虚拟现实系统结合手术教学在泌尿外科腹腔镜培训中的应用

近10年来,腹腔镜手术得到快速发展,目前泌尿外科手术已经进入一个腔镜时代[1]。为了减少风险,对于初学者不适宜采用传统的学徒制教学方法,因而迫切需要探索安全有效的培训方法[2-3]。现将本院探索的采用虚拟现实训练系统和手术录像教学相结合的方式进行腹腔镜手术培训的体会报道如下。

hBMP-7修饰的骨髓间充质干细胞对肾脏BMP-7的影响

目的观察人骨形态发生蛋白-7(hBMP-7)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)肾脏内源和外源BMP-7表达的影响,探讨其对IRI肾脏的保护作用。方法 45只兔采用随机数字表的方法分为对照组(Ⅰ组)、单纯BM-MSCs移植组(Ⅱ组)和基因修饰的BM-MSCs移植组(Ⅲ组)(n=15)。构建hBMP-7重组腺病毒并转染兔BM-MSCs,建立肾脏IRI模型后,移植组于肾血流恢复后经肾动脉推注单纯和基因修饰的自体BM-MSCs,对照组同法推注等量生理盐水。3组分别于术后3、7、14 d采用随机数字表的方法取5只兔经耳缘静脉采血,检测血清肌酐(Crea)和尿素(Urea),观察肾功能情况;同时取肾组织进行HE染色行肾小管损伤评分,ELISA和RT-PCR法分别检测肾脏hBMP-7和BMP-7的蛋白浓度和mRNA表达。结果肾脏IRI后3、7、14 d,Ⅲ组Crea和Urea明显低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅲ组肾小管损伤评分均低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05);Ⅲ组检测到第3、7、14天hBMP-7蛋白[(81.8±25.5)、(107.8±33.4)、(49.6±17.8)pg/mg]和mRNA(0.82±0.12、0.69±0.13、0.42±0.10)的表达并维持至少2周;Ⅲ组第3、7、14天BMP-7 mRNA(1.08±0.33、1.36±0.17、1.64±0.21)和BMP-7蛋白(95.9±21.3、137.0±14.9、192.1±18.0)的表达均高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。结论 hBMP-7基因修饰的BM-MSCs移植既能携带外源性hBMP-7在缺血再灌注损伤肾脏中表达,又能提高内源性BMP-7的表达,减轻肾脏损伤,促进肾脏修复,改善肾脏功能。

人BMP-7基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建含有人骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,观察其对肾小管上皮细胞株(HKC)细胞的转染情况。方法用基因工程技术将人BMP-7基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pDC316上,利用脂质体介导的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-BMP-7转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒Ad5-BMP-7,并在其中包装扩增病毒。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HKC细胞感染效率的检测。结果酶切鉴定及PCR结果证明BMP-7基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.25×1010PFU/ml,对HKC有较强感染能力。结论应用细胞内同源重组方法成功构建了含人BMP-7基因的重组腺病毒载体。

肢体缺血预处理对兔肾急性缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察肢体缺血预处理对肾脏急性缺血再灌注损伤(IRI)能否产生保护作用,并通过肾功能、组织病理学等检测评估其效果。方法(1)建模:40只新西兰大白兔随机分为3个组,假手术(S)组8只,缺血再灌注(IR)组和预处理(LIP)组各16只,后2个组兔采用右肾切除、左肾动静脉阻断1h开放法建立肾脏缺血再灌注模型,S组仅切除右肾,游离左肾动静脉但不阻断。(2)肢体缺血预处理方法:LIP组在阻断前,先以止血带在双下肢根部绑扎,阻断血流5min,完全开放10min,反复4次。(3)评估指标:对比各组兔在再灌注后8、24h和3、7d时肾功能、肾组织MDA含量和SOD活性以及组织病理学差异。结果LIP组再灌注后血清Scr和BUN升高幅度要明显低于IR组(P<0.05),在再灌注后3d内血Scr和BUN明显低于IR组(P<0.05);LIP组再灌注后24h内SOD活性和MDA含量的变化幅度明显低于IR组(P<0.05),且在各时间点SOD活性均明显高于IR组(P<0.05),MDA含量均明显低于IR组(P<0.05);LIP组光镜下病理改变轻于IR组。结论肢体缺血预处理能减轻肾脏缺血再灌注引起的组织病理改变,降低肾组织MDA含量并增加SOD活性,改善肾功能,对急性肾脏IRI起到明显的保护作用。

