全腹腔镜与腹腔镜辅助右半结肠切除术治疗右半结肠癌临床研究

目的比较全腹腔镜右半结肠切除与腹腔镜辅助右半结肠切除治疗右半结肠癌的临床效果。方法分析常州市第二人民医院2020年10月至2023年10月收治的82例施行腹腔镜下右半结肠切除术患者资料, 全腹腔镜组和腹腔镜辅助组各41例。使用t检验、χ^(2)检验或确切概率法对比分析全腹腔镜组及腹腔镜辅助组的术中指标(手术时间、淋巴结清扫数目)及术后指标(术后排气时间、住院时长、辅助切口长度、术后疼痛程度、并发症例数), 两组比较采用t检验。结果全腹腔镜组手术时间[(152.76±8.84) min比(151.59±9.31) min, t=0.086, P>0.05]、淋巴结清扫个数[(21.27±1.52)比(21.65±1.41), t=0.065, P>0.05]、并发症发生率[19.5%(7/41)比17.1%(8/41), χ^(2)=0.085, P>0.05]与腹腔镜辅助组基本相似, 差异均无统计学意义。全腹腔镜组术后排气时间明显早于腹腔镜辅助组[(2.00±0.24) d比(3.14±0.37) d, t=11.209, P<0.01];住院时间明显短于腹腔镜辅助组[(6.03±0.24) d比(7.40±0.35) d, t=12.976, P<0.05];术后疼痛程度明显低于腹腔镜辅助组[(2.49±0.51)分比(4.32±0.47)分, t=6.101, P<0.05];辅助切口长度明显短于腹腔镜辅助组[(3.91±0.25) cm比(5.37±0.49) cm, t=16.055, P<0.01], 差异均有统计学意义。结论右半结肠癌患者行全腹腔镜右半结肠切除可有效减小辅助切口长度, 减轻术后疼痛程度, 缩短患者住院时长, 促进术后康复, 更符合快速康复理念, 疗效显著。

长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录本1通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路调控有氧糖酵解代谢促进胃癌细胞增殖

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)-肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对胃癌细胞增殖和有氧糖酵解的作用及其机制。方法使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、MKN45、AGS内lncRNA-MALAT1的表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)敲低SGC-7901细胞lncRNA-MALAT1的表达水平后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测胃癌细胞的增殖能力,酶标比色法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸水平和三磷酸腺苷(ATP)含量,RT-qPCR检测有氧糖酵解相关基因的mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的活化。两样本间的比较采用t检验。结果lncRNA-MALAT1在胃癌细胞中的表达量升高,其中SGC-7901组表达倍数明显高于GES-1组[(14.970±1.429)倍比1.000倍,t=16.880,P<0.01];转染靶向lncRNA-MALAT1的siRNA进入SGC-7901细胞后,沉默组lncRNA-MALAT1的表达倍数明显小于对照组[(0.560±0.110)倍比1.000倍,t=5.126,P<0.01];成功敲低lncRNA-MALAT1后,CCK-8实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.863±0.061比1.393±0.085,t=8.766,P<0.01),葡萄糖摄取率实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.563±0.097比1.010±0.105,t=5.399,P<0.01),ATP检测实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.583±0.155比1.037±0.120,t=4.003,P<0.05),乳酸产生率实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.573±0.127比0.973±0.083,t=4.572,P<0.05),沉默组己糖激酶2的mRNA表达明显低于对照组[(0.510±0.125)倍比1.000倍,t=5.980,P<0.01],沉默组M2型丙酮酸激酶的mRNA表达明显低于对照组[(0.573±0.160)倍比1.000倍,t=4.313,P<0.05],沉默组乳酸脱氢酶的mRNA表达明显低于对照组[(0.693±0.060)倍比1.000倍,t=4.400,P<0.05]和沉默组丙酮酸脱氢酶激酶1的mRNA表达明显低于对照组[(0.537±0.100)倍比1.000倍,t=5.408,P<0.01],沉默组p-PI3K/PI3K的蛋白相对表达量低于对照组[(0.519±0.070)倍比(0.805±0.071)倍,t=4.977,P<0.01],沉默组p-Akt/Akt的蛋白相对表达量低于对照组[(0.543±0.080)倍比(0.862±0.058)倍,t=5.590,P<0.01],沉默组p-mTOR/mTOR的蛋白相对表达量低于对照组[(0.341±0.075)倍比(0.853±0.040)倍,t=10.380,P<0.01]。结论lncRNA-MALAT1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路来促进胃癌细胞有氧糖酵解和体外增殖。

