应用宏基因组二代测序诊断异基因造血干细胞移植后早期侵袭性真菌病患者的临床分析

目的 分析异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)后早期应用宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)诊断侵袭性真菌病(invasive fungal disease, IFD)患者的临床转归。方法 回顾性分析2021年7月至2022年10月在浙江大学医学院附属第一医院接受allo-HSCT患者,移植后早期(100 d内)出现以下情况之一:(1)经验性抗细菌治疗72 h及以上持续发热,且血培养阴性患者;(2)既往抗感染有效后再次出现不明原因高热;(3)下呼吸道症状合并肺部CT病灶,经验性抗感染治疗无效。送检移植后外周血或支气管镜肺泡灌洗液行mNGS检测,并分析患者的总体生存率(overall survival, OS)和非复发死亡率(non-relapse mortality, NRM)。结果 纳入60例患者,送检外周血标本47例,肺泡灌洗液标本13例。mNGS检测病原学阴性组19例,非真菌阳性组30例,真菌阳性组11例;真菌阳性组中曲霉菌3例、毛霉菌5例、热带念珠菌2例、阿萨丝孢酵母菌1例。11例真菌阳性患者经调整抗真菌治疗8例获完全缓解。60例患者1年OS和1年NRM分别为70.0%(95%CI:64.1%~75.9%)和20.0%(95%CI:11.9%~32.5%)。真菌阳性组1年OS为54.5%(95%CI:49.5%~69.5%),1年NRM为36.4%(95%CI:15.5%~70.3%);阴性组、真菌阳性组和非真菌阳性组1年OS (P=0.487)和1年NRM (P=0.358)差异无统计学意义。真菌阳性组与非真菌阳性组OS(P=0.238)和NRM (P=0.154)上的差异亦无统计学意义。结论 mNGS可快速诊断allo-HSCT后早期IFD,有利于及时有效治疗,改善患者的预后。

马利兰和环磷酰胺预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征

目的:评估以马利兰和环磷酰胺(Bu-CY2)为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法:对6例MDS患者进行非亲缘异基因骨髓移植术,以Bu-CY2为预处理方案,Bu 4 m g.k-g 1.d-1,-7 d^-4 d,CY 60 m g.k-g 1.-d 1,-3 d^-2 d。输入单个核细胞数(MNC)为3.38×108/kg(2.4×108/kg^4.6×108/kg),CD 34+细胞数5.81×106/kg(1.2×106/kg^8.5×106/kg),粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)数2.88×105/kg(1.61×105/kg^4.56×105/kg)。以霉酚酸酯加环孢素A(C sA)和短程氨甲蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病,前列腺素E1脂质微球预防肝静脉阻塞病。结果:6例患者中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为18 d(13~21 d),血小板≥20×109/L的中位时间为21 d(13~24 d)。经DNA短串联重复序列多态性分析和染色体检查,均为供者骨髓植活。早期死亡率为0,移植后随访时间为27个月(6~60个月)。目前实际无病生存6例,缓解期实际生存率100%。结论:以Bu-CY2为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植是治疗MDS的有效方法。

端粒重复序列结合因子在肾脏肿瘤中的表达水平

目的 :研究 TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤及相应癌旁组织中的表达水平。方法 :定量分析肾组织中 TRF1蛋白的表达水平 ,应用经倍比稀释的 TRF13 3 -2 77纯化蛋白作为定量标准 ,建立了以抗 TRF13 3 -2 77单抗作定量 Wes-tern- blot的方法 ,并以该方法检测 TRF1蛋白在组织中的表达水平。结果 :32例肾肿瘤样本均不同程度的表达TRF1蛋白质 ,均值为 2 .4 2 8± 1.35 2 μg/ μl,癌旁自身对照组织 TRF1的表达水平为 3.6 11± 1.92 2 μg/ μl(t=5 .776 ,P<0 .0 0 1)。肿瘤组织内 TRF13 3 -2 77表达水平较相应癌旁组织显著降低 ,并与肿瘤的恶性程度相关 ,差异具有显著性意义 (P<0 .0 1)。结论 :TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤中的表达明显减低 ,并与肿瘤恶性程度呈负相关。

