高凝状态大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库的构建

目的 构建高凝状态 (prothrombotic states,PTS)大鼠肝脏差异表达基因反向消减 c DNA文库。方法 用高淀粉饲料喂养制备大鼠 PTS模型 ,从 PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取 poly A+ m RNA ,分别以 1.5μgpoly A+ m RNA起始 ,依次合成单链和双链 c DNA,经酶切成平均大小为 4 0 0～ 6 0 0 bp的片段。以 PTS大鼠 c DNA作为 Driver,对照大鼠 c DNA为 Tester。将 Tester分为两组 ,分别连上不同的接头 ,与 Driver进行两次消减杂交和两次抑制性 PCR。将第二次 PCR产物 c DNA克隆至 p MD18- T载体上 ,然后转化细菌。转化后的细菌接种于含 5 0μg/ ml am picillin、IPTG、和 X- gal的 L B琼脂平板上 ,将克隆计数。结果 获得的克隆 78%为白色克隆 ,成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减 c DNA文库。结论 以 1.5μg poly A+ m RNA起始 ,采用抑制性消减杂交 ,构建了 PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减 c

高凝状态大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库的构建与初筛

目的构建高凝状态(prothrombotic states,PTS)大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库并进行初步筛选.方法从PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取poly A+ mRNA,分别以poly A+ mRNA为模板,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成400～600 bp大小的片段.以PTS大鼠cDNA作为Tester,对照大鼠cDNA为Driver,进行抑制性消减杂交.将消减杂交第二次PCR产物cDNA克隆至pMD18-T载体上,然后转化细菌,获得PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库.用巢式PCR扩增法制备'正向'和'反向'消减cDNA探针;采用差异筛选方法,用这两种探针对PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库进行筛选;将获得的阳性克隆cDNA进行序列分析;并与GenBank DNA 数据库中的DNA序列进行同源性分析.结果成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库,初步筛选发现两条PTS差异表达cDNA片段.结论成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库.

人血清对氧磷酶-1活性与血脂及主要载脂蛋白含量的相关性初探

目的 初步分析健康成人血清对氧磷酶 - 1(PON1)活性与血脂及主要载脂蛋白含量的相关性。方法用比色法测定 PON 1活性 ;用酶法测定甘油三酯 (TG)和总胆固醇 (TC)含量 ;用沉淀法分离高密度脂蛋白并用酶法测定高密度脂蛋白胆固醇 (HDL - C)含量 ;用 Friedewald公式计算低密度脂蛋白胆固醇 (L DL - C)含量 ;用免疫单扩散法测定载脂蛋白 (apo) A 、B10 0、C 、C 和 E含量。结果 4 7例健康成人血清 PON1活性与 TG、TC、HDL - C及 L DL - C的相关系数分别为 - 0 .111、0 .177、0 .2 2 8及 0 .0 71(P均 >0 .0 5 ) ;与 apo A 、B10 0、C 、C 及 E的相关系数分别为 0 .2 0 3、- 0 .2 12、- 0 .0 6 5、- 0 .112及 - 0 .12 2 (P均 >0 .0 5 )。结论 正常成人血清

高凝状态大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库的初筛

目的 对本室构建的高凝状态 (PTS)大鼠肝脏差异表达基因反向消减 c DNA文库进行初步筛选。方法 用巢式 PCR扩增法制备“正向”和“反向”消减 c DNA探针 ;采用差异筛选方法 ,用这两种探针对 PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减 c DNA文库进行筛选 ;将获得的阳性克隆 c DNA进行序列分析 ;并与 Gen Bank DNA数据库 (non- redundant,and non- mouse and non- hum an EST entries)中的 DNA序列进行同源性分析。结果 差异筛选获得 5个阳性克隆 ,序列测定及同源性分析表明 ,其中 2个克隆很可能是 Gen Bank DNA数据库中尚没有的新基因或 DNA序列 ,另外 3个克隆很可能代表 Gen Bank DNA数据库中已有的基因或 DNA序列。结论 大鼠肝脏 5个PTS相关基因序列、尤其是其中 2个 Gen Bank中尚没有的新基因或新 DNA序列的发现 ,为深入探讨 PTS发生的分子机制及肝脏在