Simulect和OKT3诱导治疗应用于肾移植临床的疗效比较(英文)

目的评价Simulect和OKT3作为肾移植诱导治疗的有效性和安全性.方法将170例首次肾移植受者随机分为两组:Simulect组62,OKT3组108例.所有患者免疫抑制维持治疗均用环孢素A(CsA)/他克莫司(FK506)+霉酚酸酯(MMF)+泼尼松(Pred)三联.Simulect组:分别于术前2 h和术后4 d使用20mg Simulect:OKT3组:OKT3每天5 mg静滴,从术后第1天开始,连用7～10 d.观察两组在肾移植术后1年内急性排斥反应(AR)、移植肾功能延迟恢复(DGF)、毒副作用和人/肾存活情况.结果有34例发生AR,Sinulect组6例,OKT3组28例(P＜0.05),其中OKT3组5例出现2次或2次以上AR,7例AR需要ATG治疗逆转.移植肾功能延迟恢复(DGF)、细胞因子释放综合征、过敏反应等方面,Simulect组发生率明显低于OKT3组(6vs32,0vs49,0vs31,P＜0.01).Simulect组感染发生率低于OKT3组(16vs45;P＜0.05).OKT3组有2例移植肾切除,1例死于严重肺部感染.结论Simulect在肾移植免疫诱导治疗中疗效显著,副作用少,是一种强效安全的免疫抑制剂.

198例肾损伤的诊断与治疗

目的探讨总结198例肾损伤的诊断及治疗方法。方法本组均行B超、CT、静脉尿路造影(IVU)和数字减影血管造影(DSA)检查,阳性率分别为92.1%,96.4%,70.5%和77.8%;非手术治愈145例;手术治愈52例,其中肾切除29例,肾修补术8例,肾静脉修补术3例,肾部分切除2例,肾动脉栓塞术10例。结果死亡1例(0.5%),197例痊愈出院(99.5%)。结论B超检查具有简单、快速、无损伤、不受病人条件限制等优点,应作为肾损伤的首选检查方法。CT检查准确率高,可判断肾损伤程度。DSA适宜诊断肾蒂伤,及肾动脉栓塞治疗。选择性肾动脉栓塞治疗肾挫伤安全有效,对严重肾损伤和开放性肾损伤应及时手术探查。

兔自体骨髓间充质干细胞移植对冷缺血再灌注损伤肾脏细胞增殖与凋亡和肾功能的影响

目的:建立兔肾脏冷缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury,IRI)模型,观察经肾动脉灌注移植的自体骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对IRI肾脏细胞增殖与凋亡的影响,探讨其保护作用机制。方法:45只兔随机均分为假手术组(Ⅰ组)、对照组(Ⅱ组)和移植组(Ⅲ组)(n=15)。分离移植组兔BM-MSCs,建立肾脏IRI模型后,移植组于肾血流恢复后经肾动脉推注自体BM-MSCs,对照组和假手术组同法推注等量生理盐水。分别于术后3、7、14d3组各随机取5只经耳缘静脉采血,检测血清肌酐(Crea)和尿素(Urea),观察肾功能情况;同时取肾组织进行增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax免疫组化染色,TUNEL法检测肾脏凋亡细胞,计算Bcl-2、Bax含量和肾小管上皮细胞增殖指数(Proliferating cell nuclearantigen index,PI)和凋亡指数(Apoptosisindex,AI)。结果:IRI后第3d移植组和对照组兔Crea和Urea均达到最高水平[移植组:(297.9±18.6)μmol/L,(19.2±1.5)mmol/L;对照组:(326.6±20.0)μmol/L,(22.6±2.6)mmol/L],以后逐渐下降,到第14d,移植组Crea和Urea分别为(224.1±19.2)μmol/L,(13.9±1.6)mmol/L;对照组Crea和Urea分别为(278.6±16.9)μmol/L,(17.4±1.0)mmol/L,各时间点移植组Crea和Urea明显低于对照组(P<0.05)。各时间点移植组Bcl-2含量和肾小管上皮细胞PI高于对照组,Bax含量和肾小管上皮细胞AI低于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BM-MSCs移植能促进肾脏I/R损伤后肾脏细胞增殖,抑制肾脏细胞凋亡,从而降低血清Crea和Urea,在一定程度上促进IRI后肾功能的恢复。