微小RNA-519d-3p靶向DCAF4L2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620,同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用两样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降,其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍,t=7.783,P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍,t=15.72,P<0.01],差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p,过表达组表达倍数高于对照组[RKO:(2.913±0.602)倍比1.000倍,t=5.409,P<0.01;SW620:(3.194±0.427)倍比1.000倍,t=8.765,P<0.001],差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示,过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO:0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021,t=3.064,P<0.01;SW620:0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032,t=2.432,P<0.01),差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO:(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个,t=7.127,P<0.05;SW620:(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个,t=9.387,P<0.05],差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO:(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%,t=394.900,P<0.01;SW620:(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%,t=21.350,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组,迁移实验[RKO:(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个,t=44.290,P<0.01;SW620:(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个,t=16.090,P<0.01],差异有统计学意义;侵袭实验[RKO:(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个,t=33.950,P<0.01;SW620:(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个,t=50.980,P<0.01],差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测,并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示,DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC,过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组,mRNA表达倍数[RKO:(0.170±0.050)倍比1.000倍,t=18.400,P<0.01;SW620:(0.256±0.069)倍比1.000倍,t=26.800,P<0.01],差异有统计学意义;蛋白倍数[RKO:(45.504±6.076)%比100.000%,t=15.540,P<0.01;SW620:(43.567±3.760)%比100.000%,t=26.000,P<0.01],差异有统计学意义。结论结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降,并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

人源性类器官在结直肠癌中的应用及研究进展

类器官是一种新兴的三维培养模型,具有培养简单、稳定性好、能高度重现来源组织的特征和异质性等优点。它既可作为临床预测模型,在体外对患者进行抗癌药物筛选和敏感性测试,从而制定个性化的治疗方案;亦可以作为基础研究的工具,通过进行自身基因编辑和修饰研究,或结合气-液界面培养法和微流控技术研究,探索结直肠癌发生发展分子机制及寻找潜在治疗靶点。本文就结直肠癌类器官在临床应用和基础研究中的现状和进展作一综述。

长程2型糖尿病对胰腺导管腺癌肿瘤相关巨噬细胞和预后的影响

目的探讨病程较长(≥3年)的糖尿病是否影响胰腺癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的极化,以及对胰腺癌患者预后的影响。方法收集2011年至2016年在武汉大学中南医院接受胰腺癌手术的患有长程2型糖尿病或无糖尿病患者的标本83例。采用免疫组织化学法分析组织切片中CD68和CD163的表达。运用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验分析生存曲线,Cox回归模型进行单因素和多因素分析。结果长程2型糖尿病(DM)组的CD68^(+)TAMs(P<0.05)、CD163^(+)TAMs(P<0.01)及CD163^(+)/CD68^(+)比例(P<0.01)均高于非糖尿病(NDM)组,差异有统计学意义。长程2型糖尿病与患者的组织分化程度、局部浸润和CA19-9的水平明显相关(P均<0.05)。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的独立影响因素(P均<0.05),长程2型糖尿病明显缩短患者的RFS和OS。结论长程2型糖尿病与胰腺癌的恶性程度明显相关,并吸引更多的巨噬细胞聚集于肿瘤中,这些巨噬细胞同时大量极化为M2型TAMs。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是RFS和OS的独立影响因素。

