化学恐怖及其医学防护研究

化学恐怖是恐怖活动的一种重要方式 ,化学武器的扩散和化学毒物的泛滥使化学恐怖更为频发和多样化。化学恐怖具有突发性、隐蔽性、中毒途径多、伤害规模大和社会影响广的特点。医学防护是控制化学恐怖伤害的中心环节。反化学恐怖医学研究将赋予防化医学研究以新的重要内容 ,防化医学研究为反化学恐怖医学研究奠定了基础。应及早确立反化学恐怖医学研究原则、主题和研究战略。

SHRSP大鼠的脑肾病理学变化

SHRSP大鼠是脑卒中自发性高血压模型动物 ,是从SHR大鼠中通过选择交配 ,再经继代近亲繁殖培育而成的。SHRSP大鼠的脑卒中发病率达 90 %以上 ,表现为脑出血或脑梗塞 ,病灶周围脑血管管壁肥厚并有玻璃样变性。血浆高血压蛋白酶原活性升高 ,相对分子质量变大 ,血压升高是促使脑卒中发生和发展的前提。经HFC负荷试验 ,血液中总胆固醇升高 5 9～ 9 7倍 ,肾病变加重 ,出现肾小球泡沫细胞。高血压症状持续的时间越长这种细胞出现的频率越高 ,高血压造成的肾毛细血管损伤加大了脂质的通透性 ,而高血脂是促进肾病变发展的重要因素。泡沫细胞好发于正在硬化的肾小球 ,这种选择性分布的特点人与大鼠是一致的 ,故有可能作为本病的模型使用。

二噁英毒理学研究进展

2 ,3,7,8 四氯二苯并对二口恶英 (TCDD)是毒性最强的二口恶烷类化学物质。它具备军用毒剂的某些特征 ,其毒性大于神经性毒剂沙林 ,被认为是一种潜在性化学战剂 ,军用植物杀伤剂 2 ,4 D和 2 ,4 ,5 T中都含有TCDD。日本厚生省将TCDD的 1日允许摄入量 (TDI)定为 10pg·kg- 1·d- 1。作为无毒性剂量则是利用大鼠实验所得的数据 ,即把不抑制体重增长 ,对肝脏无影响的暴露量 1ng·kg- 1·d- 1乘以1/ 10 0所得的数值。这个数值仅是 1984年评价指标的 1/ 10。欧洲各国认为TCDD作为一种致癌物质是有其阈值的 ,把雌大鼠肝脏形成结节的无毒性剂量为 10 0 0pg·kg- 1·d- 1,小鼠肝脏功能障碍无毒性剂量为 14 0 0pg·kg- 1·d- 1或大鼠生殖功能障碍的无毒性剂量 ,用安全系数 10 0～ 10 0 0来除以使适用于人 ,把 1～ 10pg·kg- 1·d- 1定为容许摄入剂量。意大利和瑞典分别用安全系数 10 0 0和 2 0 0来除。德国则把 1pg·kg- 1·d- 1定为临界值 ,超出 10pg·kg- 1·d- 1则必须采取紧急的行政干预措施。荷兰通过小鼠的生殖功能障碍试验把TDI定为 10pg·kg- 1·d- 1。1996年物质危险评价委员会提议采用猴子宫内膜症的无毒性剂量为 5 0pg·kg- 1·d- 1除以安全系数的方法 ,把 1pg·kg- 1·d- 1作为容许摄入剂量。但目前?

鸡痘病毒282E4株表达载体的构建及新城疫病毒F蛋白的表达

将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合启动子上游插入单一启动子 (人工合成的由 1 6个串联的 VV突变型p7.5早期启动子组成 )调控的 Lac Z基因或 GFP基因作为报告基因 ,构建成分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以复合启动子调控目的基因的 2个以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UBA-7-1 6Lac Z,2个以 GFP为报告基因的表达载体 p UTA-2 -F71 6和 p UBA-7-F71 6。在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入单一启动子和单一启动子调控的 Lac Z基因 ,得到 2个分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以单一启动子调控目的基因、以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UT1 61 6Lac Z和 p UB1 61 6Lac Z。将构建的 6个表达载体分别转染 FPV HIPRA株感染的鸡胚成纤维 ( CEF)细胞 ,仅在转染以 TK基因为侧翼、以 Lac Z为报告基因的 2个表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UT1 61 6Lac Z收获的病毒中 ,在 X-gal存在下 ,筛选出了表达 Lac Z的蓝色重组病毒蚀斑 ,而转染以 B片段为侧翼的表达载体在同样条件下未筛选到蓝色病?