巴利昔单抗对肾移植受者白细胞介素2和可溶性白介素2受体的影响

目的:分析巴利昔单抗和抗CD3单克隆抗体(OKT3)对肾移植受者白细胞介素2(IL2)和可溶性白细胞介素2受体(sIL2R)的影响,评价其治疗的有效性及安全性。方法:将74例肾移植受者随机分为巴利昔单抗组(n=39)和OKT3组(n=35)。所有病人均采用环孢素+霉酚酸酯+泼尼松三联免疫抑制维持治疗。巴利昔单抗组:分别于术前2h和术后d4使用巴利昔单抗20mg,静脉滴注;OKT3组:从术后d1开始,给OKT35mg静脉滴注,qd,共7～10d。检测术后2mo内IL2和sIL2R浓度,观察急性排斥反应(AR)、肌酐恢复时间、不良反应、受者和移植肾存活情况。结果:巴利昔单抗组IL2和sIL2R浓度明显低于OKT3组(P<0.05)。有12例病人发生AR,巴利昔单抗组3例,OKT3组9例(P<0.05)。巴利昔单抗组肌酐恢复时间(4.7±s2.1)d,明显短于OKT3组(9±5)d(P<0.05)。巴利昔单抗组感染7例,细胞因子释放综合征0例,过敏反应0例,明显低于OKT3组(P<0.05)。结论:巴利昔单抗明显降低IL2和sIL2R浓度和AR发生率,不良反应少,是一种强效安全的免疫抑制剂。

BMP-7修饰骨髓间充质干细胞对兔缺血再灌注损伤肾小管细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白-7（BMP-7）修饰的自体骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）移植对缺血再灌注损伤（IRI）后肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 20只新西兰大白兔,兔龄6~8周,体质量（1.5±0.3）kg。采用随机数字表的方法分为假手术组（Ⅰ组）、对照组（Ⅱ组）、单纯BM-MSCs移植组（Ⅲ组）和BMP-7修饰的BM-MSCs移植组（Ⅳ组）（n=5）。构建BMP-7重组腺病毒并转染兔BM-MSCs,建立肾脏IRI模型后,移植组（Ⅲ组和Ⅳ组）于肾血流恢复后经肾动脉推注单纯和基因修饰的自体BM-MSCs,Ⅱ组同法推注等量0.9%氯化钠溶液。4组于术后7 d取兔肾组织,采用TUNEL法检测细胞凋亡,增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学检测细胞增殖,分别计算细胞凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）;免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax的表达并计算Bcl-2/Bax比值。结果Ⅳ组AI明显低于Ⅱ组和Ⅲ组（8.38±1.91 vs 29.82±5.19、19.11±3.41,P〈0.05）,PI明显高于Ⅱ组和Ⅲ组（40.38±7.09 vs 9.89±2.15、24.83±5.88,P〈0.05）;Ⅳ组Bax蛋白表达最低,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值最高（P〈0.05）。结论 BMP-7修饰的BM-MSCs移植可以抑制IRI后肾小管上皮细胞凋亡并促进其增殖,从而有利于肾小管损伤的早期修复。

体外循环下肾癌伴Ⅲ、Ⅳ级癌栓形成的手术治疗

目的探讨体外循环辅助下肾癌伴Ⅲ、Ⅳ级下腔静脉癌栓形成的手术治疗的有效性和安全性。方法回顾性分析2007年1月至2010年1月肾癌伴Ⅲ、Ⅳ级癌栓形成的11例患者的临床资料,包括临床表现、术前诊断、手术方法及预后等。结果 11例患者术中均成功施行肾癌根治性切除及Ⅲ、Ⅳ级癌栓清除术,术中平均出血量1 835 mL(400～2 300 mL),平均住院时间18.4d(12～34 d)。随访0.5～3.5年,1例术后1.5年肿瘤复发并死亡,其余10例无瘤存活。结论对无淋巴结和(或)远处转移的肾癌伴Ⅲ、Ⅳ级癌栓形成患者,在体外循环辅助下行肾癌根治性切除和癌栓清除术是最有效而安全的治疗手段。

