糖蛋白糖链的分析

糖蛋白是蛋白与糖类的共价复合物,结合于蛋白肽链上的糖链具有重要的生物学功能。对糖蛋白上的糖链进行分析,要经过糖链释放、分离不同类型糖链、相对分子质量测定及糖链测序等步骤。本文简要介绍糖蛋白糖链分析各步骤的常用方法、各种方法的特点、适用范围等。

人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析

目的： 在毕赤酵母菌中表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白.检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析.方法： 从人淋巴细胞中提取总RNA, 经RT-PCR扩增目的基因sTNFRⅡ与IgG Fc, 然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRⅡ-IgG Fc, 并将其插入pPIC9载体中.以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达.采用ELISA筛选高表达sTNFRⅡ-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株, 对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构, 采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性, 最后利用荧光辅助糖电泳（FACE）分析融合蛋白的N-糖链.结果： 成功地建立了可分泌表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株, 摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2 mg/L.SDS-PAGE和Western blot表明, 该融合蛋白能自然形成二聚体结构; 可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用, 其中和5×10^4 U/L TNF-α的EC50为170 μg/L.FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11 ～13个糖残基.结论： 在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白, 为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考.

人脑视觉意识的神经机制

意识的存在决定了人类生命的意义.意识问题被认为是21世纪科学要回答的一个最重要问题.意识科学正在成为认知和心理科学的皇冠,成为基础科学的顶峰.近20年来,随着认知科学、心理科学、神经科学和脑成像技术的发展,人们开始通过实验科学地研究意识问题,特别是与视觉意识相关的研究工作取得了很多重要进展.在这篇综述中,我们对以往的视觉意识研究工作进行了总结,并对未来的研究方向进行了展望.