鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育及肠黏膜屏障功能的影响

为了为鸭疫里默氏菌与机体的相互作用及作用机制研究提供基础数据,以雏鸭为研究对象,开展鸭人工感染鸭疫里默氏菌试验,分别测定感染组和对照组1、2、3、5、9、14 d等不同时间段的体质量、小肠各肠段的长度以及血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶含量;荧光定量PCR法检测肠黏膜屏障功能相关基因MUC2和MYLK的表达量,探讨鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育和肠黏膜屏障功能的影响。结果表明,与对照组相比,感染组5、9 d体质量显著降低;感染鸭疫里默氏菌5 d十二指肠和空肠的长度显著降低;感染鸭疫里默氏菌1 d血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶的含量均显著增加;鸭人工感染鸭疫里默氏菌的MUC2和MYLK表达量在十二指肠和空肠主要表现为下调,而在回肠MUC2的表达量表现为先下降再上调,MYLK的表达量表现为先下调再恢复至对照水平。综上,鸭人工感染鸭疫里默氏菌会减缓鸭的体质量增长和小肠生长,引起鸭的肠黏膜屏障功能相关基因的表达发生变化。

鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定

本研究根据金定鸭个体蛋质量情况,选择2种极端表型,分为高蛋质量组(WH)和低蛋质量组(WL)。基于混池全基因组重测序和选择清除分析技术筛选组间差异显著基因组区域内的单核苷酸多态性(SNP)位点及相关功能基因,并通过单个样本重测序对筛选的蛋质量相关SNP进行验证,分析各SNP位点不同基因型之间的蛋质量大小差异。研究发现,在低蛋质量组和高蛋质量组获得的高质量reads数量分别为194115424和228089084,共定位到SNP差异显著区间178个,共富集到受选择候选基因40个,而且这些区间和基因均位于Z号染色体。鉴定出候选基因ARSB上Z-22908831、Z-22966695突变位点显著影响300 d、450 d蛋质量,RORB上Z-35251072、Z-35256947突变位点显著影响450 d蛋质量,RORB上Z-35278196突变位点显著影响300 d、450 d蛋质量,RASEF上Z-39588570突变位点显著影响450 d蛋质量。本研究结果为通过分子育种技术提高蛋鸭产蛋性能选育提供了依据,加快了选育进程。

鸭TRPM3基因与产蛋性状的关联性分析

为探讨鸭瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员3(TRPM3)基因与鸭产蛋性状的相关性,采用Illumina高通量测序法对90只金定鸭TRPM3基因序列进行测序,分析TRPM3中6个SNP位点的基因型频率及与不同基因型鸭产蛋数和蛋质量的关联性,并将各突变位点组成单倍型后与鸭产蛋数和蛋质量差异进行相关性分析,采用荧光定量PCR方法检测TRPM3 mRNA在产蛋数高和产蛋数低组鸭卵巢及输卵管中的表达差异。结果表明,TRPM3基因中Z-36500134 T>C,Z-36503668 A>C,Z-36534782 G>A,Z-36684262C>T,Z-36710928 A>G,Z-367324876 G>A单个核苷酸的突变均引起产蛋数显著降低,蛋质量显著增加。鸭TRPM3基因存在4种单倍型,其中TAGCAG单倍型为优势单倍型,该单倍型与鸭产蛋量呈极显著正相关,与蛋质量呈极显著负相关。鸭TRPM3基因在产蛋数高和产蛋数低组输卵管中的表达差异不显著,在产蛋数低组卵巢中的表达量显著低于其在高产蛋组卵巢中的表达量。以上结果说明,TRPM3在鸭的产蛋性能中可能发挥重要作用,而且可能是通过影响卵巢的功能而影响其产蛋性能。