40岁以上中老年人糖耐量异常者血清脂质及载脂蛋白含量分析

为了探讨糖尿病脂蛋白异常血症的发生机理，研究了53例糖耐量异常者（糖耐量异常组）和27例糖耐量正常者（对照组）的血脂和血浆载脂蛋白水平，以及进行了葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验。结果发现，糖耐量异常组空腹及口服葡萄糖后60min血糖和血浆胰岛素水平与对照组无显著差异（P＞0．05），而口服葡萄糖后120min血糖（P＜0．05）、血浆胰岛素水平（P＜0．01）和口服葡萄糖后180min血糖（P＜0．01）、血浆胰岛素水平（P＜0．05）均比对照组显著升高。糖耐量异常组血浆甘油三酯和总胆固醇显著升高（P＜0．01和P＜0．05），同时伴有一定程度的低密度脂蛋白胆固醇升高和高密度脂蛋白胆固醇降低，以及载脂蛋白CⅡ、CⅢ及E显著增高（P＜0．01、P＜0．001和P＜0．005），这些血脂改变与糖尿病脂蛋白异常血症类似。此结果表明，胰岛素抵抗、高胰岛素血症在糖尿病脂蛋白异常血症的发生中起着重要的作用。同时也提示对一些空腹血糖正常，糖耐量异常，但还没有临床诊断为糖尿病患者，应进行常规血脂检查，筛选出脂蛋白异常者，并采取相应的措施予以纠正。

医学生参与课堂教学主动性的调查分析

为了解医学院校学生对课堂教学的认识和主动参与积极性,对四川大学华西医学中心404名学生进行了问卷调查。发现学生希望在课堂上有机会与教师和同学就教学内容进行双向和多向交流。但在具体行动上,学生又缺乏课堂参与主动性。因此,应该改革传统课堂教学方法,有效地调动学生的课堂参与积极性。

肝脂酶及其在血浆脂蛋白代谢中的作用

肝脂酶是一种糖蛋白，由肝实质细胞合成，在内质网中糖化后转移至高尔基体，形成具有催化活性的成熟酶并转运到窦状隙内皮细胞表面发挥作用。肝素可将结合在肝窦状隙内皮细胞表面的肝脂酶释放入血，选择性测定肝素化血浆脂肪酶活性可了解体内肝脂酶的活性。基因及蛋白质结构分析均表明肝脂酶是脂肪酶家族的成员之一，能水解乳糜微粒、中间密度脂蛋白及高密度脂蛋白中的甘油三酯和磷脂，在乳糜微粒残骸的清除、低密度脂蛋白的形成及胆固醇逆向转运过程中起着十分重要的作用。肝脂酶活性的改变会引起脂蛋白代谢变化、特别是血浆高密度脂蛋白胆固醇浓度的改变；肝脂酶基因变异是血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的重要遗传决定因素之一，与动脉粥样硬化及冠心病关系密切。

人及小鼠肝细胞膜载脂蛋白 CⅢ受体的研究

用^(125)I 标记载脂蛋白 CⅢ (apoCⅢ)为配体,采用聚乙二醇沉淀分离法,建立了小鼠肝细胞膜 apoCⅢ 受体(结合位点)放射分析法,并对人及小鼠肝细胞膜 apoCⅢ结合位点的特性进行了研究.

