DJ-1下调PTEN诱导AR表达促进非激素依赖性乳腺癌转移的研究

目的探讨癌症和帕金森病相关蛋白DJ-1(parkinson disease protein 7,oncogene DJ-1,DJ-1)下调磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)诱导雄激素受体(androgen receptor,AR)表达促进非激素依赖性乳腺癌转移的机制。方法构建人绿色荧光蛋白表达载体pEGFP/DJ-1;Western blotting对比分析过表达DJ-1基因后MDA-MB-231细胞DJ-1、PTEN、雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达;体外迁移与侵袭实验检测过表达DJ-1基因后对MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭的影响。收集转移的非激素依赖性乳腺癌和未出现转移的非激素依赖性乳腺癌手术切除标本各40例,采用免疫组织化学检测DJ-1蛋白的表达。结果 Western blotting发现经过转染人DJ-1基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP/DJ-1后,MDA-MB-231细胞DJ-1的表达水平升高,PTEN的表达水平下降,AR水平升高。体外迁移与侵袭实验发现,转染pEGFP/DJ-1促进SWO-38细胞的迁移和侵袭,与转染空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。发生转移非激素依赖性乳腺癌组织中DJ-1阳性表达率(85.0%)明显高于未发生转移乳腺癌组织(55.0%)(P<0.05)。结论 DJ-1能促进非激素依赖性乳腺癌的迁移与侵袭。这可能与DJ-1抑制PTEN表达,提高AR水平从而促进肿瘤细胞的迁移侵袭能力有关。

EGCG通过下调COX-2和MMP-2表达抑制人脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)下调COX-2及MMP-2的表达、抑制人脑胶质瘤细胞迁移及侵袭的作用机制。方法:MTT法检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的活性,确定药物作用浓度;细胞侵袭与迁移实验检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的迁移与侵袭能力;Western blotting对比分析EGCG处理24h后SWO-38细胞COX-2和MMP-2的表达。通过肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进COX-2的表达,观察EGCG是否通过COX-2/MMP-2通路抑制肿瘤的迁移侵袭。结果:细胞侵袭与迁移实验发现,EGCG对SWO-38细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用,与对照组SWO-38细胞相比较,有显著差异(P<0.01)。Western blotting发现经过EGCG处理24h后,SWO-38细胞COX-2和MMP-2蛋白的表达水平降低,提示EGCG抑制SWO-38迁移的机制可能与该药物抑制COX-2的表达而降低SWO-38细胞酶解细胞外基质的能力相关。结论:EGCG抑制了人脑胶质瘤SWO-38细胞的迁移与侵袭,其机制与EGCG抑制COX-2表达后,调节了MMP-2诱导的酶解细胞外基质的能力相关。

Stat3、CyclinD1及Bcl-2在食管鳞癌组织芯片中的表达及意义

目的:检测食管鳞癌组织芯片中stat3、cyclinD1和bcl-2的表达,探讨它们在食管鳞癌发生发展中的作用,为食管鳞癌的早期诊断提供有意义标志物。方法:利用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测食管鳞癌及癌旁组织中stat3、cyclinD1及bcl-2的表达情况,并分析与各临床病理参数之间的关系。结果:食管鳞癌中stat3、cyclinD1和bcl-2的表达阳性率分别为92.2%、79.7%和65.1%,均显著高于癌旁正常鳞状上皮(P<0.05)。stat3、cyclinD1和bcl-2的表达阳性率与食管鳞癌的组织学分级有关(P<0.05),而与年龄、性别、发生部位及大体分型无关(P>0.05);食管鳞癌中stat3与cyclinD1、bcl-2的表达呈明显正相关(分别P=0.035和P=0.012)。结论:stat3在食管鳞癌中的高表达及与cyclinD1、bcl-2的相关性表明stat3信号转导通路可能在食管鳞癌的发生发展中起重要的作用。

骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞影响博莱霉素诱导肺纤维化的比较

背景:有报道指出,骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞在多种疾病中被证明有疗效,骨髓间充质样干细胞在肺纤维化模型中也有应用。目的:比较骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞对博莱霉素A5所致大鼠肺泡炎和早期纤维化的治疗作用。方法:收集Wistar雄性幼鼠的骨髓间充质样干细胞、骨髓单个核细胞并分别进行DAPI标记。21只Wistar雌性大鼠气管内注入博莱霉素A5制作肺损伤模型,随机均分为骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组和模型组。造模后第7天处死大鼠,取肺组织病理切片观察炎症和纤维化情况;荧光显微镜下检测DAPI标记细胞;ELISA法检测肺组织匀浆羟脯氨酸和肿瘤坏死因子的含量。结果与结论:①在骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组肺组织冰冻切片中均见到DAPI标记的外源细胞。②模型组肺泡炎最严重,骨髓间充质样干细胞治疗组肺泡炎最轻,各组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。③模型组肺组织匀浆中羟脯氨酸和肿瘤坏死因子α含量最多,骨髓间充质样干细胞治疗最少,各组比较差异有显著性意义(P<0.05)。提示骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞均可定植于损伤肺组织,并能有效阻止博莱霉素A5诱导的大鼠肺泡炎和早期纤维化,前者作用更为显著。

Nestin差异表达对脑胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的:探讨nestin差异表达对脑胶质瘤细胞迁移与侵袭能力的影响。方法:Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力;细胞免疫荧光观察细胞nestin的表达;Western blotting对比分析细胞nestin和MMP-2的表达。结果:SWO-38细胞的迁移能力大大低于U251细胞,差异显著(P<0.05),而两者侵袭能力无明显差别。细胞免疫荧光结果显示,SWO-38细胞的nestin均匀分布在细胞浆,呈丝状着色;而U251细胞的nestin强表达于核周,并向胞浆放射状分布。Western blotting结果显示两株细胞nestin的分子量存在差异。而SWO-38细胞的MMP-2表达水平则高于U251细胞,显示SWO-38细胞有更强的酶解细胞外基质的能力。结论:脑胶质瘤细胞的迁移能力与nestin的差异表达存在相关性,而侵袭能力与MMP-2相关。迁移能力与酶解细胞外基质能力的结合决定了肿瘤的侵袭能力。

胶质瘤耐药细胞系中11种ABC转运子的表达

目的:在胶质瘤的治疗中,亚硝基脲类药物如卡氮芥是常用的化疗药物。但由于耐药性的产生,患者预后通常不良。在耐药机制的研究中,ABC转运子家族因其具有将药物泵出细胞外的特性而备受关注。本研究旨在探讨胶质瘤细胞中卡氮芥耐药与11种ABC转运子的关系。方法:以SWOZ2细胞作为卡氮芥敏感的细胞系,以卡氮芥耐药的SWOZ1细胞作为原发性耐药细胞系,同时诱导出卡氮芥耐药的SWOZ2细胞系作为获得性耐药细胞系,通过CCK-8法测定细胞的生长曲线及卡氮芥对各细胞系的IC50和耐药指数,同时通过荧光定量PCR法检测耐药细胞与敏感细胞中11种ABC转运子mRNA表达的差异。结果:CCK-8法结果表明,与SWOZ2细胞相比,SWOZ1对卡氮芥的耐药性是SWOZ2的4.7倍,SWOZ2的卡氮芥耐药细胞系(命名为SWOZ2/B)对卡氯芥的耐药性是SWOZ2的6.5倍。采用相对定量的荧光定量PCR法检测1 1种ABC转运子在各细胞系中的表达,结果表明只有ABCG1在2株耐药细胞系中均表达上调,分别在SWOZ1中上调了4.1倍、在SWOZ2/B中上调了4.4倍。结论:ABCG1在脑胶质瘤细胞卡氯芥耐药中可能发挥重要作用。