基质固相分散萃取-高效液相色谱法检测鸡组织中均三嗪类药物残留

本研究建立了基于基质固相分散萃取（MSPD）-高效液相色谱紫外检测法（HPLC／UVD）的同步检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的快速、高效和经济的新方法。正交试验优化后的基质固相分散萃取的最佳条件如下，预混有地克珠利和妥曲珠利混合标准溶液的0．5g鸡组织匀浆在研钵中与2gC18填料研匀，静置2～5min后装萃取柱；萃取柱自底层到上层依次装入玻璃棉、1．5g无水Na2SO4、样品混合物、0．5g无水Na2SO4；压紧后依次用8mL正己烷、8mL甲醇水溶液（1：4，V／V）淋洗，8mL甲醇洗脱，收集洗脱液，50℃旋转蒸发，0．5mL流动相溶解，过0．22μm滤膜后进样检测。最佳色谱条件为C18分析柱（250mm×4．6mmi．d．，5μm）；流动相：0．05mol／L H3PO4-三乙胺（pH3．0）-乙腈（40＋60）；流速：1．0mL／min；检测波长：240nm，AUFS=0．05；进样体积：20μL；柱温：20℃。该检测方法的定量线性范围为50～1000μg／L。在50、500和1000ng／g的添加水平，地克珠利和妥曲珠利从鸡组织中的回收率范围为71．1％～84．0％，相对标准偏差的范围为3．8％～12．1％；同时方法的日内和日间相对标准偏差范围为3．70％～6．77％。地克珠利的检出限为8ng／g（肌肉）和10ng／g（肝、肾），妥曲珠利的检出限为7ng／g（肌肉）和10ng／g（肝、肾）；地克珠利的定量限为12ng／g（肌肉）和15ng／g（肝、肾），妥曲珠利的定量限为10ng／g（肌肉）和15ng／g（肝、肾）。

同时检测2种均三嗪类抗球虫药物残留的样品前处理方法的比较

以均三嗪类抗球虫药物地克珠利和妥曲珠利的鸡组织残留样品为研究对象,采用高效液相色谱(HPLC)分离,紫外(UV)检测,采用乙腈萃取-蒸发浓缩、乙腈萃取-固相萃取(SPE)、基质固相分散萃取(MSPD)和MSPD-SPE4种方法对鸡组织中含地克珠利和妥曲珠利残留的样品的前处理效果进行了比较。前3种方法的平均回收率均达到70%以上,能满足残留分析的要求。其中MSPD方法与其他方法相比,节约时间60%以上,节约溶剂也达60%。鉴于此,采用基质固相分散萃取作为鸡组织样品的前处理方法,建立了鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的MSPD-HPLC/UV同时分析检测方法。在优化的色谱条件下,方法的线性范围为50～1000μg/L;在50,500,1000μg/kg的添加水平下,地克珠利和妥曲珠利在鸡组织中的回收率为71.13%～84.02%,相对标准偏差(RSD)为3.76%～12.11%;方法的日内和日间测定的RSD范围为3.70%～6.77%。地克珠利和妥曲珠利的检出限均小于10μg/g,定量限均小于20μg/kg。该方法在准确度、精密度上均达到了残留分析的要求。

基于线粒体CO Ⅰ基因15个鸡种的DNA编码研究

【目的】探明地方鸡种与引进鸡种遗传多态性特点,探讨COⅠ这一特定基因的特定区段作为DNA条形码在识别鸡种方面的可行性和有效性。【方法】以13个中国地方鸡种和2个国外引进品种为研究对象,利用DNA测序技术测定了线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidaseⅠ,COⅠ)基因部分序列。【结果】选择的这段COⅠ基因序列有38个突变位点,15个鸡种单倍型多样度平均为0.963,核苷酸多样度平均为0.00518,其中引进鸡种明显低于地方鸡种(除藏鸡外);15个鸡种品种间Kimura双参数遗传距离为0.056%—0.917%,种内遗传距离为0—0.346%,15个鸡种的DNA分类和形态学分类基本一致,引进鸡种与地方鸡种分歧较远。【结论】利用线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)这一特定基因的特定区段来做DNA条形编码的基础,进行不同鸡品种鉴定,具有可行性和有效性。

鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留HPLC检测方法的建立

建立了同时检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的高效液相色谱。经乙腈提取，正己烷脱脂，旋转蒸发浓缩后，以0．05mol／L磷酸／三乙胺（pH3．0）：乙腈（40：60）作为流动相，反相高效液相色谱-紫外检测法检测，检测波长240nm。鸡组织中地克殊利和妥曲珠利的回收率分别为92．0％～102．0％和83．4％～89．0％，变异系数为5．9％～12．2％，地克珠利和妥曲珠利的检测限分别为0．012mg／kg和0．010mg／kg，在0．05～110mg／L质量浓度范围内呈良好的线性相关。该法样品处理简单，可同时检测地克珠利和妥曲珠利的残留，且准确度和精密度均符合残留分析的要求。