微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460,以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达,构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞,分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05,F=5.153,P<0.05),差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06,t=9.714,P<0.05),差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03,0.33±0.01比0.54±0.01,0.54±0.02比0.79±0.00,0.83±0.05比1.10±0.08,t=5.041、16.840、17.530、3.977,P<0.05),差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个,t=27.290,P<0.05],差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示,miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%,Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个,Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个,t=16.700、24.020、21.420,P<0.05],差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2,qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07,t=3.888,P<0.05),差异有统计学意义;Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论miR-17-5p在结直肠癌中表达升高,并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

应用生物信息学的方法筛选验证胃癌预后相关的关键基因

目的基于生物信息学的方法分析胃癌的基因表达谱,探讨可能参与胃癌发生发展及影响其预后的差异表达基因(DEGS)。方法从基因表达综合数据库(GEO)数据库下载3个mRNA芯片数据集GSE33651、GSE54129和GSE118916进行分析,获得基因表达谱,以差异倍数[|log Fc(foldchange)|]>1、校正后P值(adjP)<0.05作为标准筛选差异基因,然后应用在线工具维恩图(venn)获得3个数据集的共有差异基因,获得192个上调基因和65个下调基因。通过STRING和Cytoscape构建了DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,筛选分值最高的10个差异基因为关键基因。京东基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)用于功能富集分析。使用GEPIA、Oncomine和Kaplan-Meier在线网站来分析核心基因的表达和总体生存率(OS),以P<0.05为差异有统计学意义。结果通过3个数据集交集获得257个DEGs,其中包括192个上调基因和65个下调基因,这些基因生物学功能主要富集在糖衍生物结合、受体结合及大分子络合物结合,主要参与局部粘连、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路及细胞外基质受体相互作用的调节。在PPI网络中筛选出10个关键基因,Kaplan-Meier生存曲线显示,在胃癌患者中纤维连接蛋白1(FN1)、细胞表面跨膜糖蛋白分子44(CD44)、α1-Ⅰ型胶原基因(COL1A1)、α2-Ⅰ型胶原基因(COL1A2)、整联蛋白αM(ITGAM)、基质金属肽酶-2(MMP-2)、整联蛋白β2(ITGB2)高表达与更差预后明显相关,而重组人趋化因子8(CXCL8)高表达与更好预后相关。其中,FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2和CXCL8均在胃癌组织中高表达。结论 FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2与胃癌的发生及预后明显相关。

基于生物信息学分析筛选与鉴定结直肠癌的关键生物标志物

目的通过生物信息学分析结直肠癌组织与正常癌旁组织的基因表达数据集,筛选出参与并影响结直肠癌发生发展的关键差异表达基因。方法从基因表达谱(GEO)数据库中下载3个结直肠癌组织信使RNA(mRNA)芯片数据集,为数据集GSE35279,数据集GSE50746和数据集GSE87211,共包括173个正常癌旁组织和297个结直肠癌组织。进行分析筛选,获得差异表达基因(DEGs)。使用标注可视化和集成发现数据库(DAVID)用于富集分析。通过STRING和Cytoscape数据库构建蛋白与蛋白相互作用网络,并得到关键DEGs。利用UALCAN、基因表达谱动态分析(GEPIA)等数据库分析关键基因的表达和生存分析,使用Log-rank检验方法。结果在结直肠癌和正常癌旁组织中共识别出212个DEGs和10个核心基因。GEPIA总生存期曲线显示,金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)、分泌型磷蛋白1(SPP1)、蜗牛家族转录抑制因子1 (SNAI1)和胰高血糖素(GCG)的表达水平与结直肠癌患者总体生存率有关。高表达组TIMP1、SPP1和SNAI1结直肠癌患者总体生存率分别显著低于低表达组患者,并且低表达组GCG结直肠癌患者总体生存率显著低于高表达组患者,其结果具有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出4个结直肠癌临床诊断和预后的生物标志物,为进一步研究结直肠癌发病分子机制以及早期诊断和预后提供基础依据。

