不同浓度富血小板血浆促进骨髓间充质干细胞增殖及向软骨细胞分化的实验研究

目的:观察不同浓度富血小板血浆(PRP)对兔骨髓间充质干细胞体外增殖及向软骨细胞分化的影响。方法:将兔骨髓间充质干细胞培养在水凝胶三维环境内,并按培养液的不同分为4组:空白对照组采用DMEM培养液培养,加入不含血小板的血浆;5%PRP组采用含5%PRP的DMEM培养液培养;10%PRP组采用含10%PRP的DMEM培养液培养;20%PRP组采用含20%PRP的DMEM培养液培养。MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖情况,苏木精-伊红(HE)染色实验及Ⅱ型胶原免疫组化染色分析骨髓间充质干细胞向软骨分化情况。结果:空白对照组细胞增殖呈递增趋势,而含富血小板的3组从培养的第3天开始快速增殖,第6天进入增殖平台期。于第3天到第7天,3组含PRP组细胞数多于空白对照组,其中10%PRP组细胞数最多(均P<0.05)。3组含PRP组均能观察到典型的软骨细胞形态,软骨细胞呈椭圆形或卵圆形,成熟的软骨细胞分布于软骨陷窝内,3组PRP组的软骨样细胞数量均多于空白对照组(均P<0.001),20%PRP组的软骨样细胞数量多于5%PRP组(P<0.001),10%PRP组软骨细胞数量多于5%PRP组和20%PRP组(均P<0.001),空白对照组呈阴性表达,含PRP的3组Ⅱ型胶原均呈阳性表达,3组PRP组阳性面积占比均大于空白对照组(均P<0.001),10%PRP组阳性面积占比大于5%及20%PRP组(P<0.001)。结论:PRP对骨髓间充质干细胞体外增殖有促进作用,并能诱导向软骨细胞分化,浓度为10%PRP组作用较明显。