沉默PGC⁃1α表达对人根尖牙乳头干细胞定向分化的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC⁃1α)在人根尖牙乳头干细胞(hSCAPs)定向分化中的作用。方法:hSCAPs矿化诱导0、3、7 d,实时荧光定量PCR检测PGC⁃1α的基因表达水平。转染小干扰RNA(siRNA)构建稳定低表达PGC⁃1α的hSCAPs,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测PGC⁃1α的表达水平,采用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别检测ALP活性和矿化水平的变化,Western blot和实时荧光定量PCR检测成牙/骨向分化相关蛋白和基因的变化。结果:PGC⁃1α的基因表达水平在hSCAPs定向分化过程中逐渐上调。与对照组相比,低表达PGC⁃1α的hSCAPs其ALP表达量下降,矿化结节减少,牙本质涎磷蛋白(DSPP)、ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)等成牙/骨向分化相关指标表达水平下调(P<0.05)。结论:沉默PGC⁃1α表达可抑制hSCAPs定向分化。

Vitapex对根尖牙乳头干细胞成牙/骨向分化及自噬的影响

目的:研究Vitapex糊剂对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成牙/骨向分化的影响,初步讨论其潜在机制。方法:酶消化法分离并培养SCAPs;制备不同浓度Vitapex条件培养基,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定选取最适浓度;ALP染色、实时荧光定量PCR和Western blot检测成牙/骨向相关基因和蛋白的变化情况;Western blot检测自噬相关蛋白表达水平。结果:0.2 g/L Vitapex条件培养基组ALP活性最高,选取为最适浓度进行后续实验。与对照组比较,该浓度Vitapex条件培养基能显著促进SCAPs细胞ALP、核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨相关转录因子(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因和蛋白表达(P<0.05)。同时,0.2 g/L Vitapex组中微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin⁃1蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:Vitapex可促进SCAPs成牙/骨向分化,并激活自噬。