1′-羟基咪哒唑仑与咪哒唑仑的AUC0-∞比值分别从1.14降至0.90、1.03和0.64,统计学分析表明曲拉通X-100和EL35对CYP3A没有明显的抑制作用,而RH40对CYP3A有明显的抑制作用。因此,在药物制剂研究及临床应用中,RH40有可能影响经细胞色素P450 3A转化的药物代谢及处置,增加药物的生物利用度,对药物的临床应用产生显著影响。

不同产地人工蛹虫草子实体及冬虫夏草中核苷类成分的比较

目的测定不同产地人工蛹虫草子实体与天然冬虫夏草中核苷类成分的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据。方法以尿苷、腺苷、虫草素为主要评价指标,采用高效液相色谱法测定9个厂家11批人工蛹虫草样品和4种来源天然冬虫夏草中核苷类成分的含量。结果不同产地人工蛹虫草的核苷含量为0.265%～0.870%,冬虫夏草核苷含量为0.168%～0.250%,其中虫草素含量变化较大,而天然冬虫夏草中几乎不含或含有少量虫草素。结论产地不同,人工蛹虫草中核苷类成分含量不同,但明显高于天然冬虫夏草中核苷类成分含量,其中腺苷、尿苷含量较为稳定,可为人工蛹虫草的合理开发利用和质量评价提供依据。

国产和进口坎地沙坦酯片人体生物等效性评价

目的评价国产和进口坎地沙坦酯的人体生物等效性。方法18名健康男性志愿者随机交叉口服受试制剂国产坎地沙坦酯片和参比制剂进口坎地沙坦酯片16 mg,采用荧光高效液相色谱法测定血浆中药物浓度。结果受试制剂和参比制剂的t_(max)分别为(4.56±1.10)和(5.17±1.29)h;p_(max)分别为(161.5±50.8)和(148.0±41.3)mg·L^(-1);t_(V2)分别为(8.99±2.06)和(8.27±1.70)h;AUC_(0-48)分别为(1885.8±578.2)和(1863.7±443.8)μg·h·L^(-1);AUC_(0-∞)分别为(1950.1±592.3)和(1917.3±447.6)μg·h·L^(-1)。国产坎地沙坦酯片的相对生物利用度为(102.9±28.1)%。结论经统计学分析,国产坎地沙坦酯片与进口坎地沙坦酯片具有生物等效性。

rCYP3A4孵育条件的优化及其中1’-羟基咪达唑仑含量测定

目的建立rCYP3A4中1’-羟基咪达唑仑含量测定方法,并对rCYP3A4体外孵育条件进行优化。方法反相高效液相色谱法RP-HPLC测定rCYP3A4中1’-羟基咪达唑仑的浓度,用单因素实验法对其体外孵育条件进行优化,用线性Lineweaver-Burk双倒数作图法研究rCYP3A4酶促动力学。结果1’-羟基咪达唑仑在18.20-1820.00ng·mL^-1内线性关系良好;体外优化的孵育条件为5μmol·L-1咪达唑仑、10pmolrCYP3A4、孵育10min;rCYP3A4酶促动力学参数Km为0.96μmol·L^-1,Vmax为0.78pmol·min^-1。结论RP-HPLC法操作简便、灵敏、快速,适用于rCYP3A4中1’-羟基咪达唑仑的浓度测定,rCYP3A4孵育条件优化及其酶促动力学研究为研究经CYP3A4代谢的药物相互作用及其他物质对CYP3A4酶的影响提供理论依据。

几种表面活性剂的细胞毒性研究

目的:研究不同的表面活性剂的细胞毒性,从而筛选出低毒性的表面活性剂,为以后的进一步研究表面活性剂逆转肿瘤细胞的多药耐药提供基础。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑盐)检测方法,研究9种不同类型表面活性剂对肿瘤细胞K562／S及其多药耐药株K562／A02的细胞毒性,并比较同一表面活性剂对药物敏感肿瘤细胞和多药耐药肿瘤细胞的细胞毒性之间的差别。结果:非离子表面活性剂对肿瘤细胞K562／S及其多药耐药细胞K562／A02的IC50在10-1mg·ml-1数量级,阳离子及阴离子表面活性剂的IC50为10-3 mg·ml-1数量级。结论:非离子表面活性剂的细胞毒性最小,阴离子表面活性剂次之,阳离子表面活性剂的细胞毒性最大,同一表面活性剂对药物敏感肿瘤细胞及其肿瘤耐药细胞的细胞毒性没有差异,表明表面活性剂对肿瘤细胞多药耐药的逆转不是由其本身的细胞毒性引起的。

高效液相色谱法测定人血浆中坎地沙坦的含量

目的:建立反相高效液相色谱法检测血浆中坎地沙坦含量.方法:采用Europspher-100 C18柱,以甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(66:34,磷酸调pH至2.4)为流动相,缬沙坦作内标,荧光检测器激发波长为265 nm,发射波长为395nm.结果:血浆中坎地沙坦浓度在2.23～557.50 ng·ml-1范围内线性关系良好,r=0.999 9(n=7),低、中、高3个浓度样品的提取回收率和方法回收率分别为57.84%,55.82%,55.23%和91.94%,93.37%,96.42%.结论:本法操作简便,灵敏度高,重现性好,可用于血浆中坎地沙坦的含量测定.

