猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建

为了构建猫杯状病毒(FCV)弱毒疫苗候选株,从杭州流行的FCV毒株FCV-HZ-DF-19中提取基因组RNA,利用RT-PCR技术分3段扩增获得FCV全基因组,通过同源重组的方法将全长基因组克隆至已插入榔头状核酶(HamRz)和丁型肝炎核酶(HdvRz)的PCI载体,获得中间质粒pPCI-FCV;以pPCI-FCV为模板扩增获得含HamRz、HdvRz和FCV全基因组的产物FCV-H,并将其连接到BAC载体中获得含有FCV全基因组的克隆pBAC-FCV。将pBAC-FCV转染猫肾细胞F81连续传代后收获病毒。针对FCV毒力相关的LC基因进行缺失,获得感染性克隆pBAC-FCV-ΔLC,通过转染表达FCV-VP1蛋白的猫肾细胞系进行病毒拯救。结果显示,拯救毒株rBAC-FCV和LC基因缺失毒株rBAC-FCV-ΔLC均可产生细胞病变;测序结果表明,拯救毒株的基因序列与亲本毒株FCV-HZ-DF-19一致,且生长曲线与亲本毒相似,而基因缺失毒株的生长则慢于亲本毒株,产生的噬斑大小也明显小于亲本毒株,表明缺失LC基因后病毒毒力下降。结论:本研究成功构建了FCV的反向遗传系统及基因缺失弱毒株,为后续弱毒疫苗研发和FCV生物学特性研究奠定了基础。

免疫抑制剂他克莫司研究进展

他克莫司是一种从筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaenis)发酵产物中分离得到的23元大环内酯类抗生素,临床上主要作为治疗器官移植后排斥反应的免疫抑制剂。介绍了他克莫司的药物动力学和药效学、理化性质、免疫抑制机制及其生物合成的研究进展。随着他克莫司的合成基因簇的阐释及其代谢途径的解析,运用基因工程和代谢工程手段对其进行的研究逐渐增加。由于其在临床治疗中具有重要地位,使得他克莫司产业的发展具有显著的社会效益和经济价值。