花粉管通道法转基因技术在甜瓜品种河套蜜瓜上的应用

为建立甜瓜(Cucumis melo L.)简便易行转化频率高的转基因技术,以甜瓜品种河套蜜瓜为受体材料,以含gus基因的植物双元表达载体pPZP221为外源基因供体,进行了花粉管通道法转基因研究.自交授粉后分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h,切去柱头上端1/3部分,立即滴加质粒DNA溶液,果实成熟后收获转化种子.对T0代植株进行PCR检测,结果表明不同时间处理所得到的T0代植株均具有较高的转化频率,其中授粉后7 h滴加DNA溶液所获得的转化率为28.3%.对一部分PCR阳性的T0代植株基因组DNA进行Southern杂交分析,结果表明所有样品均出现特异性杂交条带,证明外源基因已整合到受体植物基因组中.

瑞香狼毒有效成分的提取及性质分析

从瑞香狼毒 (StelleraChamaejasme .L)根部提取的一种物质 ,经纤维素柱层析 ,纯化出两种白色粉末。经紫外光谱分析及化学性质测定初步表明这种物质为黄酮类结构的化合物 ,这与有关文献报道的狼毒素性质一致。并对其药理学性质作了初步研究 ,结果表明 ,小鼠肌肉注射瑞香狼毒提取物成分A后 ,不会引起小鼠中毒死亡 ,也不引起过敏及严重的毒性反应。小鼠体重增长测定结果表明 :注射狼毒提取成分A ,小鼠体重增长受轻微的影响 ,较对照组增长缓慢 (t=2 74 ,p =0 0 2 9<0 0 5 )。对造成白细胞减少的免疫缺陷型小鼠注射狼毒提取物可使白细胞显著增高 (t=6 70 ,p =0 0 0 5 <0 0 1) ,表明有治疗和预防免疫缺陷的作用。初步证明该提取物对克氏肺炎杆菌有抑制作用。该研究为瑞香狼毒有效成分的研究和治疗提供了参考依据。

褪黑素对中国绒山羊在非生绒期促绒生长与绒产量的影响

用简易的外科手术对阿白羊、盖县绒山羊及二者杂交改良型绒山羊在梳绒后于其颈部皮下埋植一种含褪黑素的胶囊，经５周后受试羊群开始长绒，而对照群羊则未见绒生长。在９月中旬天然生绒季节开始时，受试群羊绒已分别长至３～５ｃｍ，而对照群则刚开始生长至２ｃｍ。表明上述各受试群当年被成功地诱发二次生绒。受试群较对照群可提早２个月生绒；当年春季埋植药囊，在８月下旬新生绒可脱落并呈绒花状浮于粗毛上，如不适时采集，则成絮状缠在粗毛或蹭于灌木丛中，自然流失；如适时梳绒则获收成，增加经济效益。但是当年夏季埋植药囊、初秋未行梳绒的受试群（盖羊），于翌年春与正常羊的采绒量相比，其产绒量较正常盖羊提高３４％。本试验进一步表明，在当年春季埋植药囊于秋季二次生绒和采收后，并不影响翌年春的正常产绒与产绒量收成。

采后河套蜜瓜(Cucumis melo cv.Hetao)软化的生理生化研究

采后河套蜜瓜贮存中，呼吸强度和内源乙烯含量均发生跃变，并都在采后６ｄ达到最大值，分别为７６．６ｍｇＣｏ２ｋｇ－１ｈ－１和１８．５５ｎｍｏｌｍｌ－１．可溶性固形物在采后４ｄ达到最大值１２．８％，至采后６ｄ前基本维持这一含量，表明此时果实品质最佳．对直接软化因素细胞膜透性、淀粉含量及淀粉酶活力、组织含水量、果胶层降解酶ＰＧ及β－半乳糖苷酶活力等的研究表明，ＰＧ和β－半乳糖苷酶对细胞壁果胶层的破坏及组织含水量降低引起膨压降低，是河套蜜瓜采后软化的重要因素．组织膜透性变化，对采后８ｄ前果实软化影响较小；

