牛磺熊去氧胆酸通过抑制内质网应激诱导的凋亡促进类鼻疽菌的清除

目的 拟通过类鼻疽菌感染RAW264.7巨噬细胞模型,探讨牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)促进类鼻疽菌胞内清除的作用机制。方法 类鼻疽菌感染RAW264.7细胞后8 h,设置未感染组和类鼻疽菌感染组,在不同浓度TUDCA处理条件下,采用流式细胞仪检测类鼻疽菌诱导细胞凋亡的情况;同时使用另外一种内质网应激抑制剂4-PBA,通过Annexin-V/PI双染法和MTT细胞增殖实验分别检测类鼻疽菌感染对宿主细胞凋亡和增殖的影响;进一步使用siRNA干扰内质网应激关键基因CHOP,设置siC对照组和siCHOP干扰组,通过Western blot和流式细胞仪检测类鼻疽菌感染后Caspase-3、Caspase-12等细胞凋亡相关蛋白的表达水平及细胞凋亡情况;通过细菌胞内生存实验分析TUDCA通过抑制内质网应激减少其诱导的细胞凋亡、增强巨噬细胞对类鼻疽菌胞内清除作用的机制。结果 在不同浓度TUDCA处理下,100μmol/L或200μmol/L TUDCA可明显减少类鼻疽菌感染诱导的RAW264.7细胞凋亡数量(P<0.05)。分别使用两种内质网应激抑制剂TUDCA和4-PBA均可降低类鼻疽菌感染诱导的细胞凋亡(P<0.05)。在siC对照组,相较于未感染时类鼻疽菌感染后Caspase-3和Caspase-12表达明显增加。在siCHOP干扰组,细胞凋亡相关蛋白的表达显著低于siC对照组,TUDCA处理后细胞凋亡相关蛋白表达水平与未加TUDCA药物相比无明显差异。流式细胞仪检测结果也显示,TUDCA能够减少类鼻疽菌感染后诱导的细胞凋亡(P<0.05),但在siCHOP干扰组中,TUDCA对类鼻疽菌感染诱导的凋亡无明显改变。细菌胞内生存计数结果显示,在siC对照组加入TUDCA能够增加宿主细胞对类鼻疽菌的清除(P<0.05),而在siCHOP干扰组中TUDCA的处理对类鼻疽菌胞内增殖无明显影响。结论 在类鼻疽菌感染RAW264.7细胞模型中,TUDCA能够通过抑制巨噬细胞内质网应激诱导的凋亡,促进巨噬细胞对类鼻疽菌的胞内清除。

乡村振兴背景下宣城市茶产业高质量发展研究

实施乡村振兴战略是党中央作出的重大决策部署,是新时代“三农”工作的总抓手。实施乡村振兴战略离不开产业发展,要依托农业农村特色资源,发展农业特色产业,实现生态富民的目标。以安徽省宣城市茶产业为例,通过实地调研、问卷调查、面对面访谈等方式,采用SWOT分析法分析宣城市茶产业在发展过程中的优势和不足,梳理宣城市茶产业高质量发展的实施路径,探寻一条乡村振兴、生态富农的道路。

高校思想政治教育主渠道主阵地协同研究:现状、困境与出路

本文以主渠道与主阵地协同为研究对象,分别对主渠道与主阵地的内涵与关系进行了分析与解读,阐述了大学生思想政治教育主渠道主阵地协同的三大现状,归纳了大学生思想政治教育主渠道主阵地协同的三大困境,运用了文献研究法与实证研究法,探究出与之一一对应的三大解决方案。研究结果有助于强化主渠道主阵地协同育人合力,提升高校思政教育的实效性。

两种祛泡剂对肠镜检查肠道准备的效果影响

目的探讨西甲硅油和二甲硅油在肠道准备中的作用。方法选取2021年1~12月于温州医科大学附属第一医院行肠镜检查的300例患者为研究对象,根据随机数字表法将患者分为A、B、C三组,每组各100例。A组患者服用复方聚乙二醇电解质散行肠道准备;B组患者在A组的基础上联合西甲硅油祛泡剂行肠道准备;C组患者在A组的基础上联合二甲硅油祛泡剂行肠道准备,比较三组患者肠道内气泡量评分、肠镜检查时间、生理盐水冲洗量。结果三组患者各肠段的总体气泡量评分、肠镜检查时间、生理盐水冲洗量、≤0.5cm结肠息肉检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论口服西甲硅油能更好地消除肠道内的气泡,提高肠道准备质量及≤0.5cm息肉的检出率。