维甲酸诱导2基因表达上调抑制胰腺癌SW1990细胞裸鼠皮下移植瘤的生长

目的观察维甲酸诱导2基因(RAI2)表达对胰腺癌生长的作用。方法设计并合成成慢病毒RAI2过表达质粒和阴性对照慢病毒,并在胰腺癌细胞系SW1990中进行慢病毒感染实验建立RAI2过表达细胞株,然后利用荧光定量PCR检测RAI2 mRNA水平的表达验证过表达效率。利用裸鼠皮下移植瘤模型检测RAI2过表达组和阴性对照组细胞的生长,采用Student t检验进行统计学分析。结果慢病毒感染1周后,RAI2过表达组SW1990细胞RAI2 mRNA的过表达率为(87.5±4.9)%,差异有统计学意义(t=-10.281,P<0.01)。裸鼠皮下移植瘤实验表明,与阴性对照组比较,RAI2过表达组肿瘤体积[(112.46±39.24)mm^(3)比(544.85±94.43)mm^(3),t=6.585,P<0.05]和重量[(90.83±46.53)mg比(428.60±112.60)mg,t=7.325,P<0.05]均低于阴性对照组。结论RAI2基因表达上调抑制胰腺癌的生长。

启动子甲基化调控的抑瘤素M受体基因高表达与胃癌患者的不良预后相关

目的探讨启动子甲基化调控的抑瘤素M受体(OSMR)在胃癌中的表达及其作用。方法在UCSC Xena数据库中采用Studentt检验和皮尔森相关性检验分析OSMR基因及其启动子甲基化在胃癌中的表达及其调控关系。收集武汉大学中南医院2014年2月至2016年6月的80例人胃癌组织,经免疫组织化学实验检测OSMR蛋白表达水平,然后采用卡方检验分析OSMR蛋白表达量与患者临床资料的关系。结果 UCSC Xena数据库分析表明OSMR mRNA在胃癌组织中(14.752±7.593)高于癌旁组织(8.098±3.457,t=-8.938,P<0.01),而OSMR启动子甲基化在胃癌组织中(0.195±0.104)低于癌旁组织(0.463±0.187,t=9.372,P<0.01)。相关分析结果表明OSMR启动子甲基化与其基因表达呈负相关(R=-0.562,t=-14.517,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果表明OSMR蛋白表达水平与患者总体生存时间负相关[风险比(HR)=1.535,95%可信区间(CI):1.214~1.873,P<0.01]。χ^(2)检验结果表明OSMR蛋白高表达与肿瘤分化(χ^(2)=9.389,P<0.01)、TNM分期(χ^(2)=8.166,P<0.01)和淋巴结转移(χ^(2)=4.233,P<0.05)明显相关。结论启动子甲基化调控的OSMR在胃癌中高表达,且其表达量与患者的预后呈负相关。

快速康复对腹股沟无张力疝修补术后恢复的影响

目的探讨快速康复对腹股沟疝无张力疝修补术后恢复的影响。方法分析2015年10月至2018年9月共312例在我院行腹股沟疝无张力修补术的患者的临床资料,将所有患者按康复方法分为对照组(145例)和观察组(167例)。对照组行常规康复,观察组行快速康复,采用χ^(2)检验对比分析两组患者围手术期相关指标和术后并发症发生率。结果观察组患者术后肛门排气时间(t=2.748,P<0.05)、下床活动时间(t=2.976,P<0.05)和住院时间(t=3.421,P<0.01)明显低于对照组,观察组患者术后腹胀(1.8%比7.6%,χ^(2)=4.795,P<0.05)、尿潴留(1.8%比6.9%,χ^(2)=5.291,P<0.05)和慢性疼痛(4.2%比11.0%,χ^(2)=4.267,P<0.05)的发生率均明显低于对照组。两组患者术后切口感染发生率差异无统计学意义(1.2%比2.8%,χ^(2)=0.346,P>0.05)。结论快速康复对腹股沟疝术后恢复有明显帮助,缩短住院时间,减少并发症。