2006年广东省病毒性肝炎监测结果分析

[目的]分析广东省2006年病毒性肝炎监测结果,为评价预防控制效果和制订防控措施提供依据。[方法]对肝炎疫情、儿童乙肝疫苗接种率、乙肝专项检测与肝炎分型等进行监测和分析。[结果]与2005年对比,病毒性肝炎总报告发病率下降10.1%,甲肝、乙肝和未分型肝炎的报告发病率和死亡率均下降,丙肝和戊肝上升。儿童乙肝疫苗全程接种率98.3%,首针及时率86.2%。3岁以下HBsAg携带率1.4%,免疫成功率94.7%。病毒性肝炎仍以乙肝为主,HBsAg阳性率98.9%。乙肝病例监测以慢性为主。[结论]广东省病毒性肝炎防制效果较好,监测网络已较完善,但上报及时率、标本采集率及分型诊断能力仍需进一步提高。

2006年广东省部分检测乙型肝炎标志物ELISA试剂的质量评估

目的对广东省部分乙型肝炎(乙肝)标志物ELISA检测试剂的质量进行评估并分析评估结果。方法对9种不同的乙肝标志物ELISA检测试剂,用中国药品生物制品检定所提供的国家参考品,按照试剂使用说明书,根据2000年版《中国药品生物制品规程》进行检测和结果判定,并通过灵敏度、特异性和精密性等指标对试剂进行评估。结果9种试剂的乙肝标志物5项检测结果均有不合格项,HBsAg检测试剂达标率最高,相对质量较好。在9种乙肝标志物ELISA试剂中,A试剂4项合格,C和F试剂3项合格,其余试剂的合格项均不超过2项。在5个检测项目中,HBsAg有6种试剂合格,HBeAg有4种试剂合格,HBeAb有3种试剂合格,HBsAb和HBcAb只有2种试剂合格。结论国产乙肝标志物ELISA检测试剂的质量有待进一步提高。

广东省SARS病例血清学调查与分析

目的 分析广东省严重急性呼吸综合征 (SARS)病例SARS CoV抗体检出情况。方法 分别对 2 92份广东省SARS临床确诊病例、39份疑似病例和 30 3份健康体检人员 (一般人群 )血清标本 ,采用酶联免疫方法进行SARS冠状病毒IgG抗体检测。结果 SARS临床确诊病例的SARS CoVIgG抗体阳性率为 5 8 90 % (1 72 / 2 92 ) ,高于疑似病例及一般人群抗体阳性率 (分别为 1 8 0 0 %、2 31 % )(P <0 0 1 )。分析 2 92份临床确诊病例血清标本 ,结果显示有明确接触史者抗体阳性率 (72 6 7% )高于无明确接触史者 (4 1 98% ) (P <0 0 1 )。不同性别抗体阳性率差异无显著性 ,不同年龄组抗体阳性率差异有显著性 ,4 0～ 5 9岁年龄组最高 (P <0 0 1 )。流行早期病例抗体阳性率 (6 7 4 3% )高于后期(31 94 % )。SARS冠状病毒IgG抗体在发病 1 0d后能较可靠检出且能维持较长时间。结论 SARS冠状病毒IgG抗体检测结果与临床诊断存在一定差异 ,IgG抗体检测是有效的辅助诊断手段 ,但不能用于早期诊断。实验室血清学检测结果进一步证明接触史是SARS病例诊断的重要依据之一。

牡蛎中诺如病毒核酸两种提取方法比较

目的寻找简便有效的更适合长期监测的牡蛎中诺如病毒核酸提取的方法。方法通过甘氨酸聚乙二醇富集后硅胶膜离心柱法(方法A)和蛋白酶K生物消化后顺磁性硅胶基法(方法B)两种核酸提取方法,采用实时RT-PCR检测自然状态的牡蛎和人工染毒状态的牡蛎来进行比较。结果两种方法的阳性检出率没有差异,总体比较方法B的病毒回收率高。结论方法B优于方法A,且方法B更快捷,故方法B更适合长期监测。

