雌二醇对离体大鼠缺氧─复氧心脏的保护作用

本实验采用离体大鼠心脏灌注模型，观察雌二醇（３．３ｎｇ／ｍｌ）对缺氧─复氧心脏收缩功能及超微结构的影响。结果表明，雌二醇对缺氧─复氧心肌具有一定的保护作用，这一作用与雌激素能相对提高缺氧─复氧心肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性和相对降低其Ｃａ￣（２＋）含量有关。

γ-氨基丁酸(GABA)对离体大鼠卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响

本文观察了GABA对大鼠分散颗粒细胞生孕酮的影响。结果表明:当GABA浓度为10^(-6)mol/L时明显促进颗粒细胞基础孕酮分泌(p<0.05)及促进HCG刺激孕酮的生成(p<0.05)。但更高浓度(10^(-5)mol/L)时则表现抑制HCG刺激孕酮生成的效应(p<0.02)。提示颗粒细胞的激素分泌功能可能受到GABA的调控。

癌基因与性腺功能

癌基因存在于正常的卵巢和睾丸中，在卵巢的生卵、睾丸的生精过程及两者的内分泌功能中均起重要作用。促性腺激素、甾体激素和多种生长因子对性腺功能的调控可能与癌基因的表达有关。

分离和孵育大鼠黄体细胞的方法

本文介绍了用胰蛋白酶分散大鼠黄体细胞和培养的方法。未成年雌性大鼠用PMSG和hCG诱导超排卵后取得的黄体,经0.025%的胰蛋白酶分散,可获得大(直径为14.2～28.5μm)、小(直径为7.1～12.3μm)二种黄体细胞。台盼兰排斥试验测得细胞活力为85～90%,经3～4小时孵育后基本保持不变。黄体细胞产生的孕酮量与hCG浓度、培养时间和细胞数明显相关;而且,cAMP能显著增加hCG刺激的孕酮产生。结果表明,用胰蛋白酶分散大鼠黄体细胞进行体外培养是一种简单而有用的方法。

c-myb对大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

本文观察了反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ。产生的影响，并探讨了与二了酰ｃＡＭＰ和ｖｅｒａｐａｍｉｌ的关系。结果发现，反义０．ｍｙｂＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和民的产生，同时使ｃ．ｍｙｂ蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降：而无义ｔａｔＯＤＮ没有相应的作用。当１０４ｍｏｌｌＬ二丁酰ｃＡＭＰ与反义ｃ．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时能明显逆转反义Ｃ．ｍｙｂＯＤＮ对产生和ｃ．ｍｙｂ表达的抑制作用。而１０‘ｍｏｌｌＬｖｅｒａｐｍｉｌ与反义０．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时，对反义０．ｍｙｂＯＤＮ对产生和０．ｍｙｂ表达的抑制作用具有协同效应。表明，０．ｍｙｂ与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和产生密切相关；ｃＡＭＰ和Ｃａ２”能通过调节ｃ。

c-fos、c-myb和c-erbB-2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调控关系的研究

目的和方法 :用离体细胞体外孵育法 ,观察反义c fos、c myb和c erbB 2寡脱氧核苷酸 (c fosODN、c mybODN和c erbB 2ODN)对hCG诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响 ,同时观察内皮素 1、γ 氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对颗粒细胞中c fos、c myb和c erbB 2蛋白的影响。 结果 :反义c fos、c myb和c erbB 2ODN均明显抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生 ,并伴有各自癌基因蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降 ;而无义tatODN没有相应的作用。 2× 10 -7mol/L内皮素 1和 5× 10 -6mol/Lγ 氨基丁酸能显著抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生 ,同时使c fos、c myb和c erbB 2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降 ;而 1× 10 -6mol/L维拉帕米对hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生和c fos、c myb和c erbB 2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率均无明显影响。 结论 :c fos、c myb和c erbB 2与hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生密切相关 ;内皮素 1、γ 氢基丁酸能通过调节这些癌基因在颗粒细胞中的表达而影响hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生 ;而Ca2 +无相应的作用。

