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瑞氏木霉内切葡聚糖酶II在大肠杆菌中的重组表达及重组酶性质测定
被引量:
5
1
作者
雒军
宫晓燕
+4 位作者
魏炜
杨纯
方何建
戴亦军
袁生
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期92-98,共7页
将不含信号肽的瑞氏木霉内切葡聚糖酶II(Cel5A)的cDNA克隆到pET-28a(+)表达质粒上,与其N末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pET-28a(+)-egl2表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白.Western b...
将不含信号肽的瑞氏木霉内切葡聚糖酶II(Cel5A)的cDNA克隆到pET-28a(+)表达质粒上,与其N末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pET-28a(+)-egl2表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白.Western blot结果显示重组Cel5A相对分子分量大约为43000.进一步对重组Cel5A进行Ni-NTA亲和层析柱纯化并对其进行酶学性质测定,结果显示以羧甲基纤维素钠为作用底物时重组酶最适作用pH为4.5,最适作用温度为60℃;重组酶热稳定性较好,在65℃及以下保温1.5h,活性仍相当稳定.Mn2+对Cel5A的酶活有促进作用,Fe3+和Cu2+有抑制作用,其它金属离子和EDTA对酶活没有明显影响.底物特异性研究表明,重组Cel5A只能水解混合键葡聚糖和羧甲基纤维素钠,对混合键葡聚糖的水解能力是其对羧甲基纤维素钠水解能力的6.7倍,但对微晶纤维素、Glass microfiber filters、木聚糖、阿拉伯木聚糖和木葡聚糖没有水解作用.
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关键词
羧甲基纤维素钠盐
内切葡聚糖酶
大肠杆菌
Β-葡聚糖
瑞氏木霉
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职称材料
题名
瑞氏木霉内切葡聚糖酶II在大肠杆菌中的重组表达及重组酶性质测定
被引量:
5
1
作者
雒军
宫晓燕
魏炜
杨纯
方何建
戴亦军
袁生
机构
江苏省生物多样性和生物技术重点实验室
出处
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期92-98,共7页
基金
国家自然科学基金(211100B386)
文摘
将不含信号肽的瑞氏木霉内切葡聚糖酶II(Cel5A)的cDNA克隆到pET-28a(+)表达质粒上,与其N末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pET-28a(+)-egl2表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白.Western blot结果显示重组Cel5A相对分子分量大约为43000.进一步对重组Cel5A进行Ni-NTA亲和层析柱纯化并对其进行酶学性质测定,结果显示以羧甲基纤维素钠为作用底物时重组酶最适作用pH为4.5,最适作用温度为60℃;重组酶热稳定性较好,在65℃及以下保温1.5h,活性仍相当稳定.Mn2+对Cel5A的酶活有促进作用,Fe3+和Cu2+有抑制作用,其它金属离子和EDTA对酶活没有明显影响.底物特异性研究表明,重组Cel5A只能水解混合键葡聚糖和羧甲基纤维素钠,对混合键葡聚糖的水解能力是其对羧甲基纤维素钠水解能力的6.7倍,但对微晶纤维素、Glass microfiber filters、木聚糖、阿拉伯木聚糖和木葡聚糖没有水解作用.
关键词
羧甲基纤维素钠盐
内切葡聚糖酶
大肠杆菌
Β-葡聚糖
瑞氏木霉
Keywords
CMC-Na
endoglucanase
Escherichia coli
β-glucan
Trichoderma reesei
分类号
Q939.1 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
瑞氏木霉内切葡聚糖酶II在大肠杆菌中的重组表达及重组酶性质测定
雒军
宫晓燕
魏炜
杨纯
方何建
戴亦军
袁生
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009
5
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