基质金属蛋白酶在稽留流产发生中的作用和调控机制研究

目的研究基质金属蛋白酶在稽留流产患者绒毛组织中的表达变化,探讨其在稽留流产中的作用及其调控机制。方法选取2015年11月至2016年5月期间就诊于苏州大学附属第一医院计划生育门诊和苏州市立医院北区妇产科的稽留流产患者30例作为实验组,同期健康早孕流产患者30例作为对照组。采用ELISA法检测血浆TGF-β1水平,定量PCR(RT-PCR)检测患者绒毛组织中NF-κB、TGF-β1、TIMP-1和MMP-9的mRNA表达情况,采用蛋白印迹法(Western Blot)检测分析NF-κB、TGF-β1、TIMP-1和MMP-9的蛋白水平。结果实验组血浆中TGF-β1的平均水平低于对照组(P<0.05);实验组绒毛组织中MMP-9的mRNA表达量高于对照组,而NF-κB1、TGF-β1和TIMP-1mRNA表达量均低于对照组(P<0.05);实验组绒毛组织中MMP-9的蛋白表达水平高于对照组,NF-κB p50、TGF-β1和TIMP-1的蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论 NF-κB表达水平的降低导致TGF-β1水平降低,从而影响MMP-9/TIMP-1的平衡,使ECM过度降解,导致胚胎植入失败及胎盘形成障碍,最终发生胚胎停育。

去氧肾上腺素介导的孕期母体高盐饮食对子代肾血管功能影响的研究

目的探讨母体高盐饮食对子代肾脏血管发育的影响及其相应机制。方法自然怀孕的Sprague-Dawley大鼠随机分为高盐组和对照组,高盐组孕鼠怀孕期间给予含8%NaCl的高盐饲料,对照组给予含1%NaCl的正常饲料,两组孕鼠均正常饮水。子代出生后,所有母鼠恢复正常饲料,新生鼠正常哺乳至1个月分笼。取成年子代公鼠肾脏叶间动脉进行血管功能检测、单个血管平滑肌(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞电生理实验。结果高盐组子代肾脏小动脉对去氧肾上腺素(phenylephrine,Phe)引起的收缩反应强于对照组(P<0.05),蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)非选择性阻断剂GF109203X对Phe收缩反应的作用两组间差异也有统计学意义(P<0.05);电生理实验结果显示:Phe在两组子代肾脏小血管VSMC中,均可抑制大电导钙激活性钾通道(high-conductance Ca^(2+)-activated K+channel,BK通道)电流,但在高盐组的作用更为明显(P<0.05),GF109203X的存在使BK电流在Phe作用前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论孕期高盐饮食可能通过改变Phe介导的成年♂性子代肾脏小动脉血管收缩的敏感性、PKC对BK通道的调控作用,从而影响其肾脏血管功能的发育,并可能由此增加其子代肾脏疾病发生的易感性。

复发性流产中基质金属蛋白酶的调控机制研究

目的 探讨复发性流产(RSA)患者绒毛组织中基质金属蛋白酶(MMPs)的调控机制。 方法 选取2016年2—5月期间就诊于苏州大学附属第一医院妇产科计划生育门诊的RSA患者24例为RSA组,同期健康早孕流产患者26例为对照组,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测患者绒毛组织中TNF-α、IL-1β、核转录因子(NF)-κB、核转录因子抑制蛋白(IκB)β、MMP-9和MMP-2的mRNA表达情况,采用蛋白印迹法检测分析NF-κB、IκBβ、MMP-9、MMP-2的蛋白表达。 结果 ①RSA组血浆中TNF-α水平为(2.84±0.62) μg/L,显著高于对照组的(1.32±0.43) μg/L (P=0.047)。②RSA组绒毛组织中TNF-α、NF-κB1、RelA、MMP-9 mRNA相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.001、P=0.003、P<0.001),IkBβ mRNA表达量显著低于对照组(P=0.011);③ RSA组绒毛组织中MMP-9、NF-κB p65和p50的蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P=0.001、P=0.001、P<0.001),IκBβ的蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.001)。 结论 外周血中TNF-α水平的升高,可影响绒毛组织中IκB蛋白的降解,活化NF-κB使其表达水平升高,进一步导致MMP-9表达升高,从而引起蜕膜细胞外基质过度降解导致胚胎脱落,最终导致流产发生。

孕期高盐饮食对雄性子代肠系膜动脉肾素-血管紧张素系统功能的影响

目的探讨孕期高盐饮食对雄性成年子代肠系膜动脉功能的印记效应及相关机制。方法将自然受孕的雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为高盐组和对照组，每组8只。在孕1~21 d，高盐组和对照组分别给予氯化钠含量为8%和1%的饲料。2组孕鼠均正常饮水。分娩后，高盐组孕鼠恢复正常氯化钠含量（1%）的饲料。2组新生鼠生后均正常哺乳至1月龄分笼。分别收集新生期（2 d）及成年期（18~20周龄）的雄性子代大鼠的血浆，检测血浆肾素活性（plasma renin activity，PRA）、血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）和抗血管紧张素1型受体自身抗体（anti-angiotensin type 1 receptor-autoantibodies，AT1-AA）水平。取成年雄性子代大鼠的肠系膜动脉，进行血管功能和单个血管平滑肌细胞的电生理试验，检测肾素-血管紧张素系统在血管舒缩功能及平滑肌细胞层面上对钾离子通道作用的影响。采用双因素方差分析，对数据进行统计学分析。结果（1）高盐组新生雄性子代大鼠（2日龄）血浆Ang Ⅱ水平低于对照组[分别为（15.06±2.77）和（21.33±1.81）ng/L，P〈0.01]。成年后，2组雄性子代大鼠的血浆PRA、Ang Ⅱ和AT1-AA水平差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。（2）在高盐组，浓度为10-8.5~10-5 mol/L的Ang Ⅱ所引起的肠系膜动脉收缩反应明显强于对照组。AT1阻断剂氯沙坦几乎可以完全阻断2组Ang Ⅱ引起的肠系膜动脉的收缩效应，而在AT2阻断剂PD12331阻断前后，2组Ang Ⅱ引起的肠系膜动脉收缩反应的差异均无统计学意义。（3）Ang Ⅱ对2组血管动脉平滑肌细胞的全钾电流均有抑制作用，但对高盐组的抑制作用明显强于对照组。2组中，氯沙坦均可部分阻断Ang Ⅱ对全钾电流的抑制作用，而PD12331几乎不能阻断Ang Ⅱ对全钾电流的抑制作用。结论孕期高盐饮食可使雄性成年子代肠系膜动脉对Ang Ⅱ引起的收缩更加敏感，且该改变与Ang Ⅱ通过AT1受体介导的血管平滑肌细胞的全钾电流抑制程度加深有关。孕期高盐饮食可能通过影响成年雄性子代微血管功能，增加高血压等血管疾病的发生风险。