基于斑马鱼模型探究药食同源复方降尿酸作用及成分分析

目的:探究芹菜籽、蒲公英、菊苣和玉米须四种药食同源中药联用下的降尿酸活性和作用机制,分析这四种中药复合提取物中具备降尿酸作用的主要效应成分。方法:随机选取5 dpf野生型AB品系斑马鱼,通过250μmol/L氧嗪酸钾和10μmol/L黄嘌呤钠盐诱导建立斑马鱼高尿酸模型,将已建立的斑马鱼模型随机分为对照组、模型组、别嘌醇组(136μg/mL)和复方提取物低、中、高(250、500及1000μg/mL)剂量组,每组30尾,连续干预24 h后,测定斑马鱼体内的尿酸荧光值和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运体(OAT1)基因表达水平;采用超高液相色谱-串联高分辨质谱仪为主要手段,以乙腈-甲酸水为流动相,梯度洗脱,ESI离子源正、负离子扫描模式,结合软件数据库搜索及相关文献进行成分鉴定。结果:与模型组相比,复方提取物低、中、高剂量组均能极显著降低高尿酸斑马鱼模型的血尿酸水平(P<0.01),且能够有效上调高尿酸斑马鱼体内HPRT1、OAT1的相对表达量、下调GLUT9的相对表达(P<0.05);初步筛选鉴定出黄酮及其苷类、有机酸、香豆素、萜类等22种活性成分,均为复方提取物中具有降尿酸机制的效应物质。结论:复方提取物可能通过上调模型组斑马鱼体内HPRT1、OAT1的表达量、下调GLUT9的表达,发挥多方位降尿酸的作用;所筛选鉴定的化学成分为下一步筛选作用靶点提供参考。

不同抗生素参与下呋喃唑酮代谢物在鲫鱼体内的残留消除规律

本文研究了土霉素、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶分别与呋喃唑酮联合药浴给药后,呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)在鲫鱼体内的残留消除规律。结果表明,呋喃唑酮在进入鲫鱼体内后迅速代谢成AOZ,停药0 h,呋喃唑酮对照组中鲫鱼肾脏、肝脏、肌肉中AOZ残留量便达到最高,分别为88.87、59.20、14.91μg/kg,平均消除速率为0.86、0.52、0.14μg/(kg·h);与对照组相比,土霉素-呋喃唑酮组鲫鱼肾脏、肝脏、肌肉中AOZ最大残留浓度明显增加,分别为165.40、125.29、28.69μg/kg,平均消除速率为1.71、1.17、0.31μg/(kg·h);而恩诺沙星-呋喃唑酮组鲫鱼肾脏、肝脏、肌肉中AOZ最大残留浓度与对照组相比显著减少,仅为46.70、41.64、9.69μg/kg,平均消除速率为0.36、0.31、0.03μg/(kg·h);磺胺间甲氧嘧啶-呋喃唑酮组中鲫鱼体内AOZ最大残留量及平均消除速率与对照组相比也有差异但变化不大。消除96 h后,各实验组鲫鱼体内仍有大量AOZ残留。本实验初步表明AOZ在鲫鱼体内难消除,且土霉素、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶能够不同程度的影响AOZ在鲫鱼体内的残留与消除,这为水产品质量安全监管和渔药残留研究提供了理论基础。

假睛东方鲀肝脏中河豚毒素的分离纯化

本文主要研究分子层析柱对河鲀鱼肝脏中河豚毒素分离纯化效果,为河豚毒素分离纯化工艺提供参考。本实验以假睛东方鲀肝脏为原料,对肝脏中的TTX进行提取,然后利用柱层析技术,确定了中性氧化铝柱、活性炭柱、CM HF和D152弱酸性阳离子交换树脂柱的上样液最适pH、吸附率、回收率。并根据四种柱子的吸附率和净化回收率的结果综合评定,其中D152弱酸性阳离子交换柱吸附率和回收率分别为91.97%和93.98%,且该柱子纯化河豚毒素的效果好,损失率低,最后得到产物多,因此选择D152柱作为分离纯化河豚毒素粗提液纯化柱。最后以假睛东方鲀肝脏为原料,将肝脏匀浆得到的粗提液经D152柱纯化分离后,结晶析出得到河豚毒素粗品,纯度为80%。此研究为河豚毒素分离纯化工艺提供有益参考。

高效液相色谱-串联质谱研究呋喃妥因代谢物在鲫鱼体内的残留消除规律

采用HPLC-MS/MS研究呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)在鲫鱼体内的残留消除规律。在22±1℃的水温下,模拟自然养殖条件,用质量浓度为100 ng·mL^(-1)的呋喃妥因药浴鲫鱼12 h,停止药浴后,对鲫鱼体内残留的AHD进行测定,并对鲫鱼内脏样品的提取进行除脂优化。研究结果显示,内脏经正己烷除脂后,加标回收率明显升高,为89.5%~110.2%;AHD在鲫鱼体内的残留量随着消除时间的增加呈现降低的趋势,鱼体肌肉中平均消除速率0.012μg·kg^(-1)·h,内脏中的平均消除速率为1.47μg·kg^(-1)·h,内脏的消除速率明显高于肌肉;鲫鱼肌肉和内脏中AHD的残留量分别在144 h和220 h后低于检测限0.25μg·kg^(-1)。

UPLC-MS/MS法测定凡纳滨对虾中呋喃西林新型生物标志物

建立了水产品中呋喃西林新型生物标志物的柱前衍生-液相色谱串联质谱分析方法。样品在酸性条件下,采用2,4-二硝基苯肼衍生,经乙酸乙酯提取、固相萃取小柱净化后,液相色谱串联质谱分析。根据腙类化合物衍生特性,对酸浓度、衍生时间、衍生试剂用量等参数进行了优化。质谱采用电喷雾负离子电离,多反应监测模式,外标法定量。目标腙类衍生物在0.4~20 ng·m L-1浓度范围内线性相关系数为0.993,相应的检出限和定量限分别为0.3μg·kg-1和1.0μg·kg-1,实际样品的平均加标回收率为83.4%~93.1%,相对标准偏差小于10%。本方法特异性好、灵敏度高,适合水产品中呋喃西林用药残留的分析测定。

溶剂萃取-柱前衍生-气相色谱法测定南极磷虾中脂肪酸组成和含量

建立了溶剂萃取-柱前衍生-气相色谱法分析南极磷虾中脂肪酸组成和含量。冷冻干燥处理后的南极磷虾粉,采用体积比为1:1的乙醇与正己烷混合溶剂萃取,虾油的最佳得率达8. 5%。虾油经皂化-甲酯化等衍生步骤后,采用气相色谱-氢火焰离子化检测器分析测定,外标法定量。结果显示,37种脂肪酸甲酯标准溶液在9. 01～235. 92 mg/L浓度范围内呈良好线性,线性相关系数范围为0. 849～0. 999。本方法适合南极磷虾中脂肪酸含量的分析测定。