人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究

为了研究人端粒重复序列结合因子(TRF1)蛋白质在急性白血病(AL)及正常骨髓组织中的表达水平,AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系,定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平,并应用经倍比稀释的TRF133-277纯化蛋白质作为定量标准,建立以抗TRF133-277单克隆抗体的定量Westernblot的方法,而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平;另外,应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性,以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明:20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低,差异具有显著性(P<0.01);急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低,但差异无统计学意义(P>0.05);化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高,但仍低于正常(P<0.01);化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高,差异具有显著性(P<0.01);AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人(P<0.05)和首次缓解者(P<0.01);初发未治时,ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关(P<0.001)。结论:TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低,且与疗效及端粒酶活性相关。

造血干细胞移植相关性口腔粘膜炎的研究现状及治疗进展

移植相关性口腔粘膜损伤是造血干细胞移植常见而严重的毒副作用之一,其病理生理可能涉及到粘膜基质细胞损伤和化疗导致的粒细胞减少引起的局部感染。本文对这一并发症的研究现状及治疗进展作一综述。

一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆

目的 :分离和鉴定端粒结合因子 (TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因。方法 :以 TRF1抗体应用免疫共沉淀方法 ,从细胞蛋白抽提物中分离 TRF1蛋白复合物 ,并作蛋白质肽指纹谱鉴定 ;应用温度梯度 PCR,从人 c DNA文库中扩增目的基因 ,并构建 p EGFP- C2真核表达载体 ;核苷酸测序和 Western blot验证目的基因序列和表达载体。结果 :从 TRF1免疫沉淀复合物中分离出了 Tara蛋白 ;人 c DNA文库中 PCR扩增所得产物为 1.7kb,与 Tara基因 CDS序列同源性为 99.9% ;GFP/ Tara融合蛋白约 10 0 k D,Tara在间期 He La细胞中弥散表达于胞浆 ,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞。结论 :Tara是一个可能的 TRF1相互作用蛋白 ,其作用机制需进一步实验研究。

格列卫联合清髓性异基因造血干细胞移植治疗慢性髓性白血病

目的：探讨格列卫联合清髓性异基因造血干细胞移植在治疗慢性髓性白血病（CML）中的作用。方法：9例CML患者（5例CP，2例为AP，2例为BP），男性，在清髓性异基因造血干细胞移植前、后口服格列卫（300600mg／d）治疗，移植预处理方案为BuCy2：Bu16mg／kg，口服（6例）或12.8mg／kg，静脉滴注（3例）加CTX120mg／kg。供受者HLA配型完全相合，其中亲缘移植7例，无关供者移植2例。以霉酚酸酯联合环孢菌素A和短程MTX预防aGVHD。移植物有核细胞数5．3（3.7～8．7）×10^8／kg，CD34^＋细胞数4．8（2．8～8．5）×10^6／kg，粒一巨噬细胞集落形成的单位数2．8（1．9～5.3）×10^5／kg。结果：9例CML患者在移植前，经格列卫治疗后获完全血液学缓解（HCR）。移植后中性粒细胞〉0．5×10^9／L中位时间12（8～26）天，血小板计数〉20×10^9／L中位时间为20（8～25）天。移植后并发Ⅰ／Ⅱ度aGVHD3例，cGVHD4例，无早期死亡。移植后30天9例患者均获完全细胞遗传学缓解（CCR），STR检测供髓完全植入。中位随访31（7～34）月，1例治疗前CML急变患者移植后4月因复发死亡，其余病患均获完全分子学缓解（CMR），总体无病生存率88．9％。结论：清髓性异基因造血干细胞移植前、后联合格列卫治疗CML，是一种安全有效的治疗方法，值得临床进一步推广。

Pin1在恶性血液病细胞和细胞周期中的表达

目的 :研究 Pin1(肽酰脯胺酰顺反式易构酶 )在髓系、淋系 10种恶性血液病细胞株中的表达情况以及其与不同细胞周期的关系。方法 :利用 Realtime- PCR检测血液病细胞株的 Pin1表达 ,同时用 Thymidine和 Nocoda-zole将细胞阻断在不同的细胞周期 ,用 Realtime- PCR及 Western Blot的方法 ,检测 Pin1的 m RNA和蛋白的表达水平。结果 :Pin1在恶性血液病细胞株中 m RNA的表达明显高于正常人骨髓单个核细胞的表达 (F=10 .5 0 8,P<0 .0 1) ,其在髓系血液病细胞株和淋系恶性血液病细胞株中的表达均较正常人骨髓单个核细胞明显增高 (分别为 F= 13.5 84 ,P<0 .0 1;F=5 .339,P<0 .0 5 )。 Pin1在 G1期 m RNA的表达水平显著高于 S期 (F=4 0 .5 72 ,P<0 .0 5 ) ,S期与 M期比较没有明显差异 (F=8.30 9,P>0 .0 5 )。但在蛋白水平上来看 Pin1的变化不明显。结论 :Pin1的 m R-NA在恶性血液病细胞中呈高表达 ,其表达水平与细胞周期有关 ,其中以 G1期为最高 ,S期最低。

