Trim31对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及相关机制研究

目的 探讨三基序蛋白31(Trim31)对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及相关机制。方法 采用GEPIA数据库分析肝癌中Trim31 mRNA表达水平,采用Western blot检测肝癌组织中Trim31蛋白的表达水平。构建过表达Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验和EdU实验评估过表达Trim31对肝癌细胞增殖的影响,采用蛋白富集分析及Western blot筛选验证Trim31下游信号通路。筛选Trim31下调质粒,并构建稳定沉默Trim31的肝癌细胞系,采用Western blot、CCK-8实验、集落形成实验和EdU实验评估沉默Trim31对肝癌细胞增殖的影响。在过表达Trim31的基础上进一步过表达P38,观察其对肝癌细胞增殖的影响,明确Trim31与P38通路之间的调控关系。用索拉非尼处理过表达Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验、EdU实验和Western blot评估过表达Trim31对索拉非尼处理后肝癌细胞增殖的影响及机制。构建索拉非尼耐药肝癌细胞株,并在此基础上构建沉默Trim31的肝癌细胞系,采用CCK-8实验、集落形成实验、EdU实验和Western blot评估沉默Trim31对索拉非尼耐药细胞株增殖的影响及机制。结果 Trim31 mRNA在肝癌组织中呈高表达。过表达Trim31能促进肝癌细胞的增殖,而沉默Trim31可抑制肝癌细胞的增殖;过表达P38可抑制过表达Trim31对肝癌细胞的促增殖作用;Trim31与P38通路之间可能存在负调控作用。过表达Trim31可减弱索拉非尼对肝癌细胞增殖的抑制作用。索拉非尼并不影响肝癌耐药细胞株的增殖,但沉默Trim31后索拉非尼肝癌耐药细胞株的增殖受到显著抑制。结论 Trim31 mRNA在肝癌中呈高表达,沉默Trim31可减弱肝癌细胞对索拉非尼的耐药性,其机制可能与激活P38通路有关。

黑斑蛙核型、C-带及Ag-NORs研究

采用外周血淋巴细胞培养法制备染色体标本,观察黑斑蛙的染色体标本,研究黑斑蛙的核型、C-带和Ag-NORs。结果表明:(1)黑斑蛙淋巴细胞染色体数目为2n=26,其中有5对大染色体和8对小染色体,核型是二型性核型;(2)分别对雌雄个体的中期分裂相进行观察,在第11号染色体长臂中部有明显的次缢痕,但变异核型次缢痕在第8号染色体长臂的中部;(3)在第5号染色体长臂上有一条明显的近端粒C-带;(4)第11号染色体是一对具有银染核仁形成区的同源染色体,且雌雄个体的银染位置相同。

RhoC-miRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系中稳定表达

目的体外合成RNA干涉小分子构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-RhoC-miRNA真核表达载体,分析其在人卵巢癌细胞SKOV3中稳定表达情况。方法设计并合成单链oligo,经退火形成双链的DNAoligo,将其与线性的pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒连接,构建重组质粒pcD-NATM6.2-GW/EmGFP-RhoC-miRNA真核表达载体,经扩增、筛选、鉴定及测序后,用脂质体法将重组质粒转染SKOV3细胞,筛选稳定转染细胞系、观察转染细胞的形态并进一步通过Western印迹法检测细胞内RhoC蛋白表达。结果重组质粒进行PCR鉴定及DNA序列测定证实DNAoligo已被成功连接到载体中并且序列完全正确;经重组质粒转染的SKOV3细胞24h后的荧光显微镜下观察到少量细胞带有绿色荧光信号,RhoC-miRNA稳定转染的SKOV3细胞形态变圆,折光性增强,收缩不铺展。Western印迹结果显示,与SKOV3细胞株及pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-neg细胞相比,pcDNATM6.2-GW/EmGFP-RhoC-miRNA细胞中RhoC蛋白表达水平明显降低,表明所设计的RhoC-miRNA能有效抑制SKOV3细胞中内RhoC蛋白表达。结论该实验成功构建了RhoC-miRNA真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-RhoC-miRNA,利用脂质体法将其转染卵巢癌细胞后,能有效地抑制细胞内RhoC蛋白表达,为进一步研究RhoC的功能及探讨以RhoC为靶点的基因治疗提供了研究平台。

慢病毒介导的酸性成纤维细胞生长因子基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达及其意义

目的:探讨慢病毒系统介导的实现酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)在MCF-7细胞中的过表达,获得初步稳定并且大量表达FGF-1的细胞株,为研究FGF-1在肿瘤发生及发展中的作用奠定基础。方法:构建FGF-1的慢病毒表达载体pWPXLd-FGF-1,通过与包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293FT细胞进行病毒包装,用包装成功后病毒液侵染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测侵染效率,通过Western blotting检测GFP-FGF-1的融合表达,通过Wound healing实验初步检测FGF-1对细胞增殖及迁移能力的影响。结果:成功构建了FGF-1的慢病毒表达载体,病毒滴度达到2.8×106 TU.mL-1;获得一株大量表达FGF-1的细胞株,FGF-1的转染效率达60%以上,FGF-1对细胞的增殖及迁移具有一定的促进作用。结论:成功构建FGF-1的慢病毒表达载体并且实现在MCF-7细胞中的大量表达。

