基于CRISPR Cas12a的等温核酸检测技术用于新型隐球菌高敏诊断的临床研究

目的:构建基于CRISPR Cas12a的高敏等温核酸检测方法,并评估其在支气管肺泡灌洗液及脑脊液中对于新型隐球菌的诊断能力。方法:利用NCBI Blast确定新型隐球菌保守序列,针对保守序列,设计等温重组酶聚合酶扩增引物及crRNA序列。利用新型隐球菌标准菌株及其他菌株(白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、金黄色葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌),提取其核酸,以评估方法的特异性及最低检测限。进一步收集临床确诊的10例肺部及10例中枢神经系统新型隐球菌感染患者的支气管肺泡灌洗液及脑脊液,以评估本研究构建的核酸诊断方法的临床检测性能。结果:共设计6组引物及crRNA组合,经筛选得到1组最佳组合。本研究构建的检测方法特异性高(与7种其他类型菌株无交叉反应),最低检测限达到5 copies/μL,整个检测流程速度快(在1 h内完成)。针对10例支气管肺泡灌洗液及10例脑脊液临床标本的阳性检出率均为100%。结论:本研究构建的新型核酸检测方法,具有高度的特异性和良好的检测限,在临床标本检测中同样具有优良检测性能,具备了较强的临床新型隐球菌核酸检测的应用潜力。

多重连接探针扩增技术在临床病原体检测中的应用

真菌等临床病原体的诊断、基因分型和耐药性检测对于临床诊治十分重要。多重连接探针扩增是一个可以同时定量检测多个基因序列的,简单、有效、快速的方法。其步骤包括待测DNA变性、半探针与待测DNA杂交,半探针的连接、PCR法扩增、凝胶电泳或者毛细管电泳鉴定扩增产物。MLPA已经在临床微生物诊断和研究中有了一定的应用,虽然尚处于起步阶段,但因其操作简便,反应快速,高通量,高敏感性和特异性的特点,拥有良好的应用前景。

叙事医学在全科医学生皮肤病教育中的应用

皮肤病具有难治、复发的特点,可引起抑郁、焦虑等严重心理问题,是基层全科医疗的重点和难点。“叙事医学”主张医护的共情、反思和信任,实现对患者身心的疗愈。全科医学生的临床教育,需要将“叙事医学”理念运用其中,培养全科医学生在医学实践活动中的“叙事能力”。本研究围绕着全科医学生皮肤病教育展开讨论,分析叙事医学理念在教学中的应用价值,探讨提高教学质量的有效方法,为全科医学生的叙事医学教学策略提供相应的建议和指导。

国产盐酸特比萘芬对皮肤癣菌的体外抗菌活性研究

目的：研究探讨国产盐酸特比萘芬对皮肤癣菌的三个属和角层癣菌的体外抗菌活性。方法应用美国国家临床和实验室标准研究所（CLSI）的M38？A2方案。菌悬液终浓度为（0．4～5）×104 CFU／mL，孵育温度30℃，培养时间7 d。最低抑菌浓度（ MIC）的判定标准为，在显微镜下观察，与阳性对照孔对比，100％生长抑制的最低浓度。最低有效浓度（ MEC）的判定标准为在显微镜下观察，与阳性生长对照孔比较，50％以上生长抑制。结果特比萘芬对138株暗色真菌最低有效浓度（MEC），MEC范围0．008～0．125μg／mL，MIC范围0．008～0．25μg／mL。国产盐酸特比萘芬的抗真菌效果与进口特比萘芬的抗真菌效果无显著差异（ P＞0．05）。结论国产盐酸特比萘芬对皮肤癣菌体外抗菌活性较高，可作为治疗浅部真菌病的有效药物之一。

免疫正常人群隐球菌性脑膜炎临床分析

目的分析近似免疫正常患者发生隐球菌性脑膜炎的临床表现及特点。方法回顾分析我院近16a来相关隐球菌性脑膜炎患者的临床表现、实验室检查及诊治情况。结果 44例患者中,平均年龄为(35.9±17.2)岁,男女性别比例为1.2∶1。临床表现不典型,以头痛(93.2%)、恶心(70.5%)、呕吐(68.2%)等最为常见。脑脊液压力偏高,平均为(339.3±75.0)mmH2O。42例首次腰穿后脑脊液行隐球菌墨汁染色的患者中,有41例(97.6%)真菌镜检阳性;查到34例患者的脑脊液乳胶凝集试验信息,其中33例(97.1%)阳性;有培养记录的患者有11例,阳性率为100%。44例患者抗真菌治疗诱导期以两性霉素B联合氟胞嘧啶(6例,13.6%)为主。所有患者经抗真菌治疗之后,治愈14例,好转14例,视力听力受累15人,1例女性患者出现轻瘫,所有患者到随访时间为止无死亡病例。结论新生隐球菌也可累及近似免疫正常患者人群,导致隐球菌性脑膜炎,且早期临床表现不典型,极易误诊漏诊,临床医师对此应提高警惕。对疑似病例及早送脑脊液标本行相关真菌学检查是明确诊断的关键。

