犏牛瘤胃厌氧真菌和甲烷菌共培养物发酵液预处理玉米秸秆对其黄贮品质的功效研究

厌氧真菌能降解木质纤维素,一些甲烷菌可以增强厌氧真菌的降解能力。将犏牛瘤胃厌氧真菌和甲烷菌共培养物(N.frontalis+M.olleyae)Cattle-YakTZ1降解秸秆产生的发酵液预处理玉米秸秆48 h后进行黄贮,以市售木聚糖酶做对照组,空白组不进行预处理。结果表明,空白组在发酵45 d后感官品质极差,DM流失率较高,ADF和NDF降解效果不明显,pH值为6~7,已严重发生霉变;对照组与试验组在发酵过程中DM得到有效保存,NDF、ADF含量显著降低,试验组的乳酸含量显著高于对照组,丁酸检出量较低,CP含量显著高于空白组。(N.frontalis+M.olleyae)Cattle-YakTZ1发酵液预处理玉米秸秆后进行黄贮显著提升了黄贮感官品质、发酵特性营养成分,具有独特的应用价值。

甘肃贝母生防菌分离及其对腐烂病防治的研究

目的:从甘肃贝母中分离生防菌,并进行腐烂病防治研究,为甘肃贝母及其他作物腐烂病的防治提供一定的参考。方法:通过常规方法分离鉴定内生菌,无氮培养基培养定性检测微生物固氮活性,平板拮抗试验检测抗病性,LC-MS检测蒂莫内马赛菌Massilia timonae激素水平,分光光度法检测酶活,盆栽试验检测不同微生物对贝母腐烂病防治的影响。结果:从甘肃贝母中分离得到解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、嗜根寡养单胞菌Rhizophobic oligomonas、粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea及互生细菌蒂莫内马赛菌;粉红螺旋聚孢霉具有固氮和拮抗镰刀菌的作用,蒂莫内马赛菌单位浊度菌液生长素类物质含量为8.89 ng/mL,细胞分裂素类物质含量为0.55 ng/mL,赤霉素类物质含量为13.51 ng/mL,显著促进粉红螺旋聚孢霉菌球的生长;蒂莫内马赛菌单位浊度菌液具有很高的几丁质酶、木质素酶、纤维素酶活性,其活性分别达到了0.28 mg/mg·h prot、7.33 U/mg prot和27.41μg/mg·min prot,增强了粉红螺旋聚孢霉在植物中的定殖能力。结论:蒂莫内马赛菌与粉红螺旋聚孢霉的混合物对甘肃贝母腐烂病的相对防治效果达到92.64%,效果优于解淀粉芽孢杆菌。

濒危藏药桃儿七根生物反应器生产鬼臼毒素的研究

目的:建立桃儿七根生物反应器技术体系,通过植物激素和生物诱导子处理提高鬼臼毒素生产能力。方法:以桃儿七种胚为外植体,研究不同激素组合对愈伤不定根诱导的影响;分离桃儿七内生真菌,研究其发酵产物以及茉莉酸甲酯、冠菌素对不定根鬼臼毒素积累的影响;高效液相色谱法测定鬼臼毒素含量。结果:吲哚乙酸、玉米素、表油菜素内酯分别与毒莠啶、2,4-二氯苯氧基乙酸、独脚金内酯三种组合都能够高效的诱导向不定根方向发育的胚性愈伤组织,在低浓度吲哚乙酸和萘乙酸存在的条件下,40 d左右根长达到(5±1)cm;粉红粘帚霉发酵液、茉莉酸甲酯、冠菌素都能显著的促进不定根鬼臼毒素的积累。结论:通过细胞工程和发酵工程相结合的手段成功建立了桃儿七不定根生物反应器生产鬼臼毒素的体系,为工业化大规模生产奠定了基础。

一株强分泌刀孢蜡蚧菌的分离及对甘肃贝母腐烂病防治的研究

目的:从甘肃贝母中分离内生真菌,为甘肃贝母腐烂病的生物防治提供参考。方法:通过聚合酶链式反应⁃限制性内切酶长度多态性方法和ITS测序进行了川贝母及其基原种的鉴定;通过内生菌的分离鉴定、功能分析、分泌物代谢组检测、抗病性试验等手段研究其对甘肃贝母腐烂病的防治效果。结果:从甘肃贝母中分离得到一株具有强分泌能力的刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae,其具有固氮和拮抗镰刀菌属的作用。结论:此刀孢蜡蚧菌能够有效的防治甘肃贝母腐烂病的发生,效果优于解淀粉芽孢杆菌。

市售卤牛肉中腐败菌的分离鉴定

为了有针对性地控制本地市售卤牛肉中微生物污染,延长产品货架期,采用平板划线分离法对卤牛肉中的优势腐败菌进行分离筛选。再采用传统微生物培养方法,根据细菌的菌落形态、菌体形态、革兰氏染色等特征,结合16S rDNA序列分析方法,对分离筛选出的菌株进行鉴定。结果表明,引起本地市售卤牛肉腐败变质的优势腐败菌是魏斯氏菌(Weissella viridescens strain WM33)和佐氏库特氏菌(Kurthia zopfii)。