反义c-fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

采用离体孵育大鼠黄体细胞的方法，观察了反义c-fos寡脱氧核苷酸（反义c－fosODN）对hCG诱导的黄体细胞孕酮（P）和雌二醇（E2）产生的影响，同时观察了外源性cAMP和钙离子通道阻断剂维拉帕米（Verapamil）对黄体细胞中c－fos蛋白的影响。结果发现，反义c－fosODN能呈剂量相关方式抑制hCG诱导的黄体细胞P和E2的产生，同时使c－fos蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降；而无义tatODN没有相应的作用。10-4mol／L二丁酰cAMP能明显增强hCG对P、E2产生的刺激作用，并使c－fos蛋白染色阳性的黄体细胞百分率显著升高；当与反义c－fosODN共同作用时能明显逆转反义c-fosODN对P、E2产生和c－fos表达的抑制作用。10～6mol／L维拉帕米（Verapamil）显著抑制hCG诱导的P、E2产生，同时使c－fos蛋白染色阳性的黄体细胞百分率下降；当与反义c－fosODN共同作用时，对反义c-fosODN对P、E2产生和c－fos表达的抑制作用具有协同效应。表明，c－fos与hCG诱导的黄体细胞孕酮和雌二醇的产生密切相关；cAMP和Ca2+能调节c－fos在黄体细胞中的表达。

c-erbB_2与小鼠体外受精及作用机理研究

目的和方法 :用免疫组织化学的方法观察ErbB2 在小鼠睾丸、附睾、卵巢、输卵管、卵母细胞 -卵丘细胞复合物及精子细胞上的分布。用不同浓度反义c erbB2 寡脱氧核苷酸 (c erbB2 ASODNs)与精子和卵母细胞 -卵丘细胞复合物共孵育 ,观察其对小鼠体外受精率的影响 ,并进一步探讨其机制。结果 :在附睾的小管上皮细胞的管腔面 ,卵丘细胞和精子的细胞膜上有ErbB2 蛋白分布。c erbB2 ASODNs呈剂量依赖方式抑制小鼠体外受精率。小鼠体外受精率在空白对照组、低、中、高浓度c erbB2 ASODNs组、无义tatODNs组分别为 38.3 %、1 9.6 %、1 0 .7%、5 .0 %、33 .8% ,同时伴有精子细胞上ErbB2 免疫组化染色明显下降 ,中、高c erbB2 ASODNs浓度组卵丘细胞贴壁生长受抑制。GABA和db cAMP均能增加精子小鼠体外受精率 ,两者均部分逆转c erbB2 ASODNs对受精的抑制作用 ,但对精子细胞上ErbB2 免疫组化染色均无明显影响 ,而Verapamil能抑制小鼠体外受精率 ,并协同c erbB2 ASODNs的抑制作用 ,且使精子细胞膜上ErbB2 免疫组化染色明显下降。结论 :c erbB2 ASODNs与受精密切相关 ,阻断Ca2 + 内流后能通过抑制精子的c erbB2表达 ,从而抑制小鼠体外受精 ,而GABA、dbcAMP可能不是通过c erbB2

大鼠卵巢不同功能阶段时c-fos表达的动态变化

目的和方法 :本文用免疫组织化学方法检测了成年大鼠卵巢于不同的功能阶段和未成年大鼠外源性激素诱导的卵巢于不同的功能阶段c fos表达的变化以及与血清E2 和P含量的相关关系。结果 :在成年大鼠动情前期、动情期卵巢的间质腺和基质中及动情间期和妊娠期卵巢的黄体细胞和基质中有c fos表达 ,c fos蛋白阳性信号的表达范围和表达强度在动情前期卵巢较大 ,动情间期和动情期卵巢较低 ,妊娠期卵巢最大 ,这种变化与血清E2 和P含量的变化呈明显的正相关关系。未成年大鼠 ,用DES使卵泡发育至窦前期时 ,在卵巢中未检测到有c fos蛋白的表达 ,用PMSG使卵泡发育至排卵前期时在卵巢的间质腺和基质中有c fos表达 ,用PMSG和hCG后 4天形成的早期黄体化卵巢c fos在黄体细胞和基质中的表达明显升高 ,而于用hCG后 9天形成的晚期黄体化卵巢c fos表达明显下降 ,这种变化也与血清E2 和P含量的变化呈明显的正相关关系。结论 :c fos与卵泡发育、排卵。