Nestin在CDA-2诱导人胶质瘤细胞分化中的变化

目的:研究nestin(巢蛋白)在人尿萃取物细胞分化剂CDA-2(又名尿多酸肽)诱导SWO-38人胶质瘤细胞分化中表达的变化及其意义。方法:采用光镜观察和鉴定CDA-2对SWO-38细胞的分化作用;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blotting分析CDA-2诱导前后SWO-38细胞nestin表达的变化。结果:光镜观察发现经CDA-2诱导后SWO-38细胞胞体变大、核浆比减小、突起增多,表现出向成熟的星形细胞分化的现象;Nestin表达在细胞浆,呈丝状着色;Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调。结论:Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调,进一步验证nestin与细胞分化的关系,nestin有可能成为胶质瘤诱导分化治疗领域新的标志物。

川芎嗪注射液对离体豚鼠气管平滑肌作用机制探讨

目的 :研究川芎嗪对离体豚鼠气管平滑肌的作用及机制。方法 :取豚鼠气管制成气管片 ,用体外实验方法分别记录川芎嗪对豚鼠气管平滑肌的作用以及在钙通道和不同受体阻断剂孵育的条件下对豚鼠气管平滑肌的作用的变化。结果 :川芎嗪对离体豚鼠气管平滑肌有明显的舒张作用 (P <0 .0 1) ,呈剂量依赖性 (10 -5.5～ 10 -3 mol·L-1) ,其作用可以被普萘洛尔 (心得安 )所拮抗 ;其与硝苯地平有协同舒张气管平滑肌的作用 ;M受体阻滞剂阿托品对川芎嗪的作用无明显影响。结论 :川芎嗪对离体豚鼠气管平滑肌有明显的舒张作用 ,其机制很可能是通过作用于气管平滑肌上的 β2 受体 ,抑制细胞外Ca2 +的内流而导致气管平滑肌的舒张。

siRNA介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siRNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组(转染eIF3b-siRNA组)。应用qRT-PCR和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白表达水平;运用Matrigel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组(1.09±0.19)、II组(1.05±0.17)相比,III组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P<0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P<0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。

沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法合成eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA),转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:Con-trol组(空白对照组)、Scramble组(转染非特异性对照组)和eIF3b-siRNA组(转染eIF3b-siRNA组).转染实验过程严格按操作说明书进行转染,其中eIF3b-siRNA组加入20 nmol/L转染eIF3b-siRNA,而Scramble组加入20 nmol/L Scramble RNA,Control组不作任何处理,转染24 h后收集细胞.应用qRT-PCR和Western blot免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白以及钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平;CCK-8法检测转染前后细胞增殖抑制率;运用Matri-gel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测转染前后MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化.结果RT-PCR结果显示eIF3b-siRNA组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于Control组(1.08±0.18)和Scramble组(1.12±0.16),差异有统计学意义(P<0.05).Western印迹法结果显示:与Control组(1.09±0.19)、Scram-ble组(1.05±0.17)相比,eIF3b-siRNA组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).在不同培养时间点上比较,eIF3b-siRNA组细胞增殖抑制率均明显高于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05).细胞迁移和侵袭实验中,eIF3b-siRNA组迁移和侵袭的细胞数均明显少于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05),而Control组与Scramble组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05).与Control组和Scramble组比较,eIF3b-siRNA组vimentin(0.26±0.02)、MMP-2(0.23±0.02)和MMP-9(0.46±0.03)表达水平明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05),而E-cadherin(1.32±0.19)表达水平明显增强.结论下调eIF3b表达可有效地减弱乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力,可能与阻碍乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程和促进MMP-2和MMP-9的分泌有关.