类鼻疽杆菌基因组学概述及进展

类鼻疽伯克霍尔德杆菌是一种人体机会致病菌,导致的疾病称类鼻疽,是一种典型的热带疾病,能感染机体几乎任何器官。类鼻疽杆菌分布广泛,主要存在于水及土壤中,其耐受性极强,能在土壤中存活几十年之久,被美国CDC列为B类生物恐怖剂。随着病原菌的扩散和人类活动的影响,全球范围内关于类鼻疽病例报道的增加,越来越多的证据表明类鼻疽是一种正在扩散的人兽共患病。海南、广东等地正是类鼻疽感染的重灾区,而国内类鼻疽杆菌的研究尚少,也没有类鼻疽杆菌研究的标准株和基因组学理论基础,获取国际标准菌株资源受到西方国家的限制,鉴于类鼻疽杆菌的特殊性、类鼻疽流行的严峻形势及科研壁垒,加强类鼻疽的研究有着重要的社会意义和军事价值。本文总结了类鼻疽杆菌(K96243标准株)的全基因组的特点,结合当今的DNA测序的发展现状,指出开展国内类鼻疽杆菌全基因测序的必要性和紧迫性。

抗类鼻疽伯克霍尔德菌多抗血清的制备及评价

目的制备抗类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudoamllei,其抗原简写为BP)多抗血清,评价不同处理方式对抗原免疫原性的影响。方法采用超声破碎、甲醛灭活、热灭活3种方式处理细菌抗原接种新西兰兔和BALB/C小鼠,检测不同抗原免疫动物抗血清的ELISA效价及凝集试验效价。结果 (1)ELISA方案最佳条件:二抗稀释度为1/8000,抗原包被浓度为4μg/mL或8μg/mL;凝集反应最佳条件:细菌浓度为6×109CFU/mL、凝集温度为37℃、观察时刻为4h。(2)超声破碎抗原(U-BP)免疫新西兰兔和小鼠的抗血清ELISA效价高达1/64000,最高血清凝集效价分别为1/32和1/64,甲醛灭活抗原(F-BP)抗血清ELISA效价高达1/16000,凝集效价为1/128和1/64;热灭活抗原(H-BP)抗血清ELISA效价达1/8000,凝集效价为1/16和1/64。(3)F-BP和H-BP具有较强的免疫原性,U-BP在小鼠中的免疫原性较弱(P<0.05)。结论建立了抗类鼻疽伯克霍尔德杆菌多克隆抗体的检测方法,制备了高效价的抗类鼻疽伯克霍尔德杆菌多抗血清;甲醛灭活和热灭活细菌具有较好的免疫原性,为下一步类鼻疽伯克霍尔德杆菌的致病机制研究和疫苗研发打下了基础。

1例输入性类鼻疽病例的溯源分析

类鼻疽是一种由类鼻疽伯克霍尔德菌感染人体所引起的热带感染性疾病,主要流行于澳洲北部,东南亚和我国海南等地。类鼻疽的临床表现多样,有＂似百样病＂之称,可潜伏感染,也可急性起病,复发率高,耐药广泛,死亡率在20%-50%。

基于新浪微博的2022年吉林松原M_(S)4.3地震舆情信息数据分析

基于新浪微博数据,运用网络爬虫技术,获取2022年3月16日吉林松原M_(S)4.3地震舆情信息数据并进行分析,发现舆情传播生命周期通常为震后48小时,震后舆情传播信息广度通常呈双峰分布,官方与自媒体的信息发布更易推动舆情事件热度多峰的形成,政府与自媒体的介入可有效稳定网友情绪并提升网友情绪评分。