复方缬沙坦分散片在健康人体内的药物动力学

研究10名健康受试者单剂量与多剂量口服复方缬沙坦分散片后的药物动力学。以HPLC法测定血浆中缬沙坦与氢氯噻嗪浓度。结果表明,单剂量与多剂量所得缬沙坦与氢氯噻嗪在人体内的药动学参数t_(1/2)、t_(max)、C_(max)、AUC_(0→∞)无显著性差异(P>0.05),提示分散片中两组分在人体内的吸收速率和消除速度不随连续给药而变化,且显示连续给药后药物在体内基本无蓄积。

苯酰甲硝唑干混悬剂的人体生物等效性研究

目的考察苯酰甲硝唑混悬剂的人体生物等效性。方法采用随机、开放、双周期交叉试验设计,将18例男性健康受试者随机平均分为两组,分别单剂量口服1 280 mg受试制剂苯酰甲硝唑混悬剂或参比制剂苯酰甲硝唑胶囊,经1周清洗期后交叉服药。采用高效液相色谱法测定给药后不同时间甲硝唑的血药浓度,比较两制剂的生物等效性。结果苯酰甲硝唑受试制剂与参比制剂的主要药动学参数Cm ax分别为(10.79±0.96)和(10.12±2.12)μg.mL-1,tm ax分别为(4.00±0.84)和(4.67±1.14)h,t1/2分别为(10.69±2.46)和(10.80±2.00)h,AUC0→t分别为(196.25±30.67)和(191.95±30.13)μg.h-1.mL-1。AUC0→∞分别为(207.26±37.46)和(202.64±34.49)μg.h-1.mL-1。受试制剂的相对生物利用度为(103.60±17.50)%。结论该试验所建立的方法灵敏、准确、简便,受试制剂与参比制剂生物等效。

含Cremophor RH40的自微乳化给药系统对大鼠体内CYP3A酶的抑制作用

目的考察包含表面活性剂Cremophor RH40的自微乳化给药系统(SMEDDS)对大鼠体内细胞色素P450(CYP3A)活性的影响。方法以咪达唑仑(MDZ)为模型药物,采用高效液相色谱(HPLC)法测定MDZ及其活性代谢物1'-羟基咪达唑仑在大鼠体内的血药浓度,并计算其药动学参数,考察MDZ自乳化微乳对大鼠体内CYP3A活性的影响,同时采用蛋白免疫印迹法检测上述制剂对大鼠肠黏膜上CYP3A蛋白表达的影响。结果 MDZ微乳的口服生物利用度为MDZ片的3.14倍,且显著降低1′-羟基咪达唑仑与咪达唑仑血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)0-∞的比值(由0.25减少到0.11,P<0.05);MDZ自微乳化制剂还可显著延长MDZ在体内的平均滞留时间(MRT)及半衰期(t1/2)[MRT由(0.63±0.13)h延长至(1.23±0.38)h;t1/2由(0.33±0.11)h延长至(0.65±0.25)h,P<0.05];相对于MDZ片,SMEDDS口服给药后,肠道CYP3A的蛋白表达水平显著降低。结论含有Cremophor RH40的SMEDDS能抑制大鼠体内CYP3A的代谢,从而提高CYP3A底物药物的口服生物利用度。

高效液相色谱法考察更昔洛韦在Caco-2细胞上的转运特征

目的:建立更昔洛韦的高效液相色谱测定法,研究其在Caco-2细胞上的转运特征。方法:采用Eurospher-100C_(18) (250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(8:92).流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为254 nm,考察介质pH、药物浓度、P-gp抑制剂对更昔洛韦在Caco-2细胞上转运的影响。结果:更昔洛韦在Caco-2细胞单层膜上的转运量具有一定的浓度和时间依赖性,但介质pH对其跨膜转运无显著影响;更昔洛韦在50mg·L^(-1)质量浓度下AP→BL、BL→AP方向转运表观渗透系数分别为(0.59±0.11)×10^(-6)"和(2.0±0.4)×10^(-6)cm·s^(-1)。P-gp抑制剂维拉帕米能够增加更昔洛韦跨膜转运量。结论:更昔洛韦在Caco-2细胞上转运表现为被动扩散且有外转运蛋白参与更昔洛韦跨膜转运。

食物对复方缬沙坦片中缬沙坦人体药动学特征的影响

目的:研究食物对复方缬沙坦片中缬沙坦人体药动学的影响。方法:采用随机交叉试验设计,10名男性健康志愿者禁食12 h后空腹或进食后口服复方缬沙坦片2片(每片含缬沙坦80 mg),反相高效液相色谱法测定血浆中缬沙坦的浓度。结果:受试者空腹和进食后口服复方缬沙坦片,血浆中缬沙坦的主要药动学参数:Cmax分别为(4．238±0．822)和(2．984± 1.230)mg·L-1,Imax分别为(2.70±0．63)和(3．20±1.38)h,AUC0→∞分别为(32．06±7.14)和(25．39±7．60)mg·h·L-1,CL分别为(5.247±1.310)和(6．981±2.623)L·h-1。结论:食物对缬沙坦的药代动力学特征有显著影响。