兔抗Myosin Ⅹ多克隆抗体的制备及初步应用

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ(myosinⅩ,MyoⅩ)多克隆抗体,合成了含有MyoⅩN端1 000～1 021个氨基酸的多肽,将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,KLH)进行交联;通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清,并通过ELISA、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证.结果表明:经过4次免疫后可获得免疫血清,ELISA检测表明抗体终效价达到1∶51 200,抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性.利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中MyoⅩ的表达,发现兔抗MyoⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的MyoⅩ.免疫荧光染色表明该抗体可以显示MyoⅩ在COS-7细胞、NLT细胞和神经元中的分布.

Rap2a在胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨Rap2a在胶质瘤中的表达及其意义。方法应用Western blot检测Rap2a在胶质瘤组织中的表达情况;在胶质瘤细胞U251、U87中转染Rap2a质粒,应用细胞克隆形成实验和Ed U实验检测过表达Rap2a对U251、U87细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测过表达Rap2a对U251、U87细胞周期的影响。结果 Rap2a在胶质瘤组织中呈低表达;过表达Rap2a抑制了U251、U87的增殖;过表达Rap2a明显使细胞U251、U87的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论 Rap2a的蛋白表达水平在胶质瘤组织中表达下调,过表达Rap2a抑制胶质瘤细胞的增殖能力。

关于水泥厂电气设计节能举措的相关探究

在我国城市化规模日益壮大的当下,我国水泥产业在创新改革后,水泥行业在一定程度上取得了阶段性的进展,但是从目前的水泥生产过程上看,还存在着亟需解决的问题,企业若想快速提升水泥生产中的节能和效率,就必须从水泥厂电气设计中的节能措施上入手。本文从水泥厂电气设计节能具体措施进行有效性研究。

使细胞充满活力——记建福水泥厂矿山分厂电工班的班组文化建设

企业文化要溶入到每个员工的思想和行为中并非易事。建福水泥厂矿山分厂电工班在公司提出“做学习型企业”号召后,开展了“创学习型班组,做一流青年文明岗”的主题活动。经过近两年的实践,收到了较好的效果。

动脉瘤破裂致自发性蛛网膜下腔出血继发脑积水的危险因素分析

目的分析动脉瘤破裂致自发性蛛网膜下腔出血患者继发脑积水的危险因素,探讨其临床症状、治疗方法及预后。方法选取徐州医科大学附属医院神经外科2017-01—2019-12入院的动脉瘤破裂性蛛网膜下腔出血患者153例,对其中继发脑积水的38例患者临床资料进行回顾性分析,探讨其继发脑积水的危险因素。结果可能影响动脉瘤破裂性蛛网膜下腔出血患者继发脑积水的危险因素主要有Fisher分级、Hunt-Hess分级、动脉瘤出血部位、出血次数、术中引流方式等。38例患者通过分别实施脑室钻孔外引流、脑室腹腔分流术等治疗,经格拉斯哥预后评分(GOS)痊愈良好20例,轻度残疾13例,重度残疾3例,植物生存2例。结论对于动脉瘤性蛛网膜下腔出血,外科夹闭术中适当地引流、及时地清除积血、术后持续的脑脊液引流有利于降低术后继发脑积水的风险,提高临床治疗效果及患者生存质量。

神经节细胞胶质瘤的临床特点及外科治疗

目的探讨神经节细胞胶质瘤的临床特点及外科手术治疗。方法回顾性分析11例行外科手术治疗的神经节细胞胶质瘤患者的临床和病理资料。结果本组11例患者术后平均随访12个月,预后均良好,均无癫痫再发作及肿瘤复发。结论神经节细胞胶质瘤早期诊断、早期治疗的预后较好,术中神经导航、皮层脑电图、术中超声等多种技术手段,是外科手术全切治疗的关键。

胰十二指肠切除术后胃肠道功能恢复的相关因素分析

目的探讨影响胰十二指肠切除术后胃肠道功能恢复的相关因素,为制定护理对策提供参考依据。方法选取2017年12月—2020年12月在医院接受胰十二指肠切除术的60例患者作为研究对象,根据患者术后胃肠道功能恢复时间将其分为两组,其中胃肠道恢复时间≤7 d者纳入正常组(n=30),胃肠道恢复时间>7 d者纳入较差组(n=30)。采用问卷调查法收集两组患者临床资料,并对其进行单因素分析、多因素Logistic回归分析及接收者操作特性曲线(ROC)分析。结果单因素分析显示,术中出血量、术中补液量、手术时间、疲劳量表(FS-14)评分、胃肠道疾病既往史及腹腔积液史为影响胰十二指肠切除术后患者胃肠道功能恢复的相关因素(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,术中出血量、术中补液量、FS-14评分及手术时间为胰十二指肠切除术后患者胃肠道功能恢复的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,术中出血量>3172.70 ml、术中补液量>4939.77 ml、FS-14评分>9分、手术时间>3.16 h、有腹腔积液史及有胃肠道疾病既往史为影响患者术后胃肠道功能恢复的主要因素(P<0.05)。结论阻碍胰十二指肠切除术后患者胃肠道功能恢复的因素众多,针对术中出血量>3172.70 ml、术中补液量>4939.77 ml、FS-14评分>9分、手术时间>3.16 h以及有腹腔积液史和胃肠道疾病既往史的患者,积极开展护理干预,对促进患者术后胃肠道功能快速恢复具有重要意义。