河套蜜瓜组织培养和再生植株比较研究

无菌条件下 ,河套蜜瓜种子在MS培养基中萌发生长 5d～ 7d(天 ) ,取子叶近胚轴的下半段 ,转入愈伤组织诱导培养基 (MS +IAAl.0 +BA0 .5 )诱导产生愈伤组织 ,后转入芽诱导培养基 (MS +IAA0 .8+BAl.0 +ABA0 .2 6 )诱导生芽。待芽长到 2cm(厘米 )左右转入MS +IBA0 .5培养基中诱导生根 ,10d～ 15d(天 )后再转入蛭石中 ,移入温室盆栽成苗 ,整个成苗过程约需 6 0d～ 70d(天 ) ,再生植株诱导率达 5 9%。

抗乙肝转移因子口服液的研制

将乙肝疫苗采用肌肉和皮内混合免疫的方法,给绵羊接种。全程免疫 3次,6 mo后,取血及脾脏,分离白细胞,用离心和超滤的方法,提取转移因子,制成口服液,并对其所含成分、性质进行了研究。结果表明,该口服液的主要成分为核苷酸、多肽,并含有18种游离氨基酸,包括人体必需的8种氨基酸以及人体所必需的6种常量和微量元素。动物实验表明,无毒、无任何副作用。活性玫瑰花和~3H-TdR掺入法测定的淋巴细胞转化实验表明,该口服液具有转移因子注射制剂促进T淋巴细胞增殖和依赖于乙肝抗原的免疫活性,并可在不同动物间转移免疫活性。

拟南芥逆境胁迫诱导表达基因rd29A启动子的克隆与序列分析

以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到逆境胁迫诱导表达基因rd29A的启动子片段,将其克隆到pUC19质粒中进行序列分析。结果表明,获得的启动子片段大小为937bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸序列同源性为99.8%。

抗肝片吸虫病药物化合物:N-(2',4',5'-三氯)苯基-2-羟基-3,5,6-三氯苯磺酰胺的杀虫活性研究

本文研究了治疗牛、羊等家畜肝片吸虫病药物N (2 ',4 ',5' 三氯 )苯基 2羟基 3,5,6 三氯 苯磺酰胺化合物的杀虫机理 ,通过实验及药物分子的结构分析 ,初步认为其杀虫机理是对线粒体氧化磷酸化反应的解偶联作用 ;采用氧电极法、测线粒体呼吸过程中磷的变化以及测ATP酶活性等方法研究其对线粒氧化磷酸化反应的解偶联作用 ,结果表明 :标题药物化合物是较好的解偶联剂 ,其解偶联活性高于典型的解偶联剂DNP。

甜瓜果实特异性表达黄瓜素基因启动子区的克隆和序列分析

黄瓜素(cucum is in)是甜瓜类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶,其表达具有果实特异性.应用PCR方法从甜瓜基因组DNA中扩增出该基因自转录起始位点至上游一段长310 bp片段,并将其克隆到pUC 19载体中,序列分析表明该序列与已报道的相应序列完全相同,且具有TATA-box、CAAT-box、G-box、I-box-like和增强子元件TGTCACA等功能域,具有典型的果实特异性启动子特征.成功获得甜瓜果实特异性表达基因的启动子,为下一步实现外源基因在甜瓜果实中特异表达奠定基础.

河套蜜瓜ACC合成酶cDNA片段的克隆和序列分析

1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）合成酶是高等植物中乙烯生物合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜（CucumismeloL．cvHetau）果实的RNA为模板，经反转录和PCR扩增得到预期大小的DNA片段，插入到pUC19的SmaⅠ位点后转化E.coliJM109，筛选出重组子pHMAS1。序列分析表明获得了长627bp的ACC合成酶cDNA片段。与已报道的ACC合成酶基因相应序列比较有很高的同源性．

农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROKⅡ中，获得重组质粒pRACO1，用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA4404中，转化河套蜜瓜子叶外植体，在芽诱导培养基MS＋IAA0．8mg／L＋BA1．0mg／L＋ABA0．26mg／L＋Cef500mg／L＋Kan75mg／L中诱导生芽，待芽长到2cm左右转入MS＋IBA0．5mg／L＋Cef300mg／L＋Kan50mg／L的培养基中诱导生根，1～2周后可诱导产生大量的根，形成完整的转化小植株．经PCR检测证明，目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中．

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板,经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)基因全长cDNA,将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG.此cDNA长1183bp,包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架.与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99.3%,相应的氨基酸的同源性为98.5%.