大鼠睾丸间质细胞分离及其鉴定

目的和方法 :通过血管冲洗、Ⅱ型胶原酶消化以及Percoll梯度离心 ,建立大鼠睾丸间质细胞分离方法。结果 :(1)Percoll密度梯度离心后纯化的间质细胞 3β HSD染色阳性百分率可达 85 %。 (2 ) 1.2× 10 -3 IU/mlhCG可显著性增加间质细胞睾酮的分泌 (P <0 .0 5 )。结论

实验性心律失常与性激素的关系

目的和方法：通过动物实验探讨心律失常发病是否有性别差异以及性激素对心律失常的影响。结果：乌头碱（Ａｃｏ）诱发心律失常有性别差异，即雌鼠心律失常持续时间较雄鼠长，尤以雌鼠动情期更突出（Ｐ＜００１），并证实造成这种差异可能与血浆雌激素水平有关。外源性Ｅ２（６０μｇ／ｋｇｉｖ）：（１）能明显缩短由Ａｃｏ诱发的雄大鼠心律失常持续时间（６８６±１８．２）ｍｉｎｖｓ（４７．１±１９．６）ｍｉｎ，Ｐ＜０．０５；（２）提高哇巴因（Ｏｕａ）致雄豚鼠ＶＰ、ＶＦ的剂量（１０７．５±１０．４）μｇ／ｋｇｖｓ（１２１．３±９．９）μｇ／ｋｇ，Ｐ＜０．０５；（１５１．３±１４．６）μｇ／ｋｇｖｓ（１６７．５±１１．７）μｇ／ｋｇ，Ｐ＜００５。（３）缩短由肾上腺素（Ａｄ）诱发的雄兔心律失常持续时间（２６２±５４）ｓｖｓ（１４５±２２）ｓ，Ｐ＜００１。

原癌基因与睾丸功能的关系

原癌基因是细胞基因组的正常成分 ,在正常情况下不表达或有限表达 ,具有调节细胞增殖、分化和信息传递等功能。在精子发生过程中有许多原癌基因呈阶段和特异性表达。睾丸支持细胞和间质细胞的生长发育及内分泌过程中均伴有某些原癌基因表达增强。

大鼠卵巢内皮素－1受体的动态变化

应用放射配基结合分析法（ＲＢＡ）检测了大鼠不同发育阶段卵巢内皮素－１（ＥＴ－１）受体的动态变化。结果表明：大鼠卵巢上存在有特异性ＥＴ－１受体，受体最大结合量（Ｂｍａｘ）于窦前期卵泡含量最高（３５８．２±７３．２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白），随卵泡发育到排卵前卵泡时显著降低（１６２．７±１７．２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１），排卵后的早期黄体化卵巢降至最低值（３７．８±３．４ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１），于晚期黄体化卵巢又再次升高（９５．３±４．９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）（Ｐ＜０．０１）。受体亲和力（Ｋｄ值）也随卵泡和黄体发育的不同阶段呈现动态变化，在排卵前卵泡卵巢ＥＴ受体对ＥＴ－１的亲和力最低，晚期黄体化卵巢最高。结果提示，ＥＴ－１可能通过与ＥＴ－１受体结合参与卵泡和黄体发育的调节。本结果为ＥＴ－１作为卵巢内局部调节肽提供实验依据。

醋酸棉酚对hCG促进大鼠分散黄体细胞产生孕酮的影响

本文在体外研究了醋酸棉酚对分散大鼠黄体细胞产生孕酮的影响及其作用机制。当棉酚浓度在20μg/ml、作用时间1h,hCG刺激黄体细胞孕酮的生成量显著下降,但对基础孕酮的产生无明显影响;上述剂量的棉酚在作用4h后时细胞存活率无明显影响。经棉酚作用过的黄体细胞,经2h再孵育,不能恢复其对hCG的反应性。同时棉酚显著降低黄体细胞cAMP产生。结果提示,棉酚可能通过降低cAMP产生而抑制hCG的生孕酮作用。