上海某综合性医院秋季室内外环境空气中真菌种群分布的研究

目的监测目前上海地区某综合性医院室内外环境空气中真菌种群分布特征,为临床侵袭性真菌感染的防治提供科学依据。方法于2015年秋季以基于微生物气溶胶采集的空气采样器采样法与曝皿法随机对上海地区某综合性三甲医院的26处室内及7处室外环境进行同步空气采样,相关样本在含有氯霉素的沙氏培养基上经培养、分离、纯化及分子鉴定后,对不同采样地点真菌种群结构予以统计学分析。结果上海地区综合性三甲医院室内空气中青霉属(约24.14%)在真菌种群结构中占有明显优势,室外空气中则以分枝孢子菌属占有优势(约34.09%),青霉属在室内空气中所占比重(约24.14%)明显高于室外(11.09%)。结论虽然上海地区的医疗水平国内领先,且被调查医院已按相关规定进行了日常环境消毒工作,但被调查医院室内外空气中仍被发现存在高度多样性的真菌种群结构,且包含了常见的机会致病真菌如烟曲霉等,继续加强综合性医院室内外环境中真菌等病原微生物的监测和加强院内感染的控制是非常必要的。

颠倒课堂教学模式在皮肤病学教学中的应用探索

“颠倒课堂”结合了新型多媒体,移动互联、即时通讯工具、云存储等多种新兴信息传递技术,是一种新兴的教学理念。该文将“颠倒课堂”理念在《皮肤病学》课堂中进行初步实践。备课阶段充分征求学员意见,开发多媒体课程资源;课前通过建立微信小组等对教学大班进行分组并布置预习任务;课堂采用小组汇报教师点评的形式,将课堂重心向学生转移;课后及时通过网络问卷进行测验并反馈信息。“颠倒课堂”的教育模式可以在很大程度上克服传统课堂的种种缺陷,极大增加了课堂趣味性。

医学真菌研究的前沿及热点

国际上医学真菌研究的热点是"超级真菌",即耳道念珠菌,也是国际上医学真菌研究领域的重大课题。该菌具有基因组多样性、多重耐药性和病死率高的特点,因而引起了医学界的高度关注。本文概述了目前医学真菌研究的主要前沿及热点问题:(1)浅部真菌病病原菌流行病学变迁,通过大样本动态流行病学研究分析,皮肤真菌病的发病率逐步上升;致病真菌菌种分布发生显著变化,皮肤癣菌所占比重下降、酵母菌有后来居上之势;病原真菌多样性较前更为显著、新的致病菌种报道日益增多。(2)医学真菌新兴诊断技术不断发展,早期、特异、快速的诊断是真菌病、尤其是深部真菌感染的难点和热点;分子诊断、实时荧光定量技术及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术为医学真菌的精准诊断及指导治疗提供依据。(3)病原真菌对抗真菌药物耐药机制研究及致病真菌与宿主相互作用的分子与细胞机制研究受到重视。

一种基于环介导等温扩增技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术

目的研发一种基于环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术原理的组织胞浆菌感染的分子诊断技术。方法以组织胞浆菌为研究对象,针对其种特异性的M抗原基因序列,设计并筛选数套基于LAMP技术的特异性引物,同时优化其反应条件,建立一种针对组织胞浆菌感染的快速分子鉴定技术。结果该LAMP技术在65℃、90min反应条件下,对组织胞浆菌基因组DNA的检测敏感度达到5.3pg/反应(即5.3×10-12 g,约160个基因组DNA拷贝),且与其相近种属真菌无交叉反应。结论我们研发的这种基于LAMP技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术具有操作简便、特异性及敏感性高等优点,具有临床推广应用的潜力。

双侧肾血管、睾丸血管变异1例

作者在解剖一老年男尸时,发现双侧肾的血管有多处变异,用数显游标卡尺对肾血管、睾丸血管的长度、外径进行了测量,现报道如下。尸体身高约180 cm,体型较为肥胖,外观发育正常,未见明显畸形。