人禽流感H_5N_1毒株NS基因特征和进化

目的:通过对人禽流感H5N1毒株NS基因序列的变异分析,揭示毒株NS基因特征与进化。方法:检测广东地区人禽流感H5N1毒株NS基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株NS基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株NS基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果:根据对NS1基因和NS2基因核苷酸序列进行同源性比较,发现分成两个系列:1997～1998年人禽流感毒株为一个系列(G1),2003～2006年毒株为另一个系列(G2);其中,2003～2006年毒株NS1基因和NS2基因中,2004～2006年越南、泰国毒株为第1亚组(G2a),2005～2006年印尼毒株为第2亚组(G2b),2006年中国大陆毒株和2003年香港毒株为第3亚组(G2c)、2006年中西亚、北非毒株为第4亚组(G2d)。NS1基因74个氨基酸位点置换,占32.2%(74/230);其中,中国大陆2006年2株毒株(ZJ-16-06、GD-01-06)的NS1基因有3个位点有改变:A086T、F201Y和P215L。NS2基因共有31个氨基酸发生置换,置换率为25.6%(31/121);中国大陆2006年2株毒株(ZJ-16-06、GD-01-06)的NS1基因有3个位点有改变,包括E/K036G、S044T和L058F。NS1基因Ks值为10.1×10-6～33.4×10-6Nt/d,Ka值为11.6×10-6～17.6×10-6Nt/d;显示NS1基因受到机体免疫压力较大,检验发现基因进化存在明显选择性压力存在,而GD-01-06的NS1基因受到选择性压力较小;与NS1基因比较,NS2基因的同义突变和错义突变速度均降低,但尤以错义突变速度降低明显(Ks值为15.5×10-6～25.5×10-6Nt/d,Ka值为7.39×10-6～10.1×10-6Nt/d)。2003～2006年毒株NS1基因丢失第80～84位氨基酸序列(TIASV),引起氨基酸结构改变;而糖基化位点未改变。结论:目前NS1基因和NS2基因进化分成两组;NS1基因除自发置换进化较快外,受到明显机体免疫机制压力,第80～84位氨基酸TIASV丢失可能对致病性发生影响。2006年中国大陆毒株NS1基因和NS2基因均有3个氨基酸与其它毒株有别,显示中国大陆人禽流感H5N1毒株NS基因正在向另一方向进化。人禽流感H5N1毒株NS基因在自然界变异非常频繁,不断变异将影响H5N1毒株在人-人传播能力和引发大流行。

广东人禽流感H5N1毒株M基因特性、进化和变异

通过对人禽流感H5N1毒株M基因序列的变异分析，揭示毒株M基因特征与进化。检测广东地区人禽流感H5N1毒株M基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株M基因序列，采用DNAStar5．0软件对检索的人禽流感H5N1毒株M基因核苷酸序列进行比对和分析；并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果发现，1997-2006年53株毒株M1基因和51株毒株M2核苷酸序列同源性均分成两组，1997年毒株为第一组（GⅠ），2003-2006年香港、越南、泰国、印尼、中国大陆、土耳其、伊拉克、阿塞拜疆、埃及毒株为第二组（GⅡ）。M1基因20个氨基酸位点置换，占7．94％（20／252），其中2003-2006年毒株M1基因有9个氨基酸位点不同于1997年毒株；M2基因22个氨基酸置换，占22．7％，其中2003-2006年毒株M2基因有4个氨基酸不同于1997年毒株。M2基因Ks值为26．8×10^-6～42．6×10^-6Nt／d，Ka值为4．39×10^-6～6．98×10^-6Nt／d；而M1基因的同义突变速度均远高于错义突变速度，显示M1基因受到机体免疫压力较小；检验发现M1基因进化存在负选择性压力。2003-2006年毒株M1基因通过氨基酸S224N置换，增加一个糖基化位点NSS224-226；而来自印尼的8株毒株M2基因发生C50F置换，引起蛋白二级结构改变。1997年中国香港人禽流感毒株自当时出现后，便未在以后人禽流感疫情中出现。2003-2006年毒株M1基因增加糖基化位点NSS224-226，可能与毒株致病性有关。人禽流感H5N1毒株M基因在自然界变异频繁，可能影响H5N1毒株的人-人传播能力。

