人肺上皮细胞表达蛋白酶激活受体

目的: 蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs) 广泛分布在多种组织细胞上,但4种PARs在肺上皮细胞的表达情况尚不清楚. 我们用A549细胞研究PARs在肺上皮细胞的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪和免疫荧光细胞染色分析技术分析肺上皮细胞系A549细胞PARs的表达情况. 结果:4种PARs在肺上皮细胞上均有不同程度的表达. 结论:肺上皮细胞同时表达PAR 1～4 4种受体,这为进一步研究PARs在肺上皮细胞的功能奠定了基础.

用免疫荧光标记对人组织中肥大细胞亚型的分选与形态观察

方法:利用中性蛋白酶成分、特征性酶抗体的免疫荧光染色和流式细胞仪确定分选肥大细胞亚型,以激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒。结果:三种免疫表型被确定:肥大细胞的类胰蛋白酶阳性(MCT)、类糜蛋白酶阴性;类糜蛋白酶阳性(MCC)、类胰蛋白酶阴性和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性(MCTC)。肥大细胞内分泌颗粒分散或聚集存在,分泌颗粒突起分泌或以分散的方式释放。分泌颗粒大范围释放后,肥大细胞的形态结构发生了改变。结论:利用肥大细胞的特征性酶抗体、免疫荧光标记和流式细胞仪可将人组织中的肥大细胞分选纯化为三种亚型;以共聚焦显微镜显示肥大细胞含有丰富的分泌颗粒,它说明肥大细胞具备了为人体I型变态反应提供快速反应的物质基础。

流式细胞仪分析癌细胞对肥大细胞募集的影响

目的:研究食管癌细胞迁移到小鼠腹腔时肿瘤细胞周边微环境的变化。方法:将食管癌细胞株EC109和/或诱导试剂植入小鼠腹腔,利用组织化学的方法、荧光标记的肥大细胞蛋白酶和流式细胞术,我们在小鼠模型观察肠组织的形态和腹腔的MC亚型的变化。结果:胰酶导致小鼠肠道平滑肌层和黏膜下层的组织增厚,细胞间隙的增加可能有益于MC在组织移动或迁移进入腹腔;它引起小鼠腹腔液的总MC增加,MCC亚型的相对比例增加,MCT亚型减少。EC109细胞不能明显地改变小鼠肠道组织的形态,但它显著地引起腹腔MCT亚型的相对比例增加。结论:根据肥大细胞内颗粒的类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的差异表达,可证实小鼠的MC亚型;并且不同的诱导物可能影响腹部微环境的变化。目前的研究表明,食道癌细胞可以诱导MCT(含有类胰蛋白酶)亚型迁移到小鼠腹腔,造成肿瘤细胞周围的内部环境的变化。

组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用

目的：观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体（TLR）表达的影响．方法：体外培养人肺上皮细胞株A549，用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10mRNA的变化，并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用．结果：A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达，组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性，并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用．结论：组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达，提示当呼吸道存在变态反应性病变时，增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性．

组织中肥大细胞内F-actin对其不同亚型细胞分泌作用的影响

目的：研究细胞内丝状肌动蛋白的变化对不同亚型肥大细胞分泌作用的影响。方法：利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体和鬼比环肽的免疫荧光标记；以流式细胞仪检测分选人皮肤组织中肥大细胞的亚型；使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒和微丝的分布。结果：类胰蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内含有丰富的丝状肌动蛋白环，在质膜内层区域形成阻碍类胰蛋白酶释放的屏障；大量的类胰蛋白酶暂存于分泌泡中，少量的类胰蛋白酶因细胞内丝状肌动蛋白环的解聚使之从分泌泡中释放。而类胰蛋白酶和类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞及类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内少见或未见明显的阻碍蛋白酶释放的丝状肌动蛋白环；细胞形态膨胀，细胞内蛋白酶已释放。结论：人皮肤组织中肥大细胞内类胰蛋白酶和／或类糜蛋白酶的含量及其肥大细胞亚型与丝状肌动蛋白环相关联。