老药新用抗耳念珠菌感染的研究进展

多重耐药真菌的出现给抗真菌治疗提出严峻挑战,如耳念珠菌(Candida auris,C.auris)。老药新用,又被称为药物再利用,是指将已获批上市或处于临床研究的药物用于新的适应症或者疾病的治疗。该文回顾了近几年来关于对C.auris有效的老药新用的文章,发现包括抗癌药、镇静止吐药、抗抑郁药、抗高血压药、抗寄生虫药、戒酒药物在内的药物对C.auris也有抑制作用。这些药物大多具有广谱的抗真菌效果,部分药物与传统的抗真菌药物联用时还显示出协同作用,表现出良好的临床抗C.auris感染的应用前景。

抖音电商运营销售策略与展望

科学技术的进步,促进了我国社会经济的发展,随着智能手机的普及和5G的广泛应用,短视频技术受到越来越多的关注和欢迎,在社会生活、工作中,扮演、充当着不可或缺的角色与地位。当前,短视频已全面深入社会、政治、经济的各个方面,在发挥自身优势的同时也给新闻传播行业的发展带来了新机遇。其中,抖音被认为是短视频行业的领军者。然而,企业在短视频平台中进行电商运营,常常会遇到流量较少、用户互动不强、转化率不高、转粉率也不明显等问题。基于此,本文根据店铺运营特点,总结出一系列短视频的营销玩法、营销策略及运营方法,并针对兴趣电商运营提出对策与建议,以供行业参考。

念珠菌血流感染临床与实验室特点分析

目的根据血培养真菌阳性标本,进行病原学与药敏试验分析,探讨念珠菌在血流感染中的临床和实验室特点。方法收集某院2012年6月至2018年9月的血培养结果为真菌的临床资料,对真菌种类、阳性报警时间(TTP)、标本送检科室、病原菌来源和氟康唑药敏试验结果进行分析。结果血培养分离出真菌共86株,非重复分离株为50株,44株为念珠菌属。排在前3位的念珠菌分别为白念珠菌18株(40.91%),近平滑念珠菌和光滑念珠菌各10株各占(22.73%);近平滑念珠菌TTP[(56.14±7.22)h]最长,热带念珠菌TTP[(19.36±1.24)h]最短,白念珠菌[(34.67±2.98)h]与光滑念珠菌[(38.16±4.12)h]TTP接近居中;念珠菌血症前3位科室为神经外科10株(22.73%)、肿瘤血液科6株(13.64%)、重症监护病房5株(11.36%);泌尿系统为最常见感染来源,其次为腹腔引流感染和导管相关感染;近平滑念珠菌、热带念珠菌对氟康唑敏感率均为100%,白念珠菌和光滑念珠菌分别为88.89%和70%,克柔酵母菌和酿酒酵母菌各1株为耐药和敏感。结论本院念珠菌血流感染最常见为白念珠菌,其次为近平滑念珠菌和光滑念珠菌。如果血培养需氧瓶阳性且TTP大于40 h,发生念珠菌血流感染的可能较大,临床或实验室应高度重视。泌尿系感染、导管相关血流感染、手术部位感染是念珠菌血症的重要感染源。大部分念珠菌对氟康唑仍敏感。

1031例皮肤癣菌病及致病菌分析

目的了解本院皮肤癣菌病患者的临床特点、易感因素、病原菌种的构成及分布等。方法对2013年1月～2017年12月收集在本院皮肤科门诊就诊、培养结果为阳性的1031例皮肤癣菌感染病例进行病种及致病菌种分析。使用SPSS 23.0软件对结果进行统计处理分析。结果 1031例皮肤癣菌病中,男性535例,女性496例,共分离出1033株皮肤癣菌,其中皮肤癣菌病的发病高峰为21～30岁、 31～40岁年龄段。皮肤癣菌病患者分离出1种或1种以上其他真菌(非皮肤癣菌真菌)有71例(6.89%),分离出两种皮肤癣菌的有2例(0.19%),分离出最多的其他真菌是红酵母。最常见的皮肤癣菌病为甲癣(n=344,33.37%),其次为股癣(n=200,19.40%),体癣(n=162,15.71%),足癣(n=138,13.39%),手癣(n=108,10.48%),面癣(n=45,4.36%)和头癣(n=34,3.30%),其中股癣、甲癣等存在统计学意义上的性别差异。在菌种分布上,构成比前三依次为须癣毛癣菌(n=542,52.47%)、红色毛癣菌(n=397,38.43%)和犬小孢子菌(n=66,6.39%),其中红色毛癣菌和犬小孢子菌感染患者的性别差异有统计学意义。结论本院皮肤癣菌病以甲癣为主,主要致病菌为须癣毛癣菌,皮肤癣菌病及皮肤癣菌的分布特点和流行趋势与近年我国多数地区类似,但具备自身特点。