以病例为引导教学的近期教学效果

华西医科大学初步实施了以病例为引导的教学 ,通过 42 3名学生的问卷调查 ,结果表明 :绝大多数学生认为以病例为引导的教学能激发学习兴趣 ,提高自学能力、思考能力、记忆能力、归纳能力 ,并能引导将基础理论与临床问题相联系 ;有 53.6%的学生认为以病例为引导的教学能提高学习效率。进一步分析发现 ,上述结果在七年制学生与五年制学生之间没有显著性差异 (P>0 .0 5)

人血清高密度脂蛋白磷脂含量的测定

目的 建立人血清高密度脂蛋白磷脂 (HDL- PL)的测定方法。方法 采用磷钨酸及氯化镁沉淀法将血清中含载脂蛋白 B脂蛋白沉淀去除 ,上清液用于 HDL- PL 测定。结果 只需 2 .5～ 3.0分钟时间就能将HDL-磷脂完全消化。血清 HDL- PL 测定结果的变异系数为 3.6%～ 3.7% ,回收率为 98%～ 10 7% ,平均回收率为10 3%。对 30例正常人、30例 a型高脂蛋白血症、30例 型高脂蛋白血症及 30例 b型高脂蛋白血症患者血清HDL- PL 及 HDL- C进行了测定 ,发现 型高脂蛋白血症患者血清 HDL- PL 显著低于正常人和 a型高脂蛋白血症患者 ,其它各组之间血清 HDL- PL 无显著性差异。而 HDL- C在正常人及 a型高脂蛋白血症患者与 b型高脂血症患者及 型高脂血症患者间比较均有显著性差异。结论 人 HDL- PL 代谢与体内甘油三酯代谢的关系更为密切 ,HDL- PL 降低可能是检测

改良抗坏血酸还原法测定血清磷脂含量

对传统血清磷脂测定的抗坏血酸还原法进行了改良 ,大大减少了强酸的用量 ,其浓硫酸、过氯酸的用量只有改良前的 30 % ,消化时间缩短为改良前的 5 0 %～ 6 2 % ,血清用量减少为改良前的 40 %。改良后 ,血清磷脂测定结果的变异系数为 3.4%～ 3.7% ,回收率为 94%～ 1 0 9% ,平均回收率为 1 0 0 .8%。对 5 0份正常成人血清标本的磷脂测定结果表明 ,改良前后无显著性差异 (2 .81 3± 0 .333mm ol/ L 比 2 .882± 0 .31 6 mmol/ L,P>0 .0 5 ) ,其相关系数为 r=0 .991。上述结果表明 ,用改良抗坏血酸还原法测定血清磷脂含量 ,可大大减少强酸用量、缩短消化时间、减少血清用量 。

高脂血症与血栓形成

高脂血症是动脉粥样硬化的一个主要危险因子 ,血栓形成是动脉粥样硬化发生的重要机制之一。血浆脂质和血浆脂蛋白质和量的异常改变 ,能影响血小板的功能 ,改变外源性凝血系统、内源性凝血系统、纤维蛋白原、纤溶系统等的活性 ,促进血栓形成 ,加快动脉粥样硬化的形成和发展。

高胆固醇饲养对家兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体的影响

为探讨高胆固醇喂养对兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体的影响 ,用高胆固醇饲料喂养家兔 6个月后剖杀 ,取肝脏用蔗糖密度梯度超速离心法分离肝细胞膜 ,用密度梯度超速离心法分离普通饲料喂养的家兔血浆不含载脂蛋白E的高密度脂蛋白 3 ,用氯化单碘法对兔高密度脂蛋白 3进行1 2 5 I标记。以1 2 5 I标记的兔高密度脂蛋白 3作为配体 ,对肝细胞膜高密度脂蛋白受体进行研究。结果发现 ,高胆固醇饲料和普通饲料喂养的家兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体的最大结合分别为 2 .46± 0 .72mg g和 1.18± 0 .48mg g ,两者差异显著 (P <0 .0 0 1) ,但解离常数值无显著性改变 ( 8.0 6± 3.10mg L比 9.2 7± 3.5 4mg L ,P >0 .0 5 )。该结果表明高胆固醇饲养能上升调节家兔高密度脂蛋白受体 。