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的 对不同人群进行SARS IgG抗体水平检测 ,分析SARS流行规模和特征 ,评价暴露的危险性 ,了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染 ,为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法 抽取 770 8份不同人群标本 ,按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员 4类 ,采用酶联免疫方法 (ELISA)进行SARS IgG抗体检测 ,用免疫荧光法 (IFA)复核 ,并结合流行病学资料进行分析。 结果 12 7例临床确诊SARS病人抗体阳性率为 6 6 9% ;密切接触者中女性发病率高于男性 ;SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为 0 88% ;动物销售人员为 13 4 % ;野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者 ,普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为 2 0 6 % ,高于总体水平。结论 人群总体抗体水平很低 ,普通健康人群无SARS冠状病毒抗体 ,但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体 ;有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素 ;密切接触者可能存在隐性感染 ;

人禽流感H_5N_1毒株PB1基因突变分析

目的通过对人禽流感H5N1毒株PB1基因序列的变异分析，揭示毒株PB1基因的特征与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB1基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB1基因序列，采用DNAStarLa-sergene软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB1基因核苷酸序列进行比对和分析，并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果将50株毒株PB1基因核苷酸序列按同源性分成两组：1997-1998年毒株为第1组（G1），2003-2006年毒株为第2组（G2）。PB1基因74个氨基酸发生位点置换，占9．78％（74/757）。PB1基因Ks值为26．1×10^-6～39．8×10～Nt/d，Ka值为3．91×10^-6～5．59×10^-6～Nt/d，检验结果显示，基因进化受到负选择性压力。2003-2006年毒株（G2）丢失G757，引起氨基酸结构改变；同时糖基化位点也较1997-1998年毒株减少了1个糖基化位点NES382-384。结论目前PB1基因进化分成两组，自发突变作用影响PB1基因进化；PB1基因与PB2基因的进化途径在时间特征和区域特征方面类似。2003-2006年毒株PB1基因氨基酸结构和糖基化位点均有改变。

SARS-CoV毒株E、M、N和S基因分子变异研究

目的通过对SARS-CoV毒株基因序列的变异分析,揭示SARS-CoV毒株出现和流行与基因进化的关系。方法对广东地区SARS-CoV毒株进行序列分析,其余毒株序列从GenBank检索,采用DNAstar5.0软件,对检索的SARS-CoV的E、M、N、S基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合临床资料对变异毒株进行流行病学分析。结果以果子狸冠状病毒(SZ-3)为基准,102株人类毒株中,6株毒株E基因的4个氨基酸发生置换,两株毒株发生缺失变异;果子狸毒株M基因的第5位丝氨酸置换为人类毒株甘氨酸并减少1个糖蛋白位点,此外M基因有38株毒株发生8个氨基酸置换变异;6株毒株N基因发生氨基酸置换,3株毒株发生缺失变异;人类毒株S基因中9个氨基酸全部发生变异并增加1个糖蛋白位点,与果子狸毒株不同比例占0.72%(9/1255);部分毒株中S基因的27个氨基酸在发生置换变异,7株毒株发生缺失变异。结论冠状病毒S基因中9个氨基酸置换和1个糖蛋白位点影响,可能导致人类SARS-CoV毒株出现和SARS流行;SARS流行持续和传播扩大与S基因进化变异相一致。所以认为,SARS-CoV毒株S基因变异可能在SARS出现和流行中发挥极其重要的作用。