脑肿瘤术后小腿肌间静脉血栓的形成因素与转归

目的探讨脑肿瘤术后小腿肌间静脉血栓形成因素与转归。方法对2018-11—2019-10徐州医科大学附属医院神经外科治疗的69例脑肿瘤接受脑部肿瘤手术患者的临床资料进行回顾性分析。所有患者术后3 d内应用彩色多普勒超声检查双下肢静脉血栓情况。通过手术时间、年龄、术后脱水药物使用及性别因素对小腿肌间静脉血栓形成的影响进行统计分析。术后3个月电话通知小腿肌间静脉血栓患者来院行双下肢静脉彩色多普勒超声检查,观察小腿肌间静脉血栓的转归。结果17例患者术后发生小腿肌间静脉血栓,发生率24.63%。脑肿瘤术后未发生血栓组52例,年龄1~70(48.59±12.59)岁,手术时间(3.36±1.53)h,男女性别比20∶32,术后脱水药物使用与未使用比例40∶12。小腿肌间血栓组17例患者年龄35~75(56.00±10.61)岁,手术时间(3.78±1.13)h,男女性别比4∶13,术后脱水药物使用与未使用比例14∶3。手术时间、性别、是否术后应用脱水药物在脑肿瘤术后未发生血栓组与发生小腿肌间血栓组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组年龄比较差异有统计学意义(P<0.05)。3个月后通过双下肢进行彩色多普勒超声检查,17例小腿肌肉静脉血栓完全溶解。结论小腿肌间静脉血栓可发生于脑肿瘤患者术后,其形成的因素与手术时间、性别、术后是否应用脱水药物无关,与患者年龄有关。肌间静脉血栓在3个月后可以溶解。

PHAP1通过AKT信号通路调控脑胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的探讨人类白细胞抗原关联蛋白1(putative HLA-associated protein1,PHAP1)是否通过蛋白激酶B信号通路进而影响胶质瘤细胞的增殖。方法应用Western blotting检测PHAP1在胶质瘤组织中的表达水平。用CCK-8实验检测沉默或者过表达PHAP1对U251和U87细胞增殖能力的影响;用免疫印迹法检测沉默或者过表达PHAP1对AKT/p27/Stathmin信号分子的影响;裸鼠体内验证PHAP1对胶质瘤移植瘤生长的作用。结果PHAP1在胶质瘤组织呈高表达。CCK-8实验显示,沉默PHAP1后胶质瘤细胞U251和U87的增殖能力下降,而过表达PHAP1后U251和U87细胞的增殖能力增强。Western blotting检测证实沉默PHAP1后,AKT活化显著下降,从而导致下游p27表达水平增高和Stathmin蛋白表达水平降低,过表达PHAP1产生相反的效应。进一步裸鼠体内实验验证,沉默PHAP1抑制胶质瘤移植瘤的生长。结论PHAP1可以通过调控AKT/p27/Stathmin信号通路,从而促进胶质瘤的增殖。

综合康复方案联合心理干预对老年肌少-骨质疏松症患者的影响

目的:探讨综合康复方案联合心理干预对老年肌少-骨质疏松症(SOP)患者的影响,以期为SOP患者的康复提供合理方案。方法:前瞻性选取徐州医科大学附属医院2021年3至2021年8月收治的64例老年SOP患者为研究对象,按照随机数字表法将所有的患者分为观察组和对照组,每组32例。对照组予以常规干预,观察组在对照组的基础上予以综合康复方案联合心理干预。观察两组患者骨骼肌肉恢复情况、机体功能、骨密度以及心理状况。结果:干预6个月后两组患者外周骨骼肌质量(ASM)、外周骨骼肌指数(SMI)以及握力均较干预前以及干预3个月后上升,且观察组高于对照组(P<0.05)。干预6个月后两组患者平衡测试、4 m步速测试、5次椅上坐-站测试评分均较干预前以及干预3个月后上升,且观察组高于对照组(P<0.05)。干预6个月后两组患者骨密度较干预前以及干预3个月后上升,且观察组高于对照组(P<0.05)。干预3个月后以及干预6个月后两组患者心理痛苦与管理筛查工具量表(DMSM)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分均较干预前下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:综合康复方案联合心理干预可促进老年SOP患者骨骼肌肉恢复,提升机体功能,改善骨密度及心理状况,是老年SOP患者的理想康复方案,值得临床借鉴应用。