胆固醇流出调节蛋白与胆固醇逆向转运

高密度脂蛋白 (HDL)能从外周细胞摄取多余胆固醇并运输至肝脏排出 ,防止其在血管壁沉积。外周细胞内胆固醇流向HDL的机制一直是人们积极探索但尚未弄清的问题。新近发表在《NatureGenetics》上的三篇论文在这个环节上取得了重大突破 ,他们通过对Tangier病的研究 ,发现由ATP binding cassettetransporter 1基因编码的胆固醇流出调节蛋白 (cholesterol effluxregulatoryprotein)在该过程中起重要作用。该发现使人们对外周细胞胆固醇流出的认识有了实质性突破 ;为新药研制 ,动脉粥样硬化。

肝脏脂蛋白受体

肝脏清除各种血浆脂蛋白主要是通过肝细胞表面的各种脂蛋白受体介导完成。迄今已发现肝细胞表面至少存在LDL受体,HDL受体及apoAⅣ受体、VLDL结合位点、apoE受体和apoCⅢ受体等脂蛋白受体或结合位点,它们在肝脏清除血浆脂蛋白的代谢及其调节中起关键作用。

教师对以病例为引导教学的评价

在医学教学方法改革中，以问题为基础的学习（ｐｒｏｂｌｅｍ－ｂａｓｅｄ ｌｅａｒｎｉｎｇ，ＰＢＬ）便是近年来引起人们极大兴趣并较多采用的一种新型学习方式。华西医科大学应用ＰＢＬ的原理，根据我国的国情，结合学校的实际，设计并实施了以病例为引导教学（Ｃａｓｅ Ｂａｓｅｄ Ｓｔｕｄｙ，ＣＢＳ）。通过对基础医学院６５名教师进行的问卷调查表明，绝大多数教师认为ＣＢＳ能激发学生的学习兴趣。

聚焦层析法分离人血清载脂蛋白C Ⅲ亚型

用密度梯度超速离心法，从混合人血清中分离极低密度脂蛋白，经脱脂后再进行聚焦层析分离其中的载脂蛋白。获得的纯品载脂蛋白ＣⅢ１和ＣⅢ２经等电聚焦电泳均呈现一条带。生物活性的细胞学实验鉴定发现，纯化载脂蛋白ＣⅢ能抑制培养ＨｅｐＧ２细胞对标记极低密度脂蛋白的提取。聚焦层析方法简便，一次上样量大，速度快，分离效果好，还可同时获得载脂蛋白ＣⅠ，ＣⅡ和Ｅ。

^(125)碘标记载脂蛋白CⅢ在小鼠血浆中清除及体内分布的研究

用^(125)碘标记人载脂蛋白CⅢ对载脂蛋白CⅢ在小鼠血浆中的清除及体内的分布进行了研究。发现静脉注射^(125)碘标记人载脂蛋白CⅢ在小鼠血浆的分数清除率为0.19/h,血浆半寿期为3小时,肝脏是结合^(125)碘标记载脂蛋白CⅢ的主要器官。

高糖低脂膳食对健康青年血脂比值的影响

目的探讨短期高糖低脂膳食对健康青年血脂比值甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)、log(TG/HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/HDL-C的影响。方法在校大学生自愿者56名(22.89±1.80)岁,于7 d平衡膳食后给予高糖低脂膳食6 d,分别在第1 d、8 d、14 d清晨抽取空腹静脉血,测定TG、TC、HDL-C、LDL-C浓度,计算TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C值。结果高糖低脂膳食后,TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)在女性显著升高(P<0.05),男性有下降趋势,但无统计学意义。按BMI或WHR分析发现,高糖低脂膳食后TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)在正常女性显著升高(P<0.05),而在一般肥胖或腹型肥胖女性无显著性改变;不同BMI或WHR男性高糖低脂膳食后TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)无显著变化。TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C在高糖低值膳食后均显著下降(P<0.05),且不受性别、BMI、WHR的影响。结论高糖低脂膳食诱导的TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)改变因性别及BMI或WHR不同而不同,TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C的改变则不受其影响,对指导相应人群改变膳食结构具有重要意义。