高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中9种化学合成类抗球虫药多残留

建立了鸡肉中氯羟吡啶、二硝托胺、4,4'-二硝基均二苯脲(尼卡巴嗪代谢物)、磺胺氯吡嗪、磺胺喹口恶啉、地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利砜和妥曲珠利亚砜9种化学合成类抗球虫药多残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品采用2%乙酸酸化的乙腈/二甲亚砜(4∶1,v/v)提取,150 mg二甲基十八碳硅烷粉(octadecylsilyl,ODS)、100mg石墨化炭黑(graphitized carbon black,GCB)和100 mg弗罗里硅土(Florisil)吸附剂分散固相萃取净化,经Hyper-sil GOLD C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,电喷雾串联四极杆质谱多反应离子监测方式测定。9种分析物在20～150μg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.995。样品基质中9种分析物在20、50和150μg/kg加标水平下,平均回收率为81.5%～103.6%,相对标准偏差为4.5%～14.5%。该方法稳定、可靠,可满足鸡肉中化学合成类抗球虫药多残留的检测与确证。

分光光度法测定鸡蛋黄卵磷脂含量

建立鸡蛋黄卵磷脂含量快速测定的分光光度检测方法。将鸡蛋黄用95%的乙醇溶液处理,分离蛋黄脂质。粗提的蛋黄脂肪经高氯酸-硝酸消化液消化后与钒钼酸铵反应,于分光光度计400 nm处进行比色测定磷含量,再乘以系数25即为卵磷脂含量。在0.5 g空白样品中分别添加50μg、100μg和200μg3个不同量的磷标准溶液,测定回收率。磷标准曲线在0～25μg/ml浓度内呈线性相关,相关系数(r)为0.994。回收率为84.3%～93.4%,精密度为1.93%～2.90%。该方法符合食品卫生分析要求,可用于鸡蛋黄卵磷脂含量分析。

不同鸡种鸡蛋品质及营养成分比较研究

为了比较不同鸡种鸡蛋品质的差异,本研究以海兰褐、京白939、苏禽青壳蛋鸡、如皋黄鸡4个鸡种为试验素材,采用笼养的饲养方式,测定不同鸡种常规蛋品质和营养成分含量。结果表明,4个鸡种中苏禽青壳蛋黄比率、蛋黄蛋白比最大,海兰褐最小,差异极显著(P<0.01);海兰褐蛋形指数最小,如皋黄鸡最大,差异显著(P<0.05);京白939蛋壳颜色最浅,海兰褐最深,差异极显著(P<0.01)。4个鸡种中苏禽青壳蛋鸡鸡蛋维生素A和胆固醇含量极显著高于海兰褐(P<0.01),维生素E含量显著高于京白939(P<0.05),水分含量极显著低于海兰褐(P<0.01);海兰褐蛋鸡鸡蛋脂肪和氨基酸含量显著低于其它鸡种(P<0.05)。4个鸡种中苏禽青壳鸡蛋硒含量最高,京白939最低(P<0.05);京白939和海兰褐磷含量相对高于苏禽青壳和如皋黄鸡(P<0.05)。可见不同鸡种对鸡蛋常规品质以及营养成分均具有一定的影响。

不同品种鸡蛋部分营养成分比较分析

为研究不同品种鸡蛋的营养成分,本试验以300日龄的罗曼褐、"京红1号"、海兰褐、新杨褐、海赛克斯褐、伊莎褐6个品种的商品代以及苏禽青壳蛋鸡、文昌鸡,总共8个品种所产的鸡蛋为研究对象,测定其干物质、粗蛋白、粗脂肪、磷脂、胆固醇和钙、磷、镁、铁、铜、锰、锌、硒等营养成分含量。结果表明:8个品种鸡蛋的粗蛋白、胆固醇含量差异不显著(P>0.05),干物质、粗脂肪和磷脂差异显著(P<0.05);矿物元素中钙、镁、铁、锌、铜含量在8个品种鸡蛋间无显著差异(P>0.05),而磷、锰、硒含量存在显著和极显著差异(P<0.05,P<0.01)。