濒危蒙药沙冬青毛状根代谢组学分析

为了探讨利用蒙药蒙古沙冬青毛状根生产其药用成分的可能性,本研究采用超高效液相色谱-串联四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术分别对蒙古沙冬青毛状根和自然根组织进行化学成分分析,并通过主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元变量分析方法研究二者间的代谢产物差异。结果显示,蒙古沙冬青毛状根和自然根样本在正、负离子模式下分别得到3982和4209种代谢物,差异代谢物分别为1706和1639种,其中表达上调的代谢物分别有1455和1095种;注释到KEGG的差异代谢物有171和134种,主要富集在8大类65条代谢通路:氨基酸代谢、次生代谢产物生物合成、碳水化合物代谢、脂质代谢、辅助因子和维生素代谢、萜类和聚酮化合物代谢、能量代谢及核苷酸代谢等通路;蒙古沙冬青毛状根差异代谢产物主要集中在氨基酸代谢和次生代谢产物生物合成通路中,正离子模式下涉及的差异代谢物分别占37.4%和32.7%,负离子模式下占28.4%和26.1%;次生代谢产物生物合成途径中涉及黄酮/类黄酮生物合成、生物碱生物合成、β-内酰胺菌素生物合成、芥子油苷生物合成、苯丙烷代谢等11条代谢通路,其中黄酮/类黄酮生物合成途径涉及的差异代谢产物最多,占次生代谢产物生物合成途径中差异代谢物的34%,其次是有关生物碱生物合成的差异代谢物,占24%;黄酮/类黄酮生物合成途径中涉及的差异代谢物有88.2%呈现上调。本研究结果可为蒙古沙冬青毛状根代谢产物积累及途径解析提供理论依据。

纳米铁和赤霉素对华重楼生长的影响

目的:研究纳米铁、赤霉素对华重楼幼苗生理生化、内源激素含量及生长的影响,为其在促生增产中的合理应用提供依据。方法:测定华重楼地下部分生物量指标;分光光度法检测华重楼幼苗叶绿素、过氧化氢、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性;超高效液相色谱串联质谱法(LC-MS)检测叶片生长素、细胞分裂素、赤霉素、水杨酸、茉莉酸、脱落酸含量。结果:相较于对照,纳米铁和赤霉素处理后的平均根数、平均根长和平均百株重均显著提高;纳米铁处理较赤霉素和对照MDA含量显著降低,较对照降低了2.83倍;纳米铁和赤霉素较对照过氧化氢含量分别下降了2.5倍和1.4倍;较对照叶绿素含量均显著提高,赤霉素作用强于纳米铁;纳米铁和赤霉素较对照SOD活性均显著下降,纳米铁较对照和赤霉素POD活性显著升高,赤霉素较对照和纳米铁CAT活性显著升高;纳米铁和赤霉素处理较对照内源茉莉酸、赤霉素、细胞分裂素含量显著升高,水杨酸、脱落酸、生长素含量显著降低。结论:纳米铁和赤霉素均能促进华重楼的生长,纳米铁胁迫保护作用更强,赤霉素促生作用更明显。

华重楼内生真菌聚多曲霉的促生与拮抗作用

【背景】华重楼(Paris polyphylla var.chinensis)是我国一种名贵稀缺中药材,有多种药效,由于过度采挖等原因,其野生资源现已极度匮乏。华重楼的人工栽培技术尚未成熟,生长缓慢、病害频繁发生是主要的制约因素。【目的】植物益生菌的开发是一种环保且有效的解决途径,符合生态种植的要求。【方法】通过常规方法分离鉴定内生菌,选取已报道具有促生抗病作用的菌株进行玉米种子发芽试验,无氮培养基定性检测固氮活性,平板拮抗试验检测抗菌性;高效液相色谱-质谱联用技术(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)检测其菌液的代谢成分;分光光度法检测华重楼幼苗丙二醛和叶绿素含量,LC-MS检测叶片水杨酸、茉莉酸、脱落酸、赤霉素、细胞分裂素、生长素的含量,测量华重楼地下部分生物量指标。【结果】分离得到一株菌jdqmzz-1,经rDNA ITS序列扩增比对、形态学观察、生理生化鉴定,确定为聚多曲霉(Aspergillus sydowii);其可以促进玉米种子发芽和华重楼生长,具有固氮、拮抗病原真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum GSICC 60612)、病原细菌胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc ATCC15713)的作用,真菌拮抗指数为42.50%,其菌液含有种类较多的促生和抑菌杀虫物质,菌液处理过的华重楼幼苗,叶片内源赤霉素和生长素含量较对照分别提高了54.1倍和2.3倍,叶绿素含量达到209.88 mg/g鲜重,较对照增加了48.80%,丙二醛含量较对照降低了15.20%;平均根数、平均根长、平均百株重较对照也有显著性(P<0.01)提高。【结论】分离出的内生真菌聚多曲霉jdqmzz-1能够有效地促进华重楼的生长。

植物组织特异性基因表达技术及其应用

研究表明在植物以及其它多细胞生物体中,有些基因只在生长发育的特定阶段、器官、组织或细胞中表达。对这类基因的研究一方面有助于我们了解该基因自身的功能,另一方面也可以作为工具应用到其他相关研究当中,例如利用植物中具特异表达特性的基因的调控元件将特定基因在特定器官、组织或细胞中表达的技术,即植物组织特异性基因表达技术。本文主要介绍目前被广泛使用的两种植物组织特异性基因表达技术,即组织特异性启动子驱动法和GAL4/UAS激活标签法及其应用,为今后的研究工作提供一定的参考。