慢病毒介导eIF3b-shRNA对裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤的抑制作用

目的:探讨慢病毒介导eIF3b-shRNA对裸鼠乳腺癌移植瘤生长、增殖及转移的影响。方法:利用慢病毒介导eIF3b-shRNA转染MCF-7乳腺癌细胞,建立裸鼠乳腺癌模型,裸鼠分成三组,每组5只:I组(接种转染eIF3b-shRNA的MCF-7乳腺癌细胞)、Ⅱ组(接种转染空载体的MCF-7乳腺癌细胞)和Ⅲ组(接种正常MCF-7乳腺癌细胞)。观察制瘤成功后裸鼠肿瘤体积生长、HE染色镜下观察移植瘤组织和肺组织,并应用实时荧光定量PCR法检测eIF3b mRNA表达,Western blot印迹法检测eIF3b、增殖标记蛋白Ki-67及迁移标记蛋白MMP-9的表达。结果:三组裸鼠成瘤后,不同时间点对三组裸鼠进行观察,Ⅰ组肿瘤体积均明显小于Ⅱ组与Ⅲ组(P<0.05),而Ⅱ组与Ⅲ组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR法检测结果显示:I组裸鼠移植瘤组织中eIF3b mRNA相对表达量明显下降,明显低于Ⅱ组和Ⅲ组,差异具有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组之间eIF3b mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot印迹法检测结果显示:Ⅰ组裸鼠移植瘤组织中eIF3b、增殖标记蛋白Ki-67和迁移标记蛋白MMP-9相对表达量较Ⅱ组和Ⅲ组显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组之间各蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。解剖三组裸鼠,大体肉眼观察发现Ⅱ组和Ⅲ组的肺组织切开可见多灶灰白小结节,而Ⅰ组裸鼠肺组织中未找到明显结节。镜下观察发现,Ⅱ组和Ⅲ组裸鼠肺泡组织中灰白小结节为腺管样异型细胞呈结节样生长,而Ⅰ组镜下见肺泡组织结构正常,未找到转移灶。结论:慢病毒介导下调eIF3b表达对乳腺癌细胞在裸鼠体内的移植瘤生长、增殖及肺转移有明显抑制作用。

真核起始因子3b在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨真核起始因子3b(eIF3b)在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系。方法取45例乳腺癌患者的乳腺癌组织和相应的癌旁组织,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织eIF3b mRNA的相对表达量,采用免疫组化二步法检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织e IF3b蛋白的阳性表达率,分析e IF3b mRNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率与乳腺癌患者临床特征的关系。结果乳腺癌组织中eIF3b m RNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率,均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同年龄、病理类型、肿瘤直径、组织学分级乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和e IF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同腋窝淋巴结转移情况、TNM分期乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和eIF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 eIF3b表达增高不仅可能参与了乳腺癌发生过程,也可能在乳腺癌的增殖、转移和侵袭过程中发挥促进作用。

巢蛋白和缺氧诱导因子-1α在人脑胶质瘤组织的表达及作用

目的探讨巢蛋白(nestin)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人脑胶质瘤组织中的表达及其在胶质瘤血管生成中所起的作用。方法应用免疫组化两步法检测53例不同级别胶质瘤和5例正常胎脑组织中nes-tin和HIF-1α的表达。结果nestin在低级别和高级别胶质瘤的平均光密度值(A)分别为0.2463±0.0602和0.6438±0.0901,差异有显著性(P<0.05);HIF-1α在低级别和高级别胶质瘤的平均光密度值(A)分别为0.1334±0.0298和0.2746±0.0904,差异有显著性(P<0.05)。结论胶质瘤中,nestin在新生微血管内皮细胞和HIF-1α在肿瘤细胞的表达与胶质瘤的病理分级有关,级别越高表达越强,而且两者呈正相关,提示可将nestin和HIF-1α作为一种判断胶质瘤新生血管增生、恶性程度的参考依据。