烟酰胺及联合伊曲康唑体外抗烟曲霉活性研究

目的检测烟酰胺及联合伊曲康唑的抗烟曲霉活性。方法采用CLSI推荐的M38-A2肉汤稀释法及棋盘式微量液基稀释法检测烟酰胺与伊曲康唑对15株烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC)和协同指数(FICI),通过荧光定量PCR检测加药后烟曲霉的相关基因表达水平。结果烟酰胺对烟曲霉具有抑制作用,MIC为12.8~25.6 mg/mL;烟酰胺与伊曲康唑具有协同抗菌作用,协同指数<0.5;膜蛋白相关基因与外排泵相关基因在烟酰胺单用及联合用药下,表达下调。结论烟酰胺具有抑制烟曲霉及增强伊曲康唑抗烟曲霉的作用,抑菌及增效作用与下调烟曲霉膜蛋白基因和外排泵基因表达有关。

烟曲霉的蛋白质翻译后修饰研究进展

前言烟曲霉是一种常见的机会性致病真菌,其孢子漂浮在空气中,人体每天吸入上百个孢子,免疫功能正常人群可通过自身免疫清除吸入的孢子,而在免疫抑制患者中常引起曲霉病[1-2],曲霉病分为非侵袭性和侵袭性两大类,其中侵袭性肺曲霉病为严重的感染类型,死亡率可高达50%~100%[3]。唑类药物为侵袭性肺曲霉病的临床一线用药,但近年来全球陆续报道烟曲霉对唑类抗真菌药物的耐药率逐年递增。荷兰一项基于1994—2016年的烟曲霉唑类耐药趋势研究共收集4268株菌株,结果显示唑类耐药率高达4.2%(179/4268),且近5年明显呈递增趋势[4]。

等位基因特异性PCR法快速检测烟曲霉常见耐药突变基因

目的建立一套检测烟曲霉L98H/TR34耐药突变的二重扩增体系,进而快速准确判断其对于唑类的耐药情况。方法通过等位基因特异性PCR法实现L98H/TR34耐药突变二重PCR检测,评价该体系的特异性和敏感性。结果所有烟曲霉L98H/TR34耐药基因阳性菌株实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT-PCR)溶解曲线均呈现双峰,无突变的菌株均未检测到突变位点。结论等位基因特异性PCR能够快速检测烟曲霉菌常见耐药突变基因L98H/TR34,具有较高的特异性和敏感性,操作简单,价格低廉。

伊曲康唑在甲真菌病治疗中的应用

甲真菌病(onychomycosis)是一种临床高发的浅部真菌感染,易反复、难根治。伊曲康唑(itraconazole)对引起甲真菌病的皮肤癣菌、酵母菌和非皮肤癣菌性霉菌等均具有良好的抗菌活性,是目前临床上被广泛用于甲真菌病治疗的药物。本文旨在对伊曲康唑胶囊剂在甲真菌病治疗中的应用研究进行综述。

侵袭性念珠菌感染流行病学现状和治疗进展

侵袭性念珠菌感染(invasive candidiasis,IC)是临床较常见的侵袭性真菌感染,具有发病率高、死亡率高和诊疗费用高等特点。白念珠菌虽然仍是IC患者最常见的病原菌,但近年来非白念珠菌感染发生率正逐步上升,且存在引起暴发的潜在威胁。临床常用的系统抗真菌药物主要包括三唑类、多烯类及棘白菌素类等,其中棘白菌素类是目前治疗IC的首选药物。随着抗真菌药物在临床的大量使用,念珠菌属的耐药性日趋严重,“超级真菌”耳念珠菌等新病原体不断涌现。上述抗真菌药物已无法满足临床需求,IC患者死亡率仍居高不下。本文主要对IC的流行病学现状、治疗及新药研究进展进行综述,为IC的临床诊治提供参考。

硼酸在阴道炎治疗中的临床应用

近年来,硼酸(boric acid)治疗阴道炎(vaginitis)已成为前沿研究热点。硼酸具有不诱导微生物耐药、不完全穿透皮肤、抗菌谱较广及局部应用耐受性良好等优势,其对阴道炎患者的治疗具有广阔前景。本文就硼酸治疗阴道炎的临床应用现状作一综述。