肾移植术后泌尿系恶性肿瘤患者T淋巴细胞亚群的测定及意义

目的:观察肾移植术后并发泌尿系统恶性肿瘤患者血液T淋巴细胞亚群的变化,及其对调整免疫抑制剂及预防恶性肿瘤的意义。方法:9例肾移植术后并发泌尿系统恶性肿瘤患者为肿瘤组,9例未发生任何肿瘤或感染的肾移植患者为移植组,9例健康体检者为对照组。流式细胞术测定T淋巴细胞亚群(CD3'T、CD3'CD8'T、CD3'CD4'T、CD4'/CD8')比例,肿瘤组行肿瘤切除并减少免疫抑制剂用量,测定术前及术后2个月血药CsA和FK506浓度。结果:肿瘤组与另两组比较,CD3'T及CD3'CD8'T无明显变化,CD3'CD4'T明显减少,CD4'/CD8'比值明显降低(P<0.05)。肿瘤组肿瘤切除术后2个月与术前比较,CD3'T和CD3'CD4'T无明显变化;CD3‘CD8'T明显降低,而CD4'/CD8'比值明显升高(P<0.05),CsA和FK506血药浓度均明显降低(P<0.05)。结论:血T淋巴细胞亚群可作为肾移植免疫状态的有效评价指标,对指导肾移植免疫抑制剂的调整和预防肿瘤的发生具有重要的临床意义。

早期排斥反应致移植肾功能延迟恢复的临床分析

目的探讨肾移植术后早期排斥反应所致移植肾功能延迟恢复（DGF）的诊断、治疗方案及效果，对远期人／肾存活的影响。方法回顾分析1999年4月～2003年4月肾移植术后早期排斥反应所致DGF患者的临床资料，共35例。结果24例术后无尿，11例术后2～5d出现少尿、无尿。经临床、彩超、移植肾穿刺活检诊断为排斥反应。所有患者接受ATG加FK506加MMF加Pred免疫抑制方案，定期透析。治疗后平均来尿时间为25d（10～98d），6个月内32例肾功能恢复正常，3年人存活率97．14％（34／35），移植肾存活率94．29％（33／35）。32例有功能肾患者的平均尿量为（1986．4±869．7）ml／d，血肌酐（101．5±57．3）μmol／L，尿素氮（7．9±2．76）mmol／L。结论早期排斥反应所致DGF应尽早采用ATG加FK506加MMF加Pred免疫抑制方案，绝大多数都能恢复，远期人／肾存活良好。

完全后腹腔镜下肾输尿管根治术与开放手术的比较

目的：比较完全后腹腔镜下肾输尿管根治术与开放手术治疗上尿路移行细胞癌的临床疗效。方法：44例上尿路移行细胞癌患者行肾输尿管根治术,其中15例为腹腔镜手术组,采取完全后腹腔镜下手术,29例为开放手术组,采取开放肾输尿管根治性手术。比较2组患者的手术时间、术中出血量、术后止痛药应用时间和剂量、胃肠道功能恢复时间、下床活动时间、术后住院时间和并发症,并随访6~42月,比较2组膀胱肿瘤发生及远处转移、存活时间等。结果：2组手术均获成功。腹腔镜手术组与开放手术组比较,出血量明显减少（116.1±29.4）ml vs.（278.6±84.3）ml,P=0.000;止痛药（杜冷丁注射液）应用时间短（0.7±0.5）d vs.（2.3±0.9）d,P=0.000;剂量少（33.3±24.4）mg vs.（155.2±62.8）mg,P=0.000;下床活动早（2.1±0.5）d vs.（4.2±1.0）d,P=0.000;术后住院时间短（8.7±1.6）d vs.（13.1±3.2）d,P=0.000。腹腔镜手术组手术时间较短（212.1±19.5）min vs.（251.7±24.2）min,P=0.000,肠道功能恢复较快（1.9±0.8）d vs.（2.9±0.8）d,P=0.001,但与开放手术组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。随访6~42月,2组病人均存活,术后并发症、肿瘤复发及转移差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：完全后腹腔镜下肾输尿管根治术具有微创并与开放手术相同的肿瘤学效果,将成为上尿路移行细胞癌的理想手术方法。

Simulect和Zenapax应用于肾移植诱导治疗的5年临床观察

目的评价2剂Simulect和5剂Zenapax在肾移植中诱导治疗预防急性排斥反应（AR）的有效性、安全性以及对近、远期人／肾存活的影响。方法选择1999年4月～2001年4月首次肾移植患者102例，分成Simulect组（54例）和Zenapax组（48例），在三联免疫抑制剂基础上（环孢素A／FK506、骁悉、皮质激素）加用Simulect（术前2h和术后第4天分别予20mg静滴）或Zenapax（1mg·kg^-1·d^-1，最大剂量100mg，首剂术前2h，此后每2周1剂，共5剂）。观察术后3个月内肾功、AR、移植肾功能延迟恢复（DGF）、急性肾小管坏死情况；术后5年内肾功、排斥反应、并发症及人／肾存活情况。结果术后3个月内AR发生率明显降低（Simulect组：14．8％；Zenapax组：14．6％）；首次AR发生时间延迟；激素治疗对大部分AR有效；5年内再次排斥反应发生率为9．3％（Simulect组）和6．3％（Zenapax组）。术后肾功能恢复明显加快，早期及远期肾功能良好。未出现细胞因子释放综合征，仅2例DGF。5年内，感染、糖尿病、高脂血症、恶性肿瘤等未见增加。5年人／肾存活良好，均达95％以上。结论2剂Simulect和5剂Zenapax预防肾移植术后AR的效果好、安全性高，有利于早期肾功能恢复和远期人／肾存活。