河套蜜瓜Cucumis melo CV Hetau成熟期中某些生理生化过程的变化

对河套密瓜成熟过程中生长速率、呼吸强度以及内源乙烯含量变化的研究表明：该种甜瓜属呼吸跃变型果实，从开花到成熟约为３８ｄ；呼吸跃交出现之前乙烯开始产生，其含量升高先于呼吸跃变．可溶性精含量在成熟过程中不断增高，在呼吸峰值时达到最大，淀粉含量出现一个由积累到降解的变化．此外也研究了瓜硬度、色泽和可溶性固形物的变化．

河套蜜瓜成熟软化中PG、果胶质和细胞壁超微结构的变化

随着河套蜜瓜的成熟软化，原果胶含量降低，可溶性果胶含量增高；与之相应的ＰＧ（多聚半乳糖醛酸酶）比活力显著增加，而ＣＸ（纤维素酶）比活力则变化不大．乙烯利处理果实后，ＰＧ活力相应升高与果实软化呈明显的负相关．不同时期果实细胞壁超微结构观察表明，果胶层逐渐降解，胞壁纤维松驰，细胞器完整．

特异性转移因子的免疫活性及临床应用

本文从特异性转移因子的活性成分,免疫活性检测,生物学功能及临床应用四个方面,就当前国内外的分析、研究进展情况作了概述.为进一步探讨特异性转移因子的作用机制及临床应用价值提供参考.

ACC含量、EFE活性在甜瓜乙烯生成中的变化与乙烯生成限速的初探

对河套蜜瓜乙烯生成中ＩＥＣ、ＡＣＣ含量、ＥＦＥ活性研究表明，三者变化趋势一致．其中ＡＣＣ含量峰值与ＩＥＣ峰值同时出现；ＥＦＥ活性升高与峰值出现先于ＡＣＣ含量．乙烯利处理呼吸跃变前后果实试验表明，外源乙烯可启动和促进乙烯的合成，ＥＦＥ和ＡＣＣ合酶都为该种甜瓜乙烯合成中的诱导酶和限速酶．利用果胶降解物处理果实的初步研究表明，果胶降解物可明显促进ＥＦＥ活性，但没有测到ＩＥＣ．

苜蓿花叶病毒RNA_23′端cDNA转基因烟草及其抗病性研究

将本室克隆的编码复制酶基因3′端约1/2序列及其3′端非编码区的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA,重组到植物表达载体pROKII中,通过致瘤农杆菌(A-grobacteriumtumefaciens)介导,以叶圆片为转化材料,转化普通烟草,并获得了转基因植株.经卡那霉素抗性选择、PCR检测目的基因证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.转基因植物的攻毒试验表明转基因植株对苜蓿花叶病毒产生高水平的抗性.

甜瓜成熟期间多聚半乳糖醛酸酶与乙烯的变化和果实软化的关系(简报)

内源乙烯在河套蜜瓜成熟之前就已产生，其含量上升先于呼吸跃变。多聚半乳精醛酸酶活力显著增加与果实软化平行相关，并与内源乙烯变化趋势一致。乙烯利处理后，该酶活力与乙烯生成量呈正相关。

口服与注射用转移因子的体内外免疫活性比较

口服和注射TF在促进人外周血T、B淋巴细胞的免疫活性上差异光显著意义，但二者形成的玫瑰花结率均明显高于对照组（P＜0．01）。实验小鼠口服或注射TF后．腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞比率明显增加，（P＜0．05）；体内T、B淋巴细胞与绵羊红细胞和致敏鸡红细胞形成的玫瑰花结率均明显高于对照组（P＜0.05）。口服和注射TF均能促进迟发型变态旦应的产生。两种剂型TF对小鼠的生长无任何影响。但若小鼠生长在低温环境下（9℃）．口服转移因子显示出良好的抗冷效应。

免疫法氏囊活性因子的制备及性质

出雏一周龄鸡用高于正常免疫剂量５倍的法氏囊疫苗免疫２次．在免疫高峰时宰杀，取出法氏囊，采用超滤法得到了一种分子量小于１万的物质，经检测为多肽和核苷酸的混合物，称为免疫法氏囊活性因子（ＩｍｍｕｎｅＢｕｒｓａｌＡｃｔｉｖｅＦａｃｔｏｒＩＢＡＦ）．理化性质检测类似于转移因子．具有促进淋巴细胞增殖，特别是Ｔ细胞活性的功能，有依赖抗原的特异免疫活性．初步研究表明，具有抑制细菌和抗毒性作用，可望成为一种新的免疫调节剂．