类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染RAW264.7细胞模型的建立

目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法摸索类鼻疽伯克霍尔德氏菌培养条件、构建模型的感染条件(e.g.感染复数,感染时间),通过吉姆萨染色、透射电镜、活细胞工作站动态观察等确证胞内感染和宿主细胞的形态变化,分析病原菌侵袭率、胞内复制率和宿主反应性来评价该模型中病原菌侵入RAW264.7特点和病理损伤类型。结果确定了类鼻疽伯克霍尔德氏菌的一般培养条件,感染复数MOI=100感染宿主细胞,170g离心5min后37℃共孵1h以利于细菌侵入胞内,含250μg/ml卡那霉素的DMEM-10培养以杀死胞外病原菌。形态观察,类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染后最早8h可观察到异物多核巨细胞(MNGC),RAW264.7细胞伸出伪足,相互融合。感染初期(<3h)TNF-α升高较快,9h后则下降至低值,直至感染后期(15～24h)再次升高。结论成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌胞内感染模型,拟为进一步研究其致病机制提供了条件。

类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统蛋白BsaL的制备和免疫反应性分析

目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析、凝胶过滤层析等纯化方法得到高纯度的Bsa L蛋白。包被Bsa L蛋白于96孔板,分析其用于检测临床类鼻疽菌株的敏感性和特异性。结果成功构建了表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,诱导、表达及纯化后得到高纯度(>99%)、高浓度(20 mg/m L)的重组Bsa L蛋白。该蛋白在类鼻疽菌检测方面表现出较好的灵敏度(85%)和特异性(89%)。结论成功表达了重组的Bsa L蛋白,获得了高纯度的Bsa L蛋白样品,在类鼻疽菌的诊断方面展示出较好的应用价值。

潮汕地区农村成年居民自我报告的伤害发生现况及其影响因素

目的 了解潮汕地区农村成年居民伤害发生现况，为开展伤害预防控制提供科学依据。方法采用整群随机抽样的方法，对潮汕地区18岁以上的本地农村居民采用自我报告方式调查伤害发生现况，采用卡方检验、Logistic回归对调查资料进行分析。结果共调查1780人，应答率为94.5%；结果显示，农村成年居民伤害发生率7.0%，女性伤害率(8.0%)高于男性(4.1%)(P＜0.05)；不同年龄组伤害发生率不同(＜0.05)。伤害发生情况单因素分析显示：性别、年龄、婚姻状况、受教育程度等因素与伤害发生有关联；多因素Logistic回归分析结果显示，农村女性、小学文化程度是伤害发生的危险因素。结论农村女性、低文化程度是伤害发生的危险因素，应该针对这部分人群展开有针对性伤害预防的健康促进活动。

腹腔镜肝脓肿切开引流适应证与疗效分析

目的探讨腹腔镜肝脓肿切开引流术的适应证与疗效。方法对外科处理的101例肝脓肿病例资料进行回顾性分析,比较腹腔镜肝脓肿切开引流与其他外科方法的疗效。结果本组B超或CT引导下穿刺置管引流46例,剖腹脓肿切开引流43例,腹腔镜脓肿切开引流12例。腹腔镜脓肿切开引流组与剖腹手术组相比,手术时间短[(105±17)min vs(137±27)min]、住院费用少[(1.4±0.3)万元vs(1.8±0.6)万元],且住院时间在三组中最短[(9.3±2.1)d vs(15.1±4.4)d及(16.5±4.8)d](P<0.05)。另外,腹腔镜脓肿切开引流组的并发症发生率和复发率均为0,明显低于穿刺置管引流组(28.3%和15.2%)及剖腹脓肿切开引流组(32.6%和4.7%)(P<0.01),同时该组手术死亡率为0,低于穿刺置管引流组(4.3%)及剖腹脓肿切开引流组(7.0%),但差异无统计学意义。结论腹腔镜脓肿切开引流是治疗肝脓肿的有效外科方法之一。

不同转运方式对主动脉夹层患者院内转运安全性的影响

目的探讨不同转运方式对主动脉夹层(aortic dissection,AD)患者院内转运安全性的影响。方法回顾性分析2006年2月至2011年10月温州医学院附属第一医院急诊科转送至手术室、病房或检查室的96例主动脉夹层患者的临床资料。其中2006年2月至2009年2月采取传统转运方式47例,设为对照组;2009年3月至2011年10月采取改进转运方式49例,设为观察组。比较两组患者转运过程中疼痛加剧、心率、血压、血氧饱和度以及不良事件发生率。结果观察组患者转运过程中疼痛加剧者较少,且其心率、血压改变较小,血氧饱和度<95%者较少,不良事件总发生率较低,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论改进转运方式有助于提高主动脉夹层患者在院内转运的安全性。

特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化

目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283～672、760～1 061、771～1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。