白细胞介素-10基因修饰对骨髓间充质干细胞体外免疫效应的影响

目的:研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外免疫效应。方法:RT-PCR克隆大鼠IL-10基因并构建逆转录病毒pLNCX-IL-10,转染大鼠BMMSCs;流式细胞仪检测IL-10基因修饰的BMMSCs(BMMSCs IL-10)体外对T淋巴细胞亚群的影响,CCK-8法检测BMMSCs IL-10及其培养上清液对体外混合淋巴细胞增殖的影响。结果:BMMSCsIL-10能明显减少CD4+T,降低CD4+/CD8+比值,比BMMSCs作用明显(P=0.000);BMMSCsIL-10及其培养上清液比BMMSCs更能明显抑制T淋巴细胞增殖反应(P=0.000)。结论:IL-10基因修饰能增强BMMSCs的体外免疫抑制作用。

FMR-1基因与脆性X综合征

脆性X综合征是家族性智力低下的常见病因之一，遗传学研究表明染色体的Xq27．3脆性位点与其相关。自1991年在此位点附近发现FMR-1基因以来，许多学者对此进行了大量研究，获得一些重要相关资料，本文在此简要作一综述。

CD4^＋CD25^＋Treg细胞对B细胞的作用机制分析

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞对B细胞作用机制。方法:用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Wistar大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4+CD25+Treg细胞,然后将分离纯化的Wistar大鼠Treg细胞负载SD大鼠抗原。以Trans Well Millcell-PCF分隔培养槽分隔或共培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA法检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平。结果:分隔培养组上清中的IgG和IgA水平分别为(4·7±1·1)、(10·5±1·7)μg/ml,与阳性对照组中IgG的含量(5·1±1·0)μg/ml以及IgA的(11·2±1·6)μg/ml相比没有显著差异(P>0·05)。而与阳性对照组相比较,共培养组上清中的IgG和IgA水平明显降低(P<0·01),分别达到了(2·2±0·8)μg/ml和(5·4±0·9)μg/ml。在共培养体系中加入Anti-TGF-β1后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3·1±0·5)μg/ml和(6·9±0·8)μg/ml;加入Anti-CTLA4后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3·2±0·6)μg/ml和(7·2±0·9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3·5±0·5)μg/ml和(7·4±0·6)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P<0·05),但仍明显低于阳性对照组的水平(P<0·05)。结论:CD4+CD25+Treg通过细胞-细胞间接触机制直接抑制B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用。

用地尔硫卓提高他克莫司在肾移植中的应用效能

目的探讨应用钙拮抗剂地尔硫卓(diltiazem,Dil)减少肾移植受者他克莫司(tacrolimus,Tac)用量并改善肾功能的可行性。方法肾移植术后3周,将Dil用于31例服用Tac的肾移植受者(Dil组),以未用Dil的22例为对照,检测Dil应用前和用后1周两组Tac血浓度谷值、受者淋巴细胞对供体树突状细胞的反应强度(LR);调整两组Tac血浓度在治疗窗范围内,观察两组术后6个月时LR,24个月时肌酐清除率(Ccr)降低值,两组急性排斥(AR)发生率和Tac用量。结果用Dil后1周,Dil组Tac血浓度平均升高57.2%,LR明显降低(7 709±1 257与9 965±1 908,P<0.01),与对照组上述指标变化差异无统计学意义(P>0.05)。术后6个月时两组LR差异无统计学意义(P>0.05)。术后24个月,Dil组Ccr降低值明显低于对照组为〔(27.5±9.2)mL/min与(34.7±8.2)mL/min,P<0.05〕。两组AR发生率差异无统计学意义(P>0.05),Dil组每例Tac总用量平均较对照组少443mg。结论Dil可显著提高肾移植后Tac免疫抑制效能并明显减少受者Tac用量;长期应用对移植肾功能具有保护作用。