应用Taq Man荧光定量RT-PCR快速检测肠道病毒的研究

目的建立一种快速、灵敏、特异的荧光定量RT-PCR检测肠道病毒的方法。方法根据GenBank中肠道病毒5′UTR序列,应用生物软件在保守区设计与筛选特异引物和TaqMan探针,对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性和重复性。并通过对急性临床样本的检测,评价该方法的实际应用价值。结果该方法对肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型及柯萨奇病毒和埃可病毒等的检测有高度特异性,甲肝病毒、乙脑病毒、登革病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒、诺如病毒等均呈阴性。该方法的检测下限达10-1TCID50/100μl。12份急性结膜炎病例结膜拭子标本中7份肠道病毒核酸阳性,普通RT-PCR方法5份阳性。结论TaqMan荧光定量RT-PCR方法快速、敏感、特异,适于肠道病毒的快速检测。

贝类海产品中诺如病毒快速检测方法研究

目的:寻找和建立贝类产品中诺如病毒的敏感特异的快速检测方法。方法:通过对报道的3种贝类中病毒提取方法的提取效率进行比较,确定最终的提取方法。设计特异性和敏感性相对较高的套式PCR方法进行病毒检测,检测结果经核酸序列测定证实。结果:3种方法中用PBS-三氯三氟乙烷-PEG处理回收率较高。设计的套式PCR方法可成功检测到病毒,其敏感性可比单轮PCR高100倍。结论:该研究建立了敏感特异的诺如病毒检测方法。

广东人H_5N_1毒株PB2基因进化和特性

目的:通过对人禽流感H5N1毒株PB2基因序列的因H变异分析,揭示毒株PB2基因特征与进化.方法:检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB2基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析.结果:1997/200648株毒株PB2基因核苷酸序列同源性分成两组,1997/1998毒株为第一组(G1),2003/2006毒株为第二组(G2).PB2基因错义置换导致101个氨基酸位点变异,占比例13.3%(101/759).PB2基因Ks值为39.4×10-6～63.4×10-6Nt/d,Ka值为3.36×10-6～5.11×10-6Nt/d;提示PB2基因进化主要受到自发突变影响.2003/2006毒株(包括毒株GD-01-06)仅保留一个糖基化位点(NPT301-303),丢失3个糖基化位点,可能影响蛋白致病性和抗原性.结论:目前PB2基因进化分成两组,主要受到除自发突变影响;PB2基因丢失3个糖基化位点可能影响蛋白致病性.人禽流感H5N1毒株PB2基因在自然界变异非常频繁,不断变异将影响H5N1毒株在人-人传播能力和引发大流行.

国家卫生城市的残存鼠生态特征及其防制对策

目的 :探索灭鼠先进城市残存鼠生态现状及其防制对策。方法 :选择城区内不同类型环境 ,采用粘鼠胶捕鼠 ,进行鼠种鉴别。结果 :试验区内仍以褐家鼠为优势鼠种。一般单位鼠类的多样性和均匀度较高 ,种群生态位宽度以褐家鼠最大 ,为 0 .939。种群生态位重叠值以褐家鼠与小家鼠、褐家鼠与黄胸鼠之间较高。结论 :针对残存鼠的生态特征 ,采用以防鼠设施为主的综合防制技术 。