人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究

目的 :研究人端粒结合因子 1(telomere repeatbinding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法 :应用分子克隆技术扩增 TRF1基因全长 (TRF1FL )和 N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列 ,并克隆入 p EGFP- C2真核表达载体 ,表达绿色荧光 (GFP)融合蛋白 ;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性 Hela细胞和端粒酶阴性 WI38- 2 RA细胞 ,Western Blot验证目的蛋白分子量 ,荧光显微镜观察 TRF1在间期细胞和染色体的定位 ;利用药物阻断 He La细胞于不同周期 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,半定量 Western Blot检测 TRF1在不同细胞周期中的表达。结果 :TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为 1.3kb和 0 .9kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为 80 k D和 6 0 k D。TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达 ,在染色体则表达于染色体未端 ,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达 ;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML )共定位 ,在端粒阳性细胞中则没有共定位。TRF1在 He La细胞中以 M期表达量最高 ,G1/ S表达最低 ,M期表达量是 G1/ S期的 3.9倍 (t=12 .92 ,P<0 .0 1)。结论 :TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式 ,在 He L a细胞中

^(18)F-FDG PET/CT检测初发DLBCL患者骨髓浸润的应用价值

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)最常见的一种病理类型,在临床表现、病理形态和遗传学特征方面表现高度异质性,病死率较高,临床预后差异较大。目前主要通过国际预后指数(International Prognostic Index,IPI)和改良国际预后指数(National Comprehensive Cancer Network-International Prognostic Index,NCCN-IPI)来评估患者预后,而骨髓浸润作为一个结外病变除了影响Annor Arbor分期还影响NHL的国际预后指数。^(18)F标记的氟代脱氧葡萄糖正电子发射型计算机断层扫描CT(18F-fluorodeoxyglucose positron emission tomography computed tomography,18F-FDG PET/CT)作为一种集功能代谢显像和解剖结构显像为一体的先进影像技术,除能正确描述病灶的形态和功能,还能检测到常规影像学检查所忽略的淋巴结和脾脏、骨髓等结外器官受累,能够更好反映全身受累情况。在初发的DLBCL患者中,行PET/CT检查不仅能够准确进行临床分期,而且能够更好制定治疗方案及病情监测。^(18)F-FDG PET/CT在DLBCL中的分期及预后应用价值已经比较明确,但对骨髓浸润的检测仍存在较多争议。本文就18F-FDG PET/CT在DLBCL中对检测骨髓浸润的应用价值进行综述。

霉酚酸诱导T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4凋亡的作用及机制

目的:研究霉酚酸(Mycophenolicacid,MPA)诱导T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4凋亡的作用及其机制。方法:光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡的形态学特征,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪分析细胞AnnexinV表达、周期变化及caspase-3活性。人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji作为对照。结果:MPA诱导Molt-4细胞的凋亡率与作用浓度和时间成正比;细胞被阻滞于S期。MPA作用24h后细胞内caspase-3活性增高,呈浓度依赖性。MPA不诱导Raji细胞凋亡。结论:MPA可诱导Molt-4细胞凋亡,其作用可能与激活caspase-3有关。

异基因外周血干细胞移植术后中毒性表皮松解症临床分析

目的总结异基因造血干细胞移植后中毒性表皮松解症(TEN)诊治经验。方法分析3例表现为TEN的造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)。结果3例TEN均发生于外周血干细胞移植后,表现为皮肤水疱及表皮松解,合并高热、肠炎或肝损害,经给予有效的免疫抑制剂,联合营养支持及相应护理措施,皮损均消退。结论TEN是皮肤GVHD最严重的类型,需采用针对aGVHD的免疫抑制为主的综合治疗。