三阴性乳腺癌组织DJ-1和PTEN及AR表达与预后相关性分析

目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中帕金森相关蛋白(DJ-1)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)和雄激素受体(AR)的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:免疫组织化学SP法检测DJ-1、PTEN和AR蛋白在68例TNBC组织和30例正常乳腺组织中的表达,并分析其与TNBC临床病理因素的关系,及其对预后的影响。结果:TNBC组织中DJ-1阳性表达率为70.6%(48/68),AR阳性表达率为36.8%(25/68)。正常乳腺组织中DJ-1阳性表达率为6.7%(2/30),无AR表达。TNBC组织中DJ-1、AR阳性表达率明显高于正常乳腺组织,χ2值分别为7.09和6.72,P值分别为0.002和0.005。TNBC组织中PTEN阳性表达率为27.9%(19/68),正常乳腺组织中为100.0%。TNBC组织中PTEN阳性表达率显著低于正常乳腺组织,χ2=5.94,P=0.008。DJ-1、PTEN和AR表达在TNBC组织中的表达与腋窝淋巴结转移、组织学分化和TNM分期密切相关,P<0.01。TNBC组织中DJ-1和AR的表达均与PTEN蛋白的表达呈负相关,r=-0.529,P=0.009;而两者之间呈正相关,r=0.496,P=0.011。在5年无瘤生存率和5年总生存率方面,DJ-1和AR表达阴性者明显高于阳性者,P<0.01;PTEN表达阳性者高于阴性者,P<0.01。Cox回归多因素分析结果表明,腋窝淋巴结转移、DJ-1、PTEN及AR表达是影响TNBC患者5年无瘤生存率的独立预后因素,P<0.05。结论:TNBC组织中DJ-1和AR过表达,而PTEN表达下调,三者均为TNBC患者预后的独立危险因素,参与调控TNBC的发生与预后。

DJ-1基因siRNA对三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移影响的研究

目的:探讨DJ-1基因siRNA对三阴性乳腺癌细胞体外侵袭和迁移能力的影响。方法:设计DJ-1基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入三阴性乳腺癌细胞株MAD-MB-23l,转染分3个组:A组(空白对照control组)、B组(转染非特异性对照Scramble组)、C组(转染si DJ-1组)。应用Western blotting免疫印迹法检测转染前后DJ-1表达水平;运用细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:C组DJ-1蛋白的表达强度弱于A组和B组(t=9.831,P<0.05),而A组与B组比较,DJ-1蛋白表达水平则无明显差异(t=1.629,P>0.05)。细胞迁移实验中,A组细胞为(218.37±12.75);B组的细胞为(214.46±11.38);C组的细胞为(129.65±8.59),C组细胞明显少于A组和B组(t=10.927,9.984,P<0.05),而A组与B组之间,差异无统计学意义(t=0.512,P>0.05)。细胞侵袭实验中,A组细胞为(127.28±12.65);B组的细胞为(123.06±13.08);C组的细胞为(52.85±9.58),C组穿过人工基底膜的细胞明显少于A组和B组(t=7.927,8.643,P<0.05),而A组与B组之间,差异无统计学意义(t=0.627,P>0.05)。结论:DJ-1基因siRNA可抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移。

木霉活孢滴丸剂的最佳制备工艺筛选

[目的]通过正交试验筛选木霉菌孢子滴丸的最佳制备工艺。[方法]以基质类型与其质量比、孢子悬液体积与基质质量比和药液温度为3个分析因素,设计3个不同配比水平的正交试验,以成型效果和生物活性等6项指标为评判标准检验制备效果。[结果]不同组合的制备工艺效果不同。[结论]以PEG2000+PEG4000(质量比1∶1)为基质,药液温度为55℃,冷凝剂温度为0℃,木霉孢子悬液与滴丸成型基质比例为2∶10(mL/g),制备的滴丸在外观成型上具有最好的效果;木霉孢子悬液与滴丸成型基质比例为1∶10(mL/g)时,生物活性达到最优。

