粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)p35基因功能的研究

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）或细胞程序性死亡（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ），最早被定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的生理性自然死亡过程〔１〕。诱导细胞发生凋亡的因素很多，而病毒感染是常见的导致细胞凋亡的重要因素之一。由...

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──35k蛋白基因的结构和功能

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──３５ｋ蛋白基因的结构和功能施先宗，陈曲侯，王章（华中师范大学昆虫学研究所，武汉４３００７０）在长期进化过程中，昆虫的杆状病毒同其它生物一样，对自己的生活环境表现出高度的适应性，并获得了某些进化上的生长优势。它们不仅能在个体...

口服感染昆虫纯化重组杆状病毒

构建可使重组杆状病毒产生多角体的重组转移载体质粒，并将共转染产物喂昆虫幼虫，收集典型病变幼虫血淋巴进行空斑分析，发现子代病毒中约９０％为重组病毒．再进行一轮空斑纯化即可获得纯净的重组病毒，较之传统的空斑纯化方法，节省了人力、物力和时间．

构建重组杆状病毒的几种新方法

昆虫杆状病毒作为高效的表达载体，现已广泛地用于各种外源基因的表达。但是，用传统的方法构建重组杆状病毒，存在着重组率低，纯化难及耗时长等缺点，围绕如何快速、简便、高效地构建重组杆状病毒，近几年来人们进行了一些重大的改进，包括使病毒ＤＮＡ线状化以提高重组病毒的比例；在体外进行重组；同源重组和重组病毒的纯化与筛选在酵母和大肠杆菌中一次完成；使重组病毒可以形成多角体等，从而从根本上改变了传统方法中的不足；文章着重介绍了这几种新的改进方法。

两种昆虫杆状病毒诱导的细胞凋亡

首次发现粉纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙ－ｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＴｎＭＮＰＶ）和中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａｓｉｎｇｌｅｃａｐ－ｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＨａＳＮＰＶ）分别诱导斜纹夜蛾细胞Ｓｌ－ｚｓｕ－１和粉纹夜蛾细胞Ｔｎ－５Ｂ１－４发生典型的细胞凋亡．Ｓｌ－ｚｓｕ－１和Ｔｎ－５Ｂ１－４的细胞凋亡分别开始于病毒感染后１０ｈ和２４ｈ左右，其高峰期细胞凋亡率分别为９５％～１００％和６０％左右．约１０％的Ｔｎ－５Ｂ１－４细胞产生病毒包涵体．感染复数为５的病毒可诱导２种细胞的凋亡率达到高峰．ＴｎＭＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶ的ＤＮＡ不能诱导细胞凋亡，只有用含芽生病毒的接种液攻击细胞才能诱导细胞凋亡．

杆状病毒gp64基因可能是细胞凋亡诱导因子

发现野生型苜宿丫纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｍｕｌｔｉｃａｐ－ｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）诱导斜纹夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａ）细胞Ｓｌ－ｚｓｕ－１发生典型的细胞凋亡．该细胞凋亡发生于病毒感染后１０～１２ｈ，在病毒感染后的２４ｈ左右的高峰期细胞凋亡率为９５％～１００％．ＡｃＭＮＰＶＤＮＡ和包埋型病毒粒子不能诱导细胞凋亡，只有芽生型病毒粒子才能诱导细胞凋亡．ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４基因编码的ＧＰ６４膜融合蛋白不仅是位于芽生型病毒粒子囊膜上已知唯一的病毒结构蛋白，还是病毒感染时最早接触细胞的病毒因子．首次提出ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４基因编码的ＧＰ６４膜融合蛋白可能是一种细胞凋亡诱导因子，并设计了构建ＡｃＭＮＰＶＧＰ６４膜融合蛋白异源包装病毒的实验方案以便加以证实．

AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实

纯化了３株在共转染后形成正常多角体的病毒株，提取其病毒ＤＮＡ，并对其做了ＥｃｏＲⅠ、ＢｇｌⅡ酶切分析；克隆含多角体蛋白基因的ＥｃｏＲⅠＩ片段并进行序列测定，证实了此病毒株为回复突变株．

昆虫杆状病毒基因表达的调控

综述了近１０年来杆状病毒基因的调控研究进展，包括６种与调控有关的基因及１１种晚期表达因子基因的功能．杆状病毒基因组中的同源区为其顺式作用元件（ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔ）或增强子，对基因的表达起正调作用，而病毒编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）则决定着病毒基因表达的调控以级联方式进行．

人α－干扰素基因在小菜蛾细胞中的表达及其影响因素探讨

将含有人α－干扰素（ＩＦＮα）基因的杆状病毒转移载体（ｐＡｃ３７３－ＩＦＮα）与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－Ｐｘ２－ＨＮＵ３，Ｐｘ），空斑纯化后，利用细胞致病效应（ＣＰＥ）抑制法检测得到了干扰素效价（６８７２．６ＩＵ），证明得到了可以在Ｐｘ细胞中表达ＩＦＮα的重组病毒（Ａｃ－ＩＦＮα）．并探讨了培养温度和血清浓度对ＩＦＮα表达水平的影响，结果表明：在２８℃时，培养基中补加２％的小牛血清，可获得最高的ＩＦＮα效价（１７４３５．９ＩＵ）．

一种构建重组杆状病毒的简易方法

对传统构建重组杆状病毒的方法作了如下改进：先用磷酸钙共沉淀法单独将质粒ＤＮＡ转进昆虫Ｓｆ细胞中，其中重组质粒采用聚乙二醇沉淀法纯化，１２～２４ｈ后再用低剂量的病毒攻击细胞．改进后的方法简便、省时、经济、重组率高，适于一般实验室使用．

一类新内含子的研究状况

在真核细胞基因组中发现一类新内含子———AT AC内含子 ,除结构特征与普遍存在的核mRNA前体内含子有明显不同外 ,剪接机制上也存在一定差异 .文章介绍了该内含子的分布 ,结构特征及剪接机理 。

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２，Ｐｘ），利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析，β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中，得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ，重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．