DNA条形码技术在蛇类鉴别中的应用

从NCBI中GenBank数据库下载蛇类细胞色素b基因(Cytb)序列7329条,以MT765098.1序列为标准进行对比和修剪,获得蛇类Cytb序列4665条。对蛇类Cytb序列进行核苷酸饱和度、遗传多样性、种内和种间遗传距离计算,构建系统发育树。结果表明,基于Kimura–2–Parameter模型,蛇类平均种内遗传距离为3.3%,普遍小于6.7%,而平均种间遗传距离为19.96%,普遍高于9.3%,说明蛇类物种间遗传距离存在较大差异。根据蛇类物种间遗传距离,识别出蛇类23个物种的亚种,Pareas和Hydrophis属物种含有复合体,Atractus dunni、A.iridescen和A.occidentali互为姐妹物种。

南平市延平区口蹄疫免疫抗体监测和效果分析

2023年春季,对南平市延平区规模猪场、乳牛场及羊场进行口蹄疫免疫抗体监测。结果显示,规模猪场和乳牛场的O/A口蹄疫整体合格率均在90%以上,羊场仅为73%左右;规模猪场和乳牛场的S/N均值≤0.6,说明猪、牛口蹄疫疫苗免疫效果达到预期水平。有4家羊场的S/N均值≥0.6,羊场应重视疫苗免疫,确保免疫质量;O型口蹄疫抗体离散度≥100%的现象,可能与养殖场存在免疫漏免有关。应重视对家畜口蹄疫的免疫工作,根据个体的抗体消长规律进行有针对性的免疫,以提高群体抗体均匀度。

南平市延平区猪场猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体水平监测及分析

为了解南平市延平区规模化猪场猪瘟(Clssical Swine Fever,CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的免疫水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对2019-2022年收集到的1 926份猪血清进行CSF和PRRS抗体检测。结果发现2019-2022年CSF抗体阳性率总体在95%以上,相比之下,PRRS抗体阳性率存在波动,其阳性率总体也在83%以上;对春秋两季猪群CSF和PRRS抗体阳性率检测显示,CSF和PRRS抗体阳性率在春秋两季差异均不显著(P>0.05),然而2种疫病的抗体阳性率在春季普遍较高。说明猪场除了重点加强PRRS的免疫防控,也要特别注重秋季对CSF和PRRS的免疫防控来减少猪场损失。

植物乳杆菌内源性质粒序列分析及其表达载体的构建

目的:构建乳酸杆菌的表达载体,对菌株携带的质粒进行序列测定和功能分析,并利用自身带有的质粒系统构建乳酸杆菌的表达系统,对乳酸菌口服疫苗的制备起到积极的促进作用。方法:从植物乳杆菌LP3中提取质粒并进行序列测定和功能分析。通过质粒pLP3复制子,与pCPSP载体的氯霉素基因CmR、pUC19的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒。在穿梭质粒的基础上加上嗜酸乳杆菌的S层蛋白启动子PslpA和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,eGFP)基因,进一步构建乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA-eGFP。结果:从植物乳杆菌LP3中得到一个天然隐蔽性质粒pLP3,该质粒大小为2017 bp,GC含量为37.48%。基于质粒pLP3,构建了大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒D-pLP3,并成功转化至不同类型乳酸菌,转化效率介于0.3×102~1.0×103 CFU/μg(DNA质量计)之间。乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA-eGFP转化至植物乳杆菌,成功获得了荧光蛋白的表达。结论:成功构建了乳酸菌表达载体D-pLP3-PslpA,为乳酸菌基因操作提供了新的工具。

龙岩市某规模化猪场猪伪狂犬病病毒及抗体检测

为了掌握龙岩市某规模化猪场猪群伪狂犬病病毒（PRV）感染情况,用PCR检测发病猪病料中PRV gE基因,进行测序及遗传进化分析;同时应用ELISA方法检测该场母猪、不同日龄商品猪血清中gE和gB抗体水平。结果表明,从3头发病猪病料中均扩增到1 755bp特异性条带,对该基因遗传进化分析表明,本次发病为PRV变异株感染引起。血清中gE和gB抗体水平检测结果显示,母猪免疫（gB）抗体水平较高,gB抗体阳性率为100%,但不能阻止PRV感染,转阳率为20%;15日龄~55日龄商品猪具有较高水平的母源抗体,55日龄商品猪略有下降,70日龄商品猪gB抗体阳性率下降为20%,但15日龄~80日龄的商品猪gE抗体阳性率为0;而90日龄以上的商品猪存在不同程度的PRV感染,90日龄gE抗体阳性率为20%;150日龄和170日龄的gE抗体阳性率都为100%。本次检测结果可为该场猪伪狂犬病的防控措施的制定与实施提供参考。