人miR-29b过表达慢病毒载体的构建及其对A549细胞迁移的影响

[目的]构建能高效表达人mi R-29b的慢病毒载体,研究其对人肺腺癌A549细胞迁移的影响。[方法]PCR扩增mi R-29b前体序列,克隆入慢病毒表达载体,测序鉴定。包装好的慢病毒感染A549细胞,流式细胞仪分选后用荧光定量PCR检测mi R-29b表达水平,划痕实验观察过表达mi R-29b对A549细胞迁移的影响。[结果]测序结果证明成功构建人mi R-29b过表达慢病毒载体。mi R-29b过表达慢病毒感染效率为88.56%,使A549细胞中mi R-29b表达升高2.78倍。与A549细胞相比,稳定过表达mi R-29b的A549-mi R-29b细胞的迁移能力显著性降低。[结论]成功构建mi R-29b过表达慢病毒载体,过表达mi R-29b可抑制A549细胞的迁移,为进一步研究mi RNA对肿瘤转移的调控作用奠定了基础。

阻遏矽肺纤维化的实验研究

目的比较骨髓间充质样干细胞（BM＋MSCs）与pcDNA3．1肝细胞生长因子（HGF）转染的BM—MSCs对SiO，所致大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的影响并探讨其机制。方法收集培养雄性Wistar幼鼠的原代BM-MSCs，并进行4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记。将50只雄性Wistar大鼠气管滴注40mg／mlSiO2，混悬液1ml造模后，随机分为模型组、BM—MSCs组和pcDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组。造模次日，模型组（10只）：尾静脉注入PBS1ml；BM—MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6／mlBM-MSCs1ml；pcD-NA3．1-HGF＋BM-MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6个／mlpcDNA3．1-HGF转染的BM-MSCslm1。14和28d后，分别处死大鼠，取肺组织冰冻切片，荧光显微镜下检测体内DAPI标记细胞；HE和Masson染色观察肺炮炎和纤维化情况；免疫印迹（Westernblot）法测各组大鼠肺组织的I-IGF表达量；ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子（TNF）．or．的含量，样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量。结果14、28d时，pcDNA3．1-HGF＋BM-MSCs组肺组织肺泡炎评分（14d：1．16±0.3，28d：0.8＋0．20）均低于同时期BM-SCs组（14d：1．68＋0．17，28d：1．58±031）和模型组（14d：2．36＋_0．17，28d：2．80_＋0．14），BM—MSCs组肺泡炎评分均低于同时期模型组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。14、28d时pcDNA3．1-HGF＋BM～MSCs组肺纤维化评分（14d：0．10＋_0．11，28d：1．16＋_0．13）均明显低于同时期BM—MSCs（14d：0．54＋0．15，28d：1．36±0．13）和模型组（14d：0．64＋0．09，28d：1．84＋0．17），差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时pcDNA3．1一HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量[14d：（280．48＋23．11）pg／mg，28d：（249．78_＋22．33）pg／mg]均明显低于BM—MSCs组[14d：（342．58_＋35．34）pg／mg，28d：（319．5l±17．84）pg／mg]~模型组『14d：（442．29±36．76）pg／mg，28d：（348．53＋_33．95）pghngl，BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量低于模型组，差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时peDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量f14d：（O．46＋0．04）~g／mg，28d：（0．65_＋0．05）Ixg／mg】均明显低于同时期BM—MSCs组[14d：（0．63＋0．04）~g／mg，28d：（1．04_＋0．07）jxg／mg】和模型组【14d：（0．72_＋0．06）}xg／mg，28d：（1．39＋0．06）jxg／mgl，差异均有统计学意义（P〈0．05）；28d时，BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量低于模型组，差异有统计学意义（P〈O．05）。结论应用pcDNA3．1-HGF转染后的BM—MSCs比单独应用BM—MSCs能更有效地对抗SiO：诱导的大鼠肺泡炎和早期肺纤维化，作用机制可能与其减轻肺组织的炎症有关。