一起急性上呼吸道病毒感染暴发流行的病原学分析

目的探讨2006年2月下旬汕头市某小学暴发的一起急性上呼吸道病毒感染的病原学。方法采集患者急性期咽拭子标本进行腺病毒、B型流感病毒和呼吸道合胞病毒的核酸检测,对PCR结果进行序列测定和分析;咽拭子标本用Hep-2细胞进行病毒分离;用患者双份血清进行腺病毒中和实验和B型流感病毒的血凝抑制试验。结果35份患者的咽拭子标本中用PCR扩增同时检测到了12份腺病毒(阳性率为34.3%)和15份B型流感病毒(阳性率为42.9%),呼吸道合胞病毒核酸检测阴性。序列分析表明腺病毒与江苏省2005年分离的毒株以及广东省2005年分离的3型腺病毒毒株的相似性高达98%,而B型流感病毒与孟斐斯分离到的B型流感病毒同源性高达99%。咽拭子标本用Hep-2细胞未分离到腺病毒和B型流感病毒。病人双份血清的腺病毒中和试验显示抗体没有4倍增长,但腺病毒阳性者晚期血清抗体几何平均值为12.1,腺病毒阴性者即为1.4。而B型流感病毒双份血清血凝抑制试验表明恢复期抗体比较急性期抗体有4倍或以上增长。结论该次急性上呼吸道感染是由B型流感病毒引起的,但可能先前感染过腺病毒。

不同温度对SARS冠状病毒抗原性灭活效果的研究

目的 探讨用温度灭活的SARS冠状病毒作为免疫用抗原的可行性。方法 采用细胞培养、酶联免疫吸附试验 (ELISA)对灭活前后SARS冠状病毒感染性和抗原性进行检测。结果 5 6℃、30min对SARS冠状病毒感染性的灭活率为 99 99% ;5 6℃、6 0min对SARS冠状病毒感染性的灭活率为 1 0 0 .0 0 % ;检测病毒灭活前、灭活 30min、灭活 6 0min抗原性P/N值分别为 5 4 4、3 0 2、2 72。结论 随着灭活时间的延长 ,病毒的抗原性降低 ,5 6℃、6

传染性非典型肺炎病人接触者抗体调查分析

目的 分析传染性非典型肺炎 (SARS)病人接触者抗体水平。方法 抽取参与救治SARS病人的医护人员血清标本 90 7份 ,病人亲友的标本 6 6份 ;另取 387份普通人血清作为对照。采用酶联免疫方法进行SARS IgG抗体检测 ,并调查了病人基本资料。结果 在被检测的 1 36 0份标本中 ,33份为阳性 ,其中医护人员接触者抗体阳性率为2 2 1 % (2 0 / 90 7) ,病人亲友抗体阳性率为 7 5 8% (5 / 6 6 ) ,普通人的阳性率为 2 0 7% (8/ 387) ,病人亲友抗体阳性率较其他人群高 (P <0 0 5 )。结论 SARS可能存在隐性感染 。

2006年人禽流感H5N1毒株PA基因特性、变异和进化

目的通过对人禽流感H5N1毒株PA基因序列的变异分析,揭示毒株PA基因特征、变异与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PA基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PA基因序列,采用MEGA4.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PA基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果PA蛋白呈酸性,等电点pH5.4。1997-2006年52株毒株PA基因核苷酸序列同源性分成两组,1997年毒株为第一组(G1),2003-2006年香港、越南、泰国、印尼、中国大陆毒株、土耳其、伊拉克、阿塞拜疆、埃及毒株为第二组(G2)。PA基因114个氨基酸位点置换,占15.9(114/716),其中2003-2006年毒株PA基因有17个氨基酸位点不同于1997年毒株。PA基因Ks值为30.9×10-6～46.1×10-6Nt/d,Ka值为4.50×10-6～8.13×10-6Nt/d;而PA基因的同义突变速度是错义突变速度的5.7～6.9倍,显示PA基因受到机体免疫压力较小;检验发现PA基因进化存在负选择性压力。PA基因中潜在的7个糖基化位点基本稳定,毒株IDNS-569H-06的PA基因半胱氨酸发生置换(S224C)。结论PA基因进化分成两系列,PA基因进化特点是自发突变较快,而受到机体免疫机制压力较小;A基因与其它多聚酶基因(PB2和PB1)比较,核苷酸序列同源性和进化在时间特征和地区特征方面具有一致性;来自中国大陆的毒株进化值得关注。人禽流感H5N1毒株PA基因在自然界变异频繁,可能影响HN毒株致病性和在人-人传播能力。