铽增敏高效液相色谱柱后衍生荧光检测法同时检测鸡肉中的三种氟喹诺酮类药物残留

基于氟喹诺酮类药物与铽离子形成配合物后的荧光增强作用,建立了同时检测鸡肉中氟喹诺酮类（FQs）药物环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星残留的Tb^3＋增敏高效液相色谱（HPLC）柱后衍生荧光检测方法。优化的实验条件如下：流动相为0.05mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液（pH6.0）-乙腈（体积比为89∶11）,色谱柱为Hypersil BDS-C18,柱温40℃,流速0.8mL/min;Tb^3＋浓度为8×10^-5mol/L;衍生反应温度40℃,衍生泵流速0.5mL/min;荧光检测激发波长271nm,发射波长545nm。实验结果表明,将上述3种药物以1.0,10.0,50.0,100.0ng/g水平添加到鸡肉后的回收率范围为66.3%-88.0%,相对标准偏差（RSD）均小于15.0%。定量分析的线性范围为0.1-500ng/mL,方法的日内和日间RSD均小于13.0%;最低检出限分别为0.05（环丙沙星）、0.05（诺氟沙星）和0.08（恩诺沙星）ng/g,比前人报道的非衍生高效液相色谱荧光检测法检测FQs药物的灵敏度有极大的提高。该项研究为FQs药物多残留检测提供了灵敏度更高的新方法。

内毒素对仔鸡血浆SOD活性及MDA水平的影响

为了探讨大肠埃希菌O55∶B5的内毒素(LPS)对仔鸡的损伤机理,将168只仔鸡随机分成4组(n=42),即对照组,100 mg/kgLPS组,200 mg/kg LPS组,300 mg/kg LPS组。灌服内毒素后,分别于2,4,8,12,24,48 h和72 h处死鸡(各时间点均为6只),测定血浆SOD活性和MDA浓度。结果表明,与对照组相比,各剂量组鸡血浆SOD活性均明显降低,MDA含量均明显升高(P<0.05)。且各剂量组之间SOD活性随攻毒剂量的增加而降低,随时间的延长先降低后升高;MDA含量随攻毒剂量的增加而升高,随时间的延长先升高后降低。表明一定量内毒素能诱发鸡体内氧自由基的产生,显著降低机体中SOD的活性和提高MDA的含量。

病原体相关分子模式与免疫识别受体研究进展

对“自我”和“非我”的区分是免疫系统抵抗病原侵入和维持机体处于平衡状态的先决条件。1989年，美国耶鲁大学免疫学家Janeway 在冷泉港会议上提出了细菌、病毒、真菌等外来微生物存在与机体完全不同的独特结构成分，即病原体相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns ， PAMPs），而机体内的天然免疫系统细胞上存在可识别PAMP的模式识别受体（ Pattern-recognition receptors ， PRRs ）这一假说。1996年Hoffmann等通过对含Toll基因突变的果蝇研究证实了这一假说。

不同品种鸡蛋中胆固醇含量比较

鸡蛋是人们日常生活中主要的食物来源之一，它富含蛋白质、卯黄素、卵磷脂等，同时又是人体所需的各种维生素和矿物元素的良好来源。然而鸡蛋的蛋黄中含有大量的胆固醇，过多的摄入可引起高血脂、血栓进而引发动脉粥样硬化等一系列心血管疾病。随着人们保健意识的增强，希望能少摄入高胆固醇的食品。

三聚氰胺对黄羽肉鸡生长性能和血液生化指标的影响

选择1日龄健康黄羽肉鸡500只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复25只鸡。在5个处理组基础日粮中分别添加0、0.25%、0.5%、0.5%、3.0%的三聚氰胺,进行为期42d的饲养试验,研究三聚氰胺对肉仔鸡生长性能和血液生化指标的影响。试验结果表明:在基础日粮中添加三聚氰胺可显著降低黄羽肉鸡的平均体重(P<0.05)。在血液生化指标方面,总蛋白与白蛋白含量各试验组间无显著差异(P>0.05);3.0%三聚氰胺添加组黄羽肉鸡血液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿酸含量与对照组相比显著提高(P<0.05);尿素氮含量3.0%添加组高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。以上结果初步表明三聚氰胺对黄羽肉鸡的生长有一定的危害性。