血浆置换对异基因造血干细胞移植术后急性移植物抗宿主病治疗评价

目的探讨血浆置换(p lasm a exchang,PE)对异基因造血干细胞移植(a llogene ic hem atopo ietic stemce ll transp lan tation,A llo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(acu te graft versus host d isease,aGVHD)的疗效、临床意义及可能机制。方法对8例免疫抑制剂控制不佳的aGVHD患者进行了1~2次血浆置换治疗,单次置换量为2 500m l^4 000 m l,观察疗效;同时用放射免疫法测定血浆置换前后患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果8例患者均取得了较好的治疗效果(显效者3例,占37.5%),其中aGVHD的胃肠道症状缓解尤为明显,血浆置换后患者血清中TNF-α水平明显低于治疗前(P=0.018)。结论血浆置换能有效改善aGVHD症状,对于免疫抑制剂效果不佳,或在减量过程中复发患者均有一定效果。其机制可能为降低血清中细胞因子水平,尤其是TNF-α的水平。

急性髓系白血病17年后复发1例

患者 男性，57岁，凶确诊白血病17年余，肌肉酸痛伴发热3天于2006年7月3日入本院。患者17余年前骨髓涂片提示：原单＋幼单82％，诊断为急性单核细胞白血病（AML—M5）。予柔红霉素（DNR）＋阿糖胞苷（Ara-C）方案化疗（DNR60mg／d，3d；Ara—C150mg／d，7d），获部分缓解。第二疗程继续DA方案巩固化疗达骨髓缓解（BMR）。

谷氨酰胺双肽在异基因造血干细胞移植中的应用

目的:探讨谷氨酰胺双肽(DPT)对异基因造血干细胞移植患者并发症及恢复的影响。方法:40例异基因造血干细胞移植患者随机分为应用DPT加全肠外营养液组(DPT组,20例)和单用全肠外营养液组(对照组,20例),检测应用DPT前1天、第7天及第28天的血清白蛋白、总蛋白、肌酐、总胆红素、白细胞及淋巴细胞计数,并分析两组患者中性粒细胞恢复时间、体重下降程度、出层流室时间以及关于感染、急性移植物抗宿主病(aGVHD)等情况。结果:两组血清白蛋白于第7天均明显下降,第28天DPT组能恢复至原水平,而对照组无恢复,两组差异有统计学意义;两组总胆红素均无异常波动。DPT组淋巴细胞恢复较对照组迅速,两组差异有统计学意义。移植后DPT组和对照组发生临床感染例数分别为10例和16例,细菌培养阳性结果分别为11例次和17例次,总抗生素应用天数分别为(16.5±10.6)d和(25.4±16.3)d,差异均有统计学意义;两组肠炎持续时间分别是(4.7±4.5)d和(8.2±6.0)d,体重下降分别是(2.0±2.0)kg和(3.3±1.6)kg,出层流室时间分别是(49.2±18.8)d和(58.0±20.2)d,差异有统计学意义;而两组aGVHD发生率差异无统计学意义。结论:添加DPT的全肠外营养可改善异基因造血干细胞移植患者的营养状态,减少感染及肠、肝损害,不增加aGVHD的发生,有利于异基因移植?

移植前使用α干扰素对慢性粒细胞白血病患者非亲缘异基因骨髓移植预后的影响

目的了解α干扰素(IFN-α)在移植前使用对慢性粒细胞白血病(CML)患者非亲缘异基因骨髓移植(URD-BMT)预后的影响。方法分析总结行URD-BMT的CML第1次慢性期(CP1)患者53例,其中BMT前未用IFN-α治疗组23例,用IFN-α治疗组30例;其中疗程≤12个月22例,>12个月8例。采用单因素分析和Cox比例风险模型分析移植前使用IFN-α对CML患者URD-BMT后植入效果、急性移植物抗宿主病(GVHD)发生及患者5年存活率的影响。结果经Cox模型多元回归分析,患者年龄、性别、确诊至URD-BMT的时间、停IFN-α距URD-BMT时间对生存率无影响;各组的总生存率、无病生存率、非复发死亡率、植活率、复发率、植入失败率、急性GVHD和慢性GVHD发生率差异均无统计学意义均(P>0.05)。结论本文资料所列条件下,移植前使用IFN-α不会对URD-BMT产生不利影响。