c-ras与大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮的关系

应用离体细胞培养 ,研究了反义 c-ras寡脱氧核苷酸 (反义 c-ras ODN)对人绒毛膜促性腺激素 (h CG)诱导的大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮 (P)的影响及其与外源性 c AMP和 Ca2 +的关系。结果发现 ,2 0 μmol/ L 反义 c-ras ODN能显著抑制 h CG诱导颗粒细胞的 P生成量 (P<0 .0 5 ) ,而对黄体细胞的 P生成无明显影响 ;反义 c-ras ODN对h CG诱导的颗粒细胞生成 P的抑制作用能被加入 1 0 - 4mol/ L 二丁酰 c AMP所逆转 ,钙通道阻断剂维拉帕米对抑制作用具有协同效应。结果提示 ,c-ras癌基因参与 h CG诱导的颗粒细胞生成 P的调控 ,而对 h CG诱导的黄体细胞

c-Fos对大鼠间质细胞睾酮生成的影响及其作用机理

目的 本研究拟通过反义技术观察c fosASODNs对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及睾酮合成过 程中限速酶表达水平的变化,并探讨其作用机制。方法 (1)放射免疫方法研究c fosASODNs对hCG诱导大鼠睾 丸间质细胞睾酮分泌的影响。(2)用免疫组织化学方法观察离体大鼠间质细胞Fos蛋白的变化。(3)用RT PCR 法观察在睾酮合成过程中大鼠间质细胞P450C17mRNA表达水平的变化。结果 (1)1.2×10-2IU/mlhCG可显著 性地增加间质细胞睾酮的分泌(P<0.01),并使c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率和P450C17mRNA表达水 平显著性地升高(P<0.01)。(2)c fosASODNs呈剂量依赖性地抑制hCG诱导的离体间质细胞的睾酮分泌,同时 使c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率下降,而无义tatODN没有相应作用。(3)当二丁酰cAMP与c fosA SODNs作用时可明显逆转c fosASODNs对hCG诱导间质细胞睾酮分泌的抑制作用,同时c Fos蛋白染色阳性的 间质细胞百分率和P450C17mRNA表达又恢复至接近hCG刺激水平。(4)维拉帕米(10-6mol/L)对hCG诱导的 大鼠间质细胞睾酮的分泌及c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率均未见明显改变。结论 c fos参与hCG诱导 大鼠间质细胞睾酮的分泌,其机制很可能是通过cAMP PKA依赖性途径使c fos癌基因表达增?

睾丸内细胞间的相互作用

本文综述睾丸生精功能的机制，着重讨论睾丸自身细胞间的相互作用。

c-erbB_2蛋白在大鼠睾丸中的分布

用免疫组织化学方法观察原癌基因蛋白 c- erb B2 在大鼠睾丸中的分布。结果 :未成年大鼠睾丸生精上皮细胞和间质细胞中均未见 c- erb B2 免疫染色阳性颗粒 ;成年大鼠睾丸曲细精管中的圆形精子细胞、精子和残体均可见 c-erb B2 蛋白存在。提示原癌基因 c- erb B2 的活性可能参与精子形成的调控。

c-myb对人绒毛膜促性腺激素诱导的大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

采用离体细胞体外孵育法,观察反义c-myb寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletides,ODN)对人绒毛膜促性腺激素(human chori-onic-gonadotropin hormone,hCG)诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌的影响,并进一步探讨了外源性二丁酰c-AMP(dbcAMP)、Ca^(2+)以及蛋白质抑制剂放线菌酮(cycloheximide,CYX)对间质细胞中c-Myb蛋白表达和睾酮分泌的作用。结果表明,反义c-myb ODN呈剂量依赖性地抑制hCG诱导的离体间质细胞的睾酮分泌,同时使间质细胞中c-Myb蛋白免疫组化染色下降;而无义tat ODN没有相应的作用。100μmol/L的dbcAMP可进一步促使hCG诱导的间质细胞分泌睾酮,并且使间质细胞中c-Myb蛋白免疫组化染色IOD值升高,与hCG组相比,具有统计学意义。钙离子通道阻断剂维拉帕米(10μmol/L)和蛋白质抑制剂放线菌酮(50μg/ml)可使hCG诱导的大鼠间质细胞的睾酮分泌下降,并使间质细胞的C-Myb蛋白兔疫组化染色降低。该结果说明c-myb参与hCG诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌作用。