猪布鲁氏菌病流行病学调查及3种检测方法比较

为了解南平市延平区猪布鲁氏菌病的感染状态,分别从该地区12个乡镇随机选择1个规模化猪场,每个猪场采集30份血清样品,共采集360份样本。先用布病虎红平板凝集试验(RBPT)筛选,再用间接酶联免疫吸附试验(iELISA)和竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)复核。结果显示,虎红平板凝集试验共检出阳性血清样本54份,阳性率为15%,两种酶联免疫吸附试验检测均无阳性血清样本,表明延平区的猪场未存在布病感染的风险,在3种检测方法中,RBPT操作简单、灵敏性高,但假阳性率高,而ELISA特异性最好。

南平市延平区2018-2021年猪口蹄疫免疫抗体监测及分析

为进一步了解南平市延平区规模猪场猪口蹄疫血清抗体情况,采用血清学检测方法对延平区2018-2021年猪口蹄疫血清抗体情况进行调查。结果显示,共采集的1 968份猪血清中,O型口蹄疫抗体合格率为91.96%,A型口蹄疫抗体合格率为89.53%,表明延平区猪口蹄疫免疫抗体均达到国家规定要求,且猪O型口蹄疫群体免疫效果优于A型口蹄疫。因有些乡镇抗体合格率较低,故仍然需要加强动物免疫抗体的监测工作,为预防和控制猪口蹄疫的发生提供科学权威的依据。

猪伪狂犬病毒变异株(Fujian-LY)对免疫仔猪的致病性研究

本实验室2014年从福建省龙岩市某规模化猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒变异株,命名为PRV Fujian-LY株。为了研究Fujian-LY株对免疫仔猪的致病性,将8头20龄的PRV抗原、gE抗体均为阴性,gB抗体均为阳性仔猪随机分为3组,其中2组(每组3头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种Fujian-LY株,第3组2头仔猪做阴性对照。试验仔猪接种病毒24h后体温均开始升高,随着病程发展,呼吸系统症状明显,滴鼻接种组仔猪发病明显快于肌肉注射组,所有攻毒仔猪虽均有发病但未出现死亡。通过病理剖检、PCR鉴定、病毒分离培养、易感动物感染试验及gE抗体ELISA检测证实Fujian-LY株人工攻毒试验成功。gE抗体检测结果表明所有攻毒仔猪攻毒后7dPRV gE抗体开始阳转。对发病仔猪剖检可见,脑积液明显增多,脑膜血管充血,并伴有出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片观察结果显示发病仔猪脑实质中小血管扩张充血,血管周围有淋巴细胞包围"血管套"现象,其他主要脏器也均有明显的病理变化。试验结果表明PRV Fujian-LY株为伪狂犬病毒强毒株。

闽西地区猪伪狂犬病毒变异株TK基因新变异序列鉴定

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本试验收集了闽西不同地区的14株PRV分离株,并对其TK基因进行遗传变异分析。结果表明：14株PRV分离株的TK基因与其他参考毒株相应序列具有严格的保守性,这些毒株之间的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.3%~99.8%和96.9%~99.4%。氨基酸多序列比对发现,14株PRV分离株在2个位点发生了独特性的氨基酸突变,即第16位氨基酸（除PRV FJLY04和FJLY06株外）由K突变为R和第129位氨基酸由S突变为G,这是国内首次报道TK基因在该位置发生氨基酸突变的毒株。其中,第16位氨基酸突变导致TK蛋白ATP结合结构域由-G＊＊G＊GK-转变为-G＊＊G＊GR-,同时该位点还位于TK蛋白的抗原表位区内。这些新的氨基酸突变与PRV致病性及其与生物学特性的关系有待进一步研究。

胸腺五肽在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

根据胸腺五肽(TP5)的基因序列,进行植物乳杆菌(Lp1)密码子偏嗜性修饰,并克隆至由超强启动子SCP驱动外源基因表达的植物乳杆菌表达载体p SCPSP,电转化表达宿主菌植物乳杆菌。通过PCR筛选出阳性重组转化子,并用胸腺五肽ELISA特异性检测试剂盒检测重组植物乳杆菌16 h、20 h、24 h、28 h培养上清中目的蛋白的表达含量。用培养第12小时的乳杆菌灌胃刚断奶的SPF级BALB/c小鼠,每日1次,连续14 d,以小鼠的胸腺指数、脾指数和血清中IL-2的含量为指标检测TP5的生物活性。ELISA结果表明,在培养第24小时目的蛋白表达含量最高,且重组植物乳杆菌能显著增加小鼠的胸腺指数和血清中IL-2的含量,对脾指数无显著影响。结果表明,TP5在植物乳杆菌中成功表达,并有良好的生物活性。