过氧化氢促肝卵圆细胞株WB-F344的增殖及转化作用

目的 探讨过氧化氢（H_2O_2）对肝卵圆细胞株WB-F344的促增殖及转化作用。 方法 用H_2O_2直接作用于培养的WB-F344细胞，以MTT 比色试验、3H-TdR掺入液闪计数观察其对细胞的促增殖效应；经N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）启动的和未经MNNG启动的WB细胞用小剂量H_2O_2连续作用促其转化，以形态学观察、核型分析及甲基纤维素半固体培养进行检测。 结果 小剂量的H_2O_2一次作用具有明显的促进WB细胞增殖的效应，连续作用28 d，可促进经MNNG启动的和未经MNNG启动的WB细胞发生转化，形态上呈现典型的转化细胞的特征；核型分析显示染色体数目改变，染色体结构畸变率明显升高；在甲基纤维素半固体培养基中形成克隆。 结论 小剂量H_2O_2可诱使肝卵圆细胞增殖、转化，提示H_2O_2在肝癌发生中可能具有重要作用，抗氧化作用可能在肝癌的防治中具有一定的意义。

H_2O_2致WB-F344细胞内活性氧的产生及机理

以双氢罗丹明123(DHR123)作为荧光探针,采用激光共聚焦扫描显微镜研究小剂量(800 nmol/L)H2O2诱导大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞内活性氧产生的动态变化过程及其机理。结果发现:(1)小剂量H2O2的一次作用可以引起胞内活性氧的产生;(2)胞内活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理2 h时后,再加入小剂量H2O2,发现胞内活性氧的产生明显减少;(3)用广谱的蛋白激酶抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)、Ca2+依赖性蛋白激酶(PKC)抑制剂Bisindolylmaleimide I、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Tyrphostin 25分别预处理15 min后,H2O2诱导的胞内活性氧的产生现象均消失;(4)细胞在无外钙环境下,小剂量H2O2诱导的胞内活性氧的产生明显减少;(5)细胞在无外钙环境下用NAC预处理后,H2O2诱导的胞内活性氧的产生现象消失。结果表明,H2O2可以通过胞内信号转导系统诱使WB细胞胞内活性氧产生,这可能与小剂量H2O2调控细胞生物学功能(如增殖、转化)相关。

过氧化氢对大鼠肝卵圆细胞内游离钙含量的影响

目的研究小剂量(800nmol/L)过氧化氢H2O2诱导培养的大鼠肝卵圆细胞(WB细胞)胞质内游离钙犤Ca2+犦i含量的变化及其机制。方法以800nmol/LH2O2刺激WB细胞,采用Fluo-3/AM作为荧光指示剂,以激光共聚焦扫描显微镜测定不同条件下犤Ca2+犦i荧光值的改变以反映犤Ca2+犦i含量的变化。结果(1)小剂量H2O2可引起犤Ca2+犦i升高,约300s后达到高峰,800s后恢复正常,过氧化氢酶(CAT)可抑制此变化;(2)细胞在无钙外环境下,相同浓度的H2O2不引起犤Ca2+犦i变化;(3)钙拮抗剂心痛定(nifedipine)不能抑制犤Ca2+犦i荧光值的升高,而蒽-9-羧酸(A9C)则可抑制此变化。结论小剂量H2O2刺激WB细胞可诱使犤Ca2+犦i含量升高,其机制可能是H2O2引起细胞膜上非选择性阳离子通道开放使胞外Ca2+进入胞内,造成胞浆内犤Ca2+犦i含量增高。

H_2O_2对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞膜理化特性、脂质过氧化及基因组DNA的影响

目的 研究小剂量(100 nmol/L)H_2O_2对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞膜理化特性、脂质过氧化及基因组DNA的影响。方法利用标记膜脂及膜蛋白质的荧光标记物1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)和N-(3芘)马来酰亚胺[N-(3P)M]标记不同剂量H_2O_2作用及经H_2O_2多次作用后发生转化的WB细胞，通过测定其荧光偏振度确定膜理化特性的改变；以硫代巴比妥酸(TBA)法测定其脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量的变化；以及利用溴化乙锭(EB)作荧光探针，通过DNA-EB结合物荧光强度的变化确定其基因组DNA的损伤程度。结果小剂量(100 nmol/L)H2O2的一次作用可使膜蛋白运动度增加，膜脂流动性增大，MDA的含量增高；H_2O_2的多次作用使上述变化更为显著。大剂量(1 mmol/L)、中剂量(100 μmol/L)的H_2O_2作用细胞后可直接损伤基因组DNA，小剂量H2O2的一次作用虽然不能直接损伤基因组DNA，但多次作用后却可使基因组DNA受损。结论H_2O_2可诱使WB细胞膜理化特性发生改变，脂质过氧化产生及造成基因组DNA损伤，此可能与H_2O_2的致、促癌作用有关。