高棉籽粕饲粮对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响研究

为了研究高棉籽粕饲粮对蛋鸡生产性能及鸡蛋品质的影响,试验选用26周龄海赛克斯褐蛋鸡60只,随机分为试验组和对照组,试验组饲喂30%的棉籽粕,为期28d,研究高棉籽粕饲粮对蛋鸡生长性能、蛋品质以及对鸡蛋储存后品质的影响。结果表明:①高棉籽粕饲粮对蛋鸡生产性能、鸡蛋常规品质没有显著影响(P>0.05)。②采用物性分析仪测定鸡蛋弹性,当天产新鲜鸡蛋没有出现弹性,经4℃贮藏7d后开始出现弹性,即出现所谓的"橡皮蛋",14d鸡蛋弹性最为明显。经贮藏2周后,试验组鸡蛋蛋黄、蛋白色泽没有变化,无褐色斑点。

棉籽粕对海赛克斯蛋鸡生产性能及蛋品质的影响

为研究不同含量棉籽粕对海赛克斯蛋鸡生产性能和蛋品质的影响，试验选用37周龄海赛克斯蛋鸡120只，随机分为4个组，每组设3个重复，每个重复10只。第1组为空白组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组，棉籽粕添加量分别为5％、10％、15％，试验周期为10周，观察不同棉籽粕用量对海赛克斯蛋鸡生产性能、蛋品质的影响。结果表明：日粮中添加5％-15％的棉籽粕，蛋鸡的平均产蛋率、平均蛋重、料蛋比与对照组相比，均有下降的趋势，但差异不显著（P〉0．05）；蛋壳强度、蛋壳厚度、哈氏单位、蛋形指数均无显著差异（P〉0．05），随着棉籽粕的增加其蛋黄色泽升高，15％添加组蛋黄色泽升高12％，与对照组差异显著（P〈0．05）。试验表明当饲料中添加15％棉籽粕时，对海赛克斯蛋鸡的产蛋性能和蛋品质的影响不明显，但是否对动物的健康及食品安全有影响，还需进一步系统研究。

小鹅瘟病毒常州株的鉴定及其致弱研究

从具有小鹅瘟典型症状、病变的病死雏鹅病料中分离到疑似小鹅瘟病毒常州株GPV/JSCZ/2004/01。通过磷钨酸负染经透射电镜观察可见细小病毒样病毒粒子,取死亡胚尿囊液浓缩后与GPV阳性多抗血清作用显示有阳性琼扩线出现,通过GPV特异性引物和相应的PCR试验,扩增出了特异性的DNA条带。研究结果表明分离到小鹅瘟病毒常州株。对常州株第3代毒进行番鸭胚半数致死量(ELD50)测定,为10-3.1/0.2mL。将分离毒GPV/JSCZ/2004/01感染鹅胚成纤维细胞(GEF)并连续传代培养,结果显示该毒株在细胞培养传代到第9代时能用单抗介导的间接免疫荧光试验检测到病毒在GEF的感染,表明产生了细胞适应毒(CZ-ca)。取第14代细胞毒(CZ-ca14)10倍比稀释测定TCID50,同时进行雏鹅致病性试验,结果显示细胞毒的TCID50为10-9.4/0.2mL,对雏鹅的发病率和死亡率为0,但原始分离株的发病率和死亡率为100%。研究结果进一步证明小鹅瘟强毒株通过连续细胞传代培养可以达到致弱效果,为小鹅瘟病毒致弱研究提供了参考。

油乳佐剂及其安全性研究进展

油乳佐剂是免疫佐剂的一种,能使多种抗原产生高滴度抗体,是动物疫苗中应用最广泛的佐剂之一。但此种佐剂在发挥佐剂效应的同时,也会来带一些安全性问题,如应激反应、矿物油的残留等。因此,本文拟对油乳佐剂的作用机理、分类、应用以及潜在的安全性问题等作简要综述,并进一步指出有待研究的问题,为后续开展白油佐剂的相关研究提供参考。