2006年杭州市江干区食源性致病菌污染状况分析

目的:了解江干区食品中食源性致病菌污染状况,为食源性疾病的预防提供科学依据。方法:参考国标方法,采用进口显色培养基,对4类食品进行沙门菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157:H7和空肠弯曲菌的分离、生化及血清型鉴定。结果:109份样品共检出各类致病菌32株,总检出率为29.4%。其中副溶血性弧菌检出7株,检出率为38.9%;金黄色葡萄球菌检出8株,检出率为15.1%;单增李斯特菌检出15株,检出率为13.8%;沙门菌检出2株,检出率为1.8%;未检出EHEC O157:H7和空肠弯曲菌。结论:江干区食品中存在食源性致病菌的污染,其中生肉类、生食果蔬类和水产品受到的污染严重,副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌是污染食品的主要致病菌。

TaqMan荧光定量PCR技术快速检测霍乱弧菌方法的建立

目的:建立特异、灵敏、快速的TaqM an荧光定量PCR方法用于快速检测霍乱弧菌。方法:根据GenBank上的霍乱毒素(cholera toxin,CT)基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqM an探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,与副溶血性弧菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应;检测灵敏度达10 cfu/m l;反应体系具有很高的稳定性;整个操作过程仅需2 h。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适用于霍乱弧菌的日常监测和爆发疫情的应急诊断。

外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的研究建立双重荧光定量PCR技术快速检测产毒型O1群霍乱弧菌,并首次应用于外环境样本的检测中。方法从GenBank上下载O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfbO1和毒力基因CT序列,在rfbO1和CT保守区域设计特异性引物和探针,建立优化单一和双重荧光PCR反应体系,评价所建双重PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于外环境样本的监测检验中。结果该方法对O1群霍乱弧菌检测具有高度特异性,对rfbO1和CT基因序列检出限达到1.0×102cfu/mL,构建的体系定量标准曲线相关系数分别为0.999和0.998,具有较好的稳定性,并首次从352件外环境样本中检测出了5株产毒型O1群霍乱弧菌。结论本研究建立的双重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可应用于外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌的大范围筛查。

2023年浙江省杭州市一起由艾伯特埃希菌引起的学校聚集性疫情流行病学及病原学特征分析

目的了解2023年2月浙江省杭州市某学校发生的一起聚集性腹泻疫情的流行病学及病原学特征。方法对该起聚集性疫情开展流行病学调查,并采集腹泻患者肛拭子、食品留样及环境样品进行病原体快速筛查和分离鉴定,对分离的病原菌进行药敏试验和全基因组测序分析。结果本次聚集性疫情共造成22人出现腹泻、腹痛、呕吐等胃肠道症状。从6例腹泻患者肛拭子中分离到eae基因阳性菌株,经进一步鉴定确证为艾伯特埃希菌。6株菌对26种抗生素均敏感,核心基因组的多位点序列分型进化分析显示6株菌单独聚为一簇,且菌株间核心基因组的单核苷酸多态性差异仅在0~1 bp之间。结论这起学校聚集性腹泻疫情是由艾伯特埃希菌引起,为中国首次报道由艾伯特埃希菌引起的聚集性疫情。

一起两种血清型副溶血性弧菌食物中毒的毒力基因及分子分型研究

目的:对一起两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究。方法:参照WS271-2007等标准对10名病人的肛拭进行致病菌的检测,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验;运用荧光定量PCR检测分离菌株的毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果:10份样本均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份样本同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,相似度在92.9%～100%之间,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。结论:这是一起由O4:K8和O3:K6两种血清型副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。

杭州市江干区集中空调冷却水和冷凝水中军团菌的污染状况及血清型研究

目的:为了解杭州市江干区宾馆和超市等集中空调系统冷却水、冷凝水中军团菌污染状况及血清型分布。方法:依据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(2006)于2011年和2012年采集集中空调冷却水、冷凝水进行军团菌培养与鉴定,再以PCR方法加以验证。结果:共采集水样34份,在19份样品中分离到26株军团菌,冷却水、冷凝水的检出率分别为83.3%、25.0%,两者有显著性差异;血清型别多样,以LP7和LP1型为主,分别占检出株数的42.3%、38.5%。热处理与酸处理的检出率分别为50.0%、31.2%,两者无显著性差异。结论:杭州市江干区集中空调系统军团菌的污染较严重,血清型别以LP7和LP1型为主,需引起相关部门重视,预防军团菌病发生。

不同来源样品副溶血性弧菌分布现状及血清学和毒力基因研究

目的为了解江干区散发和暴发腹泻病人、零售水产品中副溶血性弧菌的分布状况,以及不同来源副溶血性弧菌血清型及毒力基因的异同。方法根据GB/T4789.7-2008进行副溶血性弧菌的分离鉴定及血清学试验,并用荧光定量PCR对分离的菌株进行毒力基因tdh和trh的检测。结果散发、暴发腹泻病人,零售水产品副溶血性弧菌检出率分别为16.36%(45/275)、85.71%(18/21)、39.69%(102/257)。临床菌株(包括散发、暴发病人)主要血清群为O3、O1和O4,水产品菌株的主要血清群则集中在O1、O10、O2、O5和O11中。临床菌株的tdh、trh检出率分别为96.88%(62/64),1.56%(1/64),水产品菌株的tdh、trh均未检出。结论副溶血性弧菌是江干区散发和暴发腹泻病人的主要致病菌,零售水产品受副溶血性弧菌污染严重,临床来源与水产品来源菌株在血清群分布及毒力基因携带有很大差异。

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析

目的对一起食物中毒事件分离的菌株进行病原学分析。方法参照《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》(GB 4789.7—2013)等标准对29份样本进行副溶血性弧菌检测,对分离的菌株进行血清学试验和tdh毒力基因检测,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 16份样本检出副溶血性弧菌20株,分属5个血清群:7株O1,5株O4,3株O5,4株O10,1株O11。分离自患者水样便和肛拭的6株菌株tdh均为阳性,分离自食品和加工环节的14株菌株tdh均为阴性。PFGE分子分型显示:分离自患者的同一血清群的菌株同源,不同血清群为不同克隆;分离自加工环节的与分离自患者的同一血清群的菌株为不同克隆。结论这是一起由O4和O10血清群副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。

一起由两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒调查

2009年8月,杭州市江干区报告了一起跨省旅游团的食物中毒,32名游客有10人发病,罹患率为31.2%。采集的10份病例肛拭,均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份肛拭同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌tdh毒力基因均为阳性。脉冲场凝胶电泳分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。