肠出血性大肠杆菌O157:H7外膜蛋白A敲除菌株的构建及其黏附作用研究

目的利用Red同源重组技术构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7外膜蛋白A(ompA)基因敲除菌株,研究敲除菌株的黏附能力变化,阐明OmpA在细菌黏附以及致病中的作用。方法利用Red同源重组技术对EHEC O157∶H7 ompA基因进行敲除,同时构建EHEC O157:H7 ompA回复突变菌株,最后通过细胞试验对EHEC O157∶H7野生型菌株、敲除菌株及回复突变菌株的黏附能力进行比较。结果成功构建了EHEC O157:H7 ompA基因敲除菌株及其回复突变菌株。细胞试验结果表明,与野生型菌株相比,敲除菌株的黏附能力明显下降,而将ompA基因进行回复突变后其黏附能力又得到回复。结论 OmpA在EHEC O157∶H7黏附HeLa细胞过程中发挥重要作用,ompA基因敲除菌株的获得为进一步研究其功能提供了帮助。

类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位。结果从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×10~3的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1∶1 280 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应。亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质。结论重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质。

3种方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定

目的用3种检测方法对同源性较高的鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,比较该3种检测方法的鉴定效果。方法分别利用基于MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法、双重荧光定量PCR方法和16S rRNA基因序列分析方法对5株鼻疽伯克霍尔德菌和5株类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,综合判断鉴定结果,并与传统的形态学和生化鉴定结果比较,寻找更适合于该两种菌的鉴定方法。结果在10株受试菌株中,2株排除是鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的可能,剩余8株之中,MALDI-TOF-MS方法正确鉴定了6株,双重荧光定量PCR方法正确鉴定了8株,16S rRNA基因序列分析方法正确鉴定4株。结论 MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法和双重荧光定量PCR方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌具有很好的鉴定能力,16S rRNA基因序列分析方法不适合用于该2种菌的鉴定。

APACHEⅡ评分对结肠穿孔手术风险的评估

自发性结肠穿孔（又称为特发性结肠破裂）是指肠管在无任何明显病理改变，无外伤所致的突发破裂。好发于老年人、肥胖、高血压等患者，病因不明，临床诊断困难，极易误诊，且约半数患者死于严重的腹腔感染和多脏器功能衰竭。近年来国内外作者尝试一些生理学和健康评估方法，判断危重病人重症度和预后，以指导抢救和治疗，但对结肠穿孔患者的评估报道较少。因此，笔者应用急性生理学和慢性健康状况评分Ⅱ（A-PACHEⅡ），对本院收治的61例结肠穿孔病例进行临床病情评估和预测，探讨其对结肠穿孔手术风险的预警应用。

类鼻疽杆菌毒素分子BLF1的重组表达及生物学活性

目的重组、表达类鼻疽杆菌毒素BLF1并研究其生物学活性。方法运用DNA重组技术,以p GEX为表达系统在大肠杆菌中表达BLF1蛋白;以纯化重组蛋白r BLF1免疫新西兰大白兔,获得抗r BLF1血清,Western blot及ELISA鉴定抗血清;不同浓度r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,观察小鼠生存率;A549细胞模型中,通过CCK-8实验研究目的蛋白的细胞毒性效应及抗体阻断作用。结果从类鼻疽杆菌基因组DNA中PCR得到了BLF1目的基因,连接到p GEX-6p-2质粒,经双酶切及测序表明重组质粒构建成功。GST-BLF1蛋白经诱导表达、酶切纯化得到了相对分子质量为23×103的高纯度r BLF1,免疫家兔抗血清ELISA效价达1∶1 280 000,Western blot鉴定在目的蛋白位置处出现特异印记条带。重组r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,小鼠死亡率与蛋白剂量呈正相关。r BLF1蛋白能明显杀伤A549细胞,抗体可有效阻断其杀伤作用。结论成功重组表达了具有生物活性的r BLF1,该蛋白具有明显杀伤A549肿瘤细胞的作用,同时能够导致小鼠死亡但表现出一定耐受性。

开腹胆道术后再次腹腔镜胆道探查8例分析

开腹胆道术后的腹腔粘连和胆总管的寻找，往往给再次手术带来一定难度，以往认为是腹腔镜手术的禁忌证。我院自2005年以来共开展有开腹胆道手术病史的再次腹腔镜胆道探查术8例，治疗效果满意，现报告如下。