中国流行株HIV-1gag-gp120与IL-2/IL-6共表达核酸疫苗质粒的构建和实验免疫研究

以pcDNA3.1(+ )为载体 ,构建了含中国流行株HIV_1gag_gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ;并以pIRES 1neo为载体 ,构建了gag_gp12 0与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒。将核酸疫苗质粒在体外转染BHK_2 1细胞 ,ELISA方法检测到 3种核酸疫苗质粒均表达了目的HIV_1结构蛋白。将核酸疫苗质粒免疫小鼠 ,免疫学指标检测结果表明 ,在本实验条件下 ,未能检测到含有gag_gp12 0的核酸疫苗质粒免疫鼠的细胞免疫和体液免疫功能的明显改变 ;而与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒使免疫鼠CD4 +、CD8+T细胞数量明显升高 ,ConA和LPS诱导的细胞增殖能力显著增强 ,CTL活性明显提高 。

重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性

目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒 VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免 疫原性。方法以 FPV 282E_4株 TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV) VP2 和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质 粒,命名为pUTALacVP和pUTA LacVPO。用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTA lacVP2和 vUTALacVP0。用这 2株病毒免疫 1周龄 SPF鸡,以常规疫苗为对照。结果 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体。在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水 平显著高于实验组。但攻击5 d后,实验组抗体水平明显升高。结论vUTALacVP2和 VPO在 CEF细胞中实现了高 效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗。

利用BrdU在CEF(TK^+)细胞中筛选TK^-重组鸡痘病毒

将新城疫病毒 (NDV)四平株 HN基因 ,插入不含报告基因、以 TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2中的复合启动子下游 ,获得重组表达质粒 p UTA- 2 HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,培养、收获病毒后 ,用含 40 m g/ L 5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶 (Brd U )的培养液 ,在 CEF(TK+)细胞中筛选培养 2代 ,然后用不含 Brd U的培养液进行病毒蚀斑纯化 ,成功筛选出表达 NDV HN蛋白的

HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达

在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。

IBDV VP2/VP243基因DNA疫苗表达质粒的构建与表达

将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) VP2 /VP2 4 3插入真核表达载体 pc DNA中 ,置于 CMV启动子的调控之下 ,构建成 DNA疫苗表达质粒 pc DNA VP2和 pc DNA VP0。分别转染 CEF细胞后 ,于 2 4、4 8、72 h取细胞裂解液进行 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot检测 ,pc DNA VP2于转染后 2 4 h呈阳性反应 ,4 8h表达量高于 2 4 h;pc DNA VP0于转染后 4 8h呈阳性反应 ,72 h表达量高于 4

17β-雌二醇对斑马鱼初期胚体节形成影响的研究

目的 探讨 17β 雌二醇 (E2 )对斑马鱼初期胚胎的毒性作用。方法 用 1 0、2 5、5 0、7 5、10、2 5、5 0μmol L的E2 给受精后 3h的斑马鱼胚染毒 ,进行形态学观察及原位杂交。结果 胚胎在受精后 4 8h ,5 0、7 5、10、2 5、5 0 μmol L试验组的死亡率分别是 0 %、3 6 %、6 4 %、10 0 %、10 0 %。在 7 5、10 μmol L染毒组出现脊柱弯曲、心囊水肿、血流停滞等畸形。使用MyoD探针 ,观察到体节数的减少及MyoD基因表达明显减弱。结论 E2 有致死、引起体节生成障碍 ,致使脊柱弯曲等致畸形作用。而且体节生成障碍可能是由于E2 对MyoD基因的影响所致。

人Ⅱ型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达

目的：表达ＨＩＶ２型基因工程ｇａｇ抗原。方法：将编码ＨＩＶ２型ｇａｇ的部分和全部ｐ５５ｇａｇ１／２基因，克隆到载体ｐＥＴ１７ｂ后，分别在Ｅ．ＣｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。结果：表达产物为５１和６１ｋＤ融合蛋白，并可与ＨＩＶ２病人血清发生特异性反应。表达量分别为菌体总蛋白的１２．２％和６．２％。结论：上述两种ｇａｇ重组蛋白可在Ｅ．Ｃｏｌｉ中得到表达，且有良好的抗原性。

HIV-2 env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达

将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白，表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００，而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定，原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析，分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。

铅诱发雏鸡红细胞核浓缩

目的 给新生鸡雏进行铅染毒,观察铅引起的红细胞核浓缩情况。方法 设立标准饲料对照组、标准饲料染毒组、低Ca对照组以及低Ca染毒组。染毒后的不同时间点,测定血铅浓度及细胞核浓缩情况。结果 标准饲料铅染毒组第2天血铅浓度达到最大值5 7 7μg g ;低钙铅染毒组血铅浓度第4天达到最大值37 2 μg g ;标准饲料染毒组与低Ca染毒组同时在第4、6、8天观察到显著的核浓缩,核浓缩在染毒第6天达到高峰。约2 0 %红细胞核浓缩,同时两染毒组的无核红细胞显著增加。观察低Ca对照组与低Ca染毒组的红细胞DNA电泳,低Ca染毒组DNA呈梯凳状,被分割成大小不等的DNA片段。结论 铅直接作用于鸡红细胞,引起细胞核浓缩。

实验动物瘙痒的评价

本文介绍了实验动物对痒刺激的各种反应 ,动物瘙痒反应可被类鸦片拮抗药物纳屈酮抑制。根据对动物受到痒刺激时所表现的行为和一系列的电生理活动进行分析 ,可客观地定量地评价动物瘙痒程度 ,利于抗瘙痒药物的药效作用和作用机制的研究。

中国流行株HIV-1B亚型Gag重组鸡痘病毒构建及其免疫原性

在以鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4 株为基础构建的重组表达质粒 p UTAL的 ATI-P7.5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株 HIV-1 B亚型核心蛋白 gag基因 ,构建了重组表达质粒 p UTALG。重组质粒与 FPV共转染 CEF细胞 ,进行了同源重组。通过 BUd R加压筛选 ,X-gal染色 ,获得重组鸡痘病毒 v UTALG。 Westernblot检测结果表明 ,重组病毒表达了 Gag蛋白 ,裂解后其相对分子质量分别为 5 5× 1 0 3 、4 8× 1 0 3 、2 4× 1 0 3 和1 7× 1 0 3 。以重组病毒 v UTALG免疫小鼠 ,与 FPV对照比较 ,小鼠脾 T淋巴细胞 CD4 + T细胞数和 CD4 + /CD8+值均有上升趋势 ,Con A、LPS诱导的脾细胞增殖能力增强 ,并能诱导 CTL和 HIV-1特异的血清抗体反应 。

中国流行株HIV-1Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定

目的 以鸡痘病毒为载体，表达ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白，进而研制ＡＩＤＳ疫苗。方法 以鸡痘病毒２８２Ｅ４株 非必需区ＴＫ基因为侧翼，插入ＶＶ突变型Ｐ７．５串联启动子和牛痘病毒Ａ包涵体晚期启动子与２０个串联的突变型 早期痘苗病毒Ｐ７．５启动子组成复合启动子及ＬａｃＺ报告基因构建重组表达质粒ｐＵＴＡＬ。在ＡＴ１－Ｐ７．５复合启动子 下游，插入编码中国流行株 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因（Ｂ亚型），构建了重组表达质粒ｐＵＴＡＬ－Ｇａｇ。重组质粒Ｇａｇ与ＦＰＶ共 转染ＣＥＦ细胞，进行同源重组。通过ＢＵｄＲ加压筛选，Ｘ－ｇａｌ染色，获得重组鸡痘病毒ｖＵＴＡＬＧ，用于感染ＢＨＫ细胞 并免疫小鼠。结果 经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测，重组病毒表达了Ｇａｇ蛋白相对分子质量分别为５５０００、４８０００、２４０００和 １７０００，为Ｇａｇ蛋白的Ｐ５５、Ｐ４８、Ｐ２４和Ｐ１７蛋白。重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。结论 所重组的病毒 成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株B亚型Gag和Env蛋白在大肠杆菌中的表达

将中国流行株 型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAGE电泳分析有重组蛋白表达。该蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加 ,4 h达到最大值。凝胶扫描结果显示 ,该蛋白表达量占菌体总蛋白的 1 0 .3 %。Western blotting检测 ,该重组蛋白可与中国流行株 HIV-1 B亚型阳性血清发生特异反应。重组表达质粒 p ETM1、p ETM2和 p ETM3仅在蛋白印迹中与 gp1 2 0单抗发生特异性反应而出现特异显色带 ,SDS-PAGE电泳分析未见表达蛋白带。

含中国流行株HIV-1Gag-gp120融合蛋白的重组鸡痘病毒的构建

目的 :用重组鸡痘病毒表达中国流行株HIV 1Gag gp12 0融合蛋白。方法 :在以鸡痘病毒 2 82E4株为基础构建的重组表达质粒pUTAL的ATI P7 5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株HIV 1Gag gp12 0嵌合基因 ,构建了重组表达质粒pUTALGP。重组质粒与FPV共转染CEF细胞 ,进行了同源重组。通过PUdR加压筛选 ,X gal染色 ,获得重组鸡痘病毒vUTAL GP。结果 :经Westernblot检测表明 ,重组病毒表达了Gap gp12 0融合蛋白 ,其分子量分别为 110× 10 3、6 9× 10 3、48× 10 3、2 4×10 3。电镜观察可见Gag蛋白在CEF细胞中形成的反转录病毒样粒子。重组病毒免疫小鼠 ,能够诱导HIV 1特异的血清抗体反应。结论 :重组鸡痘病毒成功的表达了Gag gp12 0融合蛋白 ,并进行了正确的加工。