过氧化氢对细胞膜上离子通道的作用

H2 O2 对细胞膜上不同的离子通道有广泛的作用 ,而且同一种通道在不同的组织类型中对H2 O2 的反应性亦不同。在培养的lymnaea(椎螺 )神经元中 ,H2 O2 可诱导剂量依赖性的内向Ca2 +电流的降低 ,L 型Ca2 +电流的降低 ,导致通道失活。在绵羊心肌细胞的内质网H2 O2 可直接调节Ca2 +释放通道 ,使其开放概率 (P0 )增加 ,但它不影响电导。H2 O2对K+通道的作用表明 ,H2 O2 介导的KCa通道活性改变因组织类别的不同而亦有差异。H2 O2 可诱导豚鼠心肌细胞ATP 敏感K+通道的活动增加。H2 O2

活性氧对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344钾通道的作用

用膜片箝技术的细胞贴附式 (cell-attached)观察O2.-对大鼠肝卵圆细胞株WB -F344K +通道活动的影响 ,结果发现 :1)在细胞处于静息状态时 ,在箝制电压为0mV ,每10mV阶跃 ,测试电压分别达±120mV范围内未记录到通道活动。此时 ,小剂量O2.- 也不能激活WB细胞的通道活动。在细胞外液中加入20mmol/LCaCl2 后通道开启 ,记录到小振幅的通道活动 ,它们的电导是9.48±0.93ps(n=4)。此时再用O2.-作用于细胞 ,通道被激活 ,通道电导增大 ,在正测试电压时为15.74±5.46ps(n=8) ,在负测试电压时为48.32±8.67ps(n=6)。通道活动具有外向整流特性。2)胞外加入4 -AP可抑制该通道的活动 ,而SNP则可增强通道的活动。

大鼠血小板中的神经肽Y及其对血管收缩的影响

特异性放射免疫分析显示大鼠血小板与富血小板血浆(PRP)分别含NPY免疫活性物质90±16ng/10~7血小板与93±19ng/ml,大大高于普通血浆(1.2±0.1ng/ml)与贫血小板血浆(PPP)(1.7±0.3 ng/ml)中的含量(P<0.001)。血小板样品HPLC各馏分的NPY放免活性峰位与标准NPY的峰位相符。PRP经胶原最大程度聚集后,血小板内的NPY浓度降为34±5 ng/10~7血小板,而PPP中的NPY浓度则升高到26±4 ng/ml。1.6 ml PRP经胶原作用产生最大程度聚集,由此分离所得的PPP引起离体灌流大鼠尾动脉收缩,张力上升380±80 mg;上述PPP经NPY抗血清处理后引起尾动脉收缩的幅度显著减小(190±40 mg,P<0.001)。而1 nmol/L人工合成NPY并不引起血管收缩。结果表明大鼠血小板中含有大量NPY,在不可逆聚集时可以释放,释放的NPY可能参与血小板聚集时释放物质的缩血管效应。

原发性高血压患者贫血小板血浆与血小板中神经肽Y含量的改变

目的：研究神经肽Ｙ（ＮＰＹ）在人血小板与血浆中的分布及其在原发性高血压时的改变。方法：放射免疫分析测定１４２例原发性高血压患者与２３例健康人血小板悬液（ＰＲＳ）与贫血小板血浆（ＰＰＰ）中ＮＰＹ含量。结果：健康人ＰＲＳ与ＰＰＰ中ＮＰＹ含量相同，高血压患者ＰＰＰ中ＮＰＹ含量增高，以女性为著，ＰＲＳ中ＮＰＹ含量在男性患者有增高趋向，而女性患者无改变。结论：原发性高血压患者血浆ＮＰＹ含量的增高在女性患者更为显著，可能与血小板摄取ＮＰＹ障碍有关。

人血清巯基蛋白酶抑制肽C的酶免疫固相分析法

人血清巯基蛋白酶抑制肽Ｃ的酶免疫固相分析法北京医科大学第三医院心血管研究所汪淑荣，施广璞，冯建芳，孙诠巯基蛋白酶抑制肽Ｃ（ｈＣＰＩｃ）是一类小分子碱性蛋白质，对巯基蛋白酶活性具有抑制作用。而巯基蛋白酶对细胞内蛋白质代谢和转换起重要作用，细胞或细菌分泌...

系统性红斑狼疮患者血清中巯基蛋白酶抑制肽C的ELISA…

系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中含有一定量的巯基蛋白酶抑制肽Ｃ（ｈＣＰＩｃ），对于其浓度的测定，可做为ＳＬＥ诊断的一个重要指标。本文采用兔抗人ｈＣＰＩｃ抗体，建立了一种特异性强、灵敏、简便的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对ＳＬＥ活动期患者及伴肾病患者血清ｈＣＰＩｃ含量进行检测发现，ＳＬＥ活动期血清ｈＣＰＩｃ含量明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）。

神经肽Y的基因及其表达调控

神经肽酪氨酸(NPY)是一种含36个氨基酸残基的生物活性多肽,在体内具有收缩血管,影响激素分泌,调节生物节律及摄食行为等多种生物学功能。本文从NPY cDNA克隆、基因结构与功能关系以及多种因素对